Тема: Методы клинических исследований рыб

 

Цель: изучение клинических и патологических методов для выявления группы или природы ядов, что позволяет определить причину гибели рыб в естественных водо­ёмах.

Материал и оборудование: рыбы, отравленные токсикантом, 2 аквариума с чистой водой, набор инструментов, кювета, скальпель, ножницы, препаровальные иглы.

Задание

1 Сравните поведение отравленной и контрольной рыбы.

2 Проведите паталогоанатомические исследования опытной рыбы.

3 Сделайте вывод.

 

Содержание

Клинические ипатологические исследования больных и погибших рыб позволяют определить группу и природу яда, т.е. причину гибели рыб в естественных услови­ях Они проводятся по общей схеме, принятой в ихтиопатологии, включающей:

1 Изучение поведения рыб в аквариумных условиях.

2 Внешний осмотр.

3 Патологическое вскрытие.

 

Ход работы

Рыбу, отравленную токсикантом и контрольную, поместить в аквариумы с чистой водопроводной водой и проследить за их поведением, частотой и ритмом дыхания, подвижностью, реакцией на различные раздражители (свет, стук по стеклу, прикосновение, электроток).

Результаты наблюдений запишите в таблицу. Затем проведите внешний осмотр от­равленной рыбы. Установите наличие или отсутствие трупного окоченения, изогнутости тела, отметьте положение жаберных крышек, жабр, обследуйте кожные по­кровы (цвет, наличие слизи), состояние чешуи, плавников, состояние брюшка, рото­вой полости, анального отверстия, глаз.

Вскройте рыбу, разрезая брюшную стенку по общепринятому методу. Исследуйте скелетную мускулатуру, брюшную полость, обращая особое внимание на расположение и состояние внутренних органов (раз­мер, характер краев, цвет, консистенция, кровоизлияния, некроз). Для извлечения голоного мозга сделайте три разреза крышки черепной коробки: один из них поперечный по заднему краю затылочной кости и два продольных в направлениях к носовым отверстиям. Обратите внимание на состояние жира, кровеносных сосу­дов, цвет и консистенцию мозга. Запишите результаты исследования рыб в таблицу и сделайте вывод о природе или принадлежности исследуемого токсиканта к той или иной группе ядов.

 

Таблица – Результаты клинических исследования рыбы

Показатели	Контроль	Опыт
Поведение рыб
Результаты внешнего осмотра
Результаты осмотра внутренних органов и тканей

 

Вопросы для контроля:

1 Какова схема проведения клиникопатологического анализа в ихтиопатологии?

2 Как проводится внешний осмотр отравленной рыбы?

3 Что дают результаты патологоанатомического вскрытия отравленных рыб?

 

Лабораторная работа № 15

Тема: Выявление токсиканта в организме рыб

 

Цель: изучение методов выявления токсиканта в организме рыб.

Материалы и оборудование: рыбы, отравленные токсикантом, колба, чашка Пет­ри, пипетка, дистиллированная вода, набор инструментов (кювета, скальпель, нож­ницы, препаровальные иглы).

 

Задание

1 Приготовьте три рыбы, отравленные токсикантами со специфическими запа­хами.

2 Определите природу и название токсических веществ, которыми отравлены рыбы.

3 Сделайте вывод.

Содержание

Яды промышленных сточных вод и пестициды имеют определенные места лока­лизации в организме рыб. Так, соли тяжелых металлов кумулируются, в основном, в накожной слизи, жабрах, печени, почках, желудочном тракте. Хлорорганические со­единения концентрируются в висцеральном жире, пилорических придатках, половых продуктах. Фосфорорганическне соединения локализуются, в основном, в паренхи­матозных органах и жире, свинец – в почках и печени, и т.д. Такие токсичные вещества можно определить аналитически, взяв на анализ тот или иной орган.

В случае безуспешного количественного определения концентрации яда химико-аналитическим путем проводят органолептическне исследования, заключаю­щиеся в определении токсикантов по запаху. Органолептически можно определить яды со специфическим запахом, такие как, фенол и его производные, нефть и про­дукты се перегонки, смолы, дегти, камфору, ментол, смоляные кислоты, формальде­гид, формалин и др. Органолептическое исследование рыб проводят пробной варкой.

