Задание 2. Сложные методы окраски. Результаты отразить в следующей таблице:
| Материал | Ход исследования | Результат |
| Смесь из двух культур для окраски (Грам+ и Грамм– бактерии) | а) приготовление препарата; б) окраска по Граму; в) микроскопия | |
| Культура спорообразующих бактерий | а) приготовление препарата, окраска по Ожешко и простым методом; б) микроскопия | |
| Мокрота больного (для выявления кислотоустойчивых микобактерий) или демонстрационный препарат. Работа с клиническим материалом проводится под руководством преподавателя | а) приготовление препарата, окраска по Циль-Нильсену; б) микроскопия; в) зарисовка | |
| Культура бактерий рода Klebsiella,демонстраци-онный препарат, окрашен-ный по Бурри-Гинса | а) приготовление препарата, окраска по Бурри-Гинсу; б) микроскопия; в) зарисовка |
Характеристика метода Грама представлена в следующей таблице:
| Цель применения | Для отличия грамположительных и грамотрицательных, что является важным таксономическим признаком |
| Реактивы: - красящие раст-воры; - протрава; - дифференциру-ющее вещество | 1. Карболовый генцианвиолет или фильтро-вальная бумага, пропитанная раствором этой краски. 2. Водный раствор фуксина или пропитанная раствором карболового фуксина фильтровальная бумага. 3. Раствор Люголя (300 мл дистилированной воды 1,0 йода и 2,0 KI). 4. Этиловый спирт |
| Способ фиксации | В пламени горелки |
| Этапы окраски | 1. На фиксированный мазок поместить филь-тровальную бумагу, пропитанную генцианвио-летом, смочить ее водой, выдержать 2–3 мин. 2. Снять бумагу, слить с препарата оставшу-юся краску и налить раствор Люголя на 1 мин. 3. Слить раствор Люголя, слегка просушить препарат. Провести дифференциацию спиртом, налив спирт на мазок. 4. Тщательно промыть препарат водой. 5. Дополнительно докрасить препарат с помощью карболового фуксина в течение 2 мин. 6. Промыть водой, просушить |
| Сущность метода | При окраске генцианвиолетом и последующем воздействии раствором Люголя образуется комплексное соединение краски с йодом, которое при дифференциации спиртом удерживается в клетках грамположительных бактерий (остаются фиолетовыми) и удаляются из грамотрицательных (при дополнительной ок-раске фуксином приобретают красный цвет) |
| Результат (описа-ние микроскопической картины) | Например: грамположительные микрококки, стафилококки (сине-фиолетового цвета), грамотрицательные палочки (красного цвета) |
По этой же форме ведется запись и других сложных методов окраски. Схемы заполняются дома при подготовке к занятию.
В следующей таблице представлены методы определения подвижности бактерий:
| Прямой | Косвенный |
| Приготовление и мик-роскопия из живых культур микроорганизмов: 1) висячая капля (световая и фазово-контрастная микроскопия); 2) раздавленная капля | Культивирование в полужидких средах (0,4 %-й агар). Засев производят: а) уколом прямой петли до середины агарового слоя. В процессе роста подвижные бактерии мигрируют от линии инокуляции, образуя диффузную мутную зону, тогда как неподвижные растут только по ходу петли; б) в полужидкую среду помещают открытую с обоих концов стерильную стеклянную трубочку, в которую вносят инокулят. Подвижные бактерии мигрируют вниз, выходят из нижнего конца трубочки и начинают двигаться вверх к поверхности среды, где усиленно растут. Этот метод пригоден и для селекции высокоподвижных штаммов, например, для приготовления Н-Аг |