Установлено, что запахи и привкусы больше концентрируются в тканях, бога­тых жиром (нервная, жировая) в брюшной полости и на боках рыбы, в то время как в хвостовой части запахов значительно меньше. Дистилляцией нервной и жировой ткани можно сконцентрировать запахи, что повышает порог их восприятия.

 

Ход работы

Возьмите рыбу, отравленную токсикантом со специфическим запахом и мелко нарежьте на кусочки мышцы брюшной полости и печень. Поместите их в колбы, за­лейте дистиллированной водой, накройте стеклом или чашкой Петри и нагрейте до кипения. После закипания бульона приподнимите стекло, осторожно понюхайте пар и определите токсикант.

 

Вопросы для контроля:

1 Где в основном локализуются яды в организме рыб?

2 Как определяют природу ядов в организме рыб, не имеющих запахов?

3 Как определяют природу ядов в организме рыб, имеющих запахи?

 

Лабораторная работа № 16

Тема: Обследование водоема и выявление источника загрязнения (1)

Цель: изучение методов выявления токсиканта в водоеме (общие сведения).

Материалы и оборудование: теоретические сведения.

Задание

1 Изучить последовательность возникновения, определенное сочетание и выраженность симпто­мов, а также характер течения отравления рыб.

2 Изучить степени тяжести отравления.

Содержание

Отравления рыб диагностировать очень сложно, так как они часто возникают внезапно, протекают в быстро изменяющихся условиях среды, проявляются недостаточно специфичными признаками.

При подозрении на отравление необходимо решить ряд вопросов: произошла ли гибель рыб от токсикоза или от заразного заболевания, действия неблагоприятных факторов среды, недоброкачественного кормления и т.п.; от чего и когда наступила смерть животных; каким отравляющим веществом вызвана гибель рыб; каким путем оно попало в водоем и организм; какие факторы способствовали отравлению рыб; известны ли подобные случаи из практики или специальной литературы? Ввиду разнообразия обстоятельств отравления круг вопросов может быть расширен. Чтобы получить максимально полные сведения, диагностику отравлений осуществляют комплексно по следующей схеме:

1 Общее обследование водоема и выявление источника загрязнения;

2 Изучение и оценка клинической картины отравления;

3 Патологоанатомическое вскрытие рыб;

4 Биологические и органолептические исследования;

5 Лабораторные исследования;

6 Оценка результатов комплексных исследований и заключение.

В случае массовой гибели рыб проводят комиссионное обследование водоема или рыбоводного хозяйства с участием специалистов ветеринарной и ведомственной ихтиопатологической службы, органов рыбоохраны, водного хозяйства, санитарно-эпидемиологической станции и представителей местного Совета народных депутатов.

Его начинают с опроса очевидцев, осмотра акватории и берегов водоема, анализа имеющейся документации о масштабах материального ущерба, данных по гидрологии, гидробиологии водоемов и т.п.

При этом определяют участки и места концентрации пораженных и погибших рыб, уточняют время появления признаков поражения и характер его течения, видовой и возрастной состав пораженных рыб и других гидробионтов. Визуально оценивают состояние водоема, его дна, береговой зоны, степень зарастания.

На месте определяют температуру, рН, прозрачность, запах, окраску воды, содержание в воде кислорода и двуокиси углерода, а также проводят клини­ческие наблюдения и патологоанатомическое вскрытие пораженных и погибших рыб.

Берут пробы воды, рыбы, грунта и других объектов для химико-токсикологических исследований. Уточняют наличие промышленных предприятий, ком­мунально-бытовых, сельскохозяйственных объектов, сбрасывающих сточные воды в водоем. Собирают сведения о масштабах, ассортименте и сроках применения пестицидов и удобрений в сельском и лесном хозяйствах.

При необходимости обследуют подозреваемые источники загрязнения. От технологов на промышленных предприятиях получают данные о количестве и химическом составе сточных вод, проверяют надежность работы очистных сооружений и чистоту сбросных вод, используя материалы ведомственных химических лабораторий и бассейновых инспекций.

Для расчета степени разбавле­ния и установления зоны распространения вредных веществ, возможности сноса и смыва ядохимикатов и удобрений пользуются сводками гидрометео­службы об уровне, направлении и скорости течения воды, ветровых волнениях водоема, температуре воздуха и воды, осадках и т.д. Учитывают время и ме­ста кормовых и нерестовых миграций рыб. Эти сведения позволяют определить условия, способствовавшие отравлению, и объяснить причины массового по­ражения того или иного вида рыб, их возрастной группы.

Клинический осмотр отравленных рыб проводят по схеме, принятой в ихтиопатологии. Осматривают 50-100 экз. рыб, а затем выборочно вскрывают 15-20 шт. каждого вида и возраста.

В первую очередь изучают поведение рыб в естественном водоеме или в аквариуме, учитывают реакцию рыб на внешние раздражители, положение тела в воде, подвижность и координацию движений, наличие спазмов муску­латуры и судорог, частоту и ритм дыхания и т.д.

Многие отравления клинически могут протекать сходно с рядом других заболеваний. Поэтому для их дифференциации важное значение имеют: последовательность возникновения, определенное сочетание и выраженность симпто­мов, а также характер течения болезни.

Острые отравления возникают внезапно, характеризуются кратковременным течением, массовой гибелью разных видов и возрастных групп рыб, ракообразных, лягушек, моллюсков и других гидробионтов. Кривая смертности рыб имеет характерную (языкообразную) форму с крутым подъемом в начале (первые 2-3 сут) и пологим спуском в последующие 10-30 сут интоксикации.

В клинической симптоматике отравлений рыб выделяют ряд стадий: начальное беспокойство, уменьшение или повышение возбудимости, нарушение равновесия, атаксия и стадия разрешения, заканчивающаяся восстановлением нарушенных функций, гибелью животных или переходом в хроническое отравление.

По тяжести проявления симптомов условно различают легкую, среднюю и тяжелую степень острого отравления.

При легком течении (начальной стадии) интоксикации симптомы слабо выражены, отмечают нарушение возбудимости, ориентации рыб в воде, замедление или ускорение плавания, изменение частоты дыхания, «кашель».

Средняя степень (стадия иммобилизации) отличается бурным проявлением типичных признаков отравления: потерей равновесия, нарушением координации движения (плавание в боковом положении, по кругу, спирали, штопорообразно и т.п.), тремором мускулатуры и судорогами.

Тяжелая степень (агония) характеризуется угнетением, полной депрессией, потерей рефлексов, замедлением движения, опусканием на дно и гибелью рыб.

Хронические отравления протекают длительно в стертой, иногда бессимптомной форме, сопровождаются постепенной гибелью отдельных рыб. Отмеченные выше симптомы появляются в отдаленные сроки и незначительны. Рыбы перестают питаться, теряют массу, отстают в росте и развитии, ослаб­ляется их устойчивость к инфекционным и инвазионным болезням, а также неблагоприятным факторам среды.

Важное место в диагностике токсикозов занимают гематологические и биохимические показатели, отражающие избирательное действие ядовитых веществ. Так, для отравления фосфорорганичсскими и частично карбанатными пестицидами характерно сильное угнетение активности ацетилхолинэстеразы (АХЭ) крови и головного мозга рыб. Неспецифические изменения в морфологическом составе крови, содержании сахара и гликогена, общего белка используют для диагностики в том случае, если они закономерно повторяются и носят стабильный характер.

Патологоанатомическое исследование включает в первую очередь количественный учет трупов рыб и других гидробионтов. При внешнем осмотре устанавливают вид, возраст рыб, регистрируют основные изменения внешних покровов и естественных отверстий. По трупному окоченению и степени разложения судят о времени гибели рыб.

Большинство трупов рыб находятся на дне и там разлагаются. Всплывшие трупы прибиваются ветром к берегам, а больные рыбы являются легкой добычей для рыбоядных птиц. Замечено, что у окуневых рыб трупное окоченение наступает быстро, они всегда лежат брюшком вверх с широко раскрытым ртом и жаберными крышками. Карповые рыбы, наоборот, находятся на боку, рот и жаберная полость прикрыты.

При отравлении ядами нервно-паралитического действия (пестициды и др.) трупное окоченение наступает гораздо быстрее и сильнее выражено, чем веществами местного раздражающего и наркотического действия. С повышением температуры воды разложение трупов ускоряется, что затрудняет правильную оценку морфологических изменений. Многие отравления рыб сопровождаются повышением секреции слизи на коже и жабрах. Механизм этого процесса и состояние слизи бывает неодинаковым. Кислоты и тяжелые металлы способны коагулировать слизь, она становится густой, творожистой, плохо отделяется. Щелочи, соли щелочноземельных металлов и аммиак разжижают ее, в результате чего она быстро смывается, происходит истощение ее запасов и поверхность тела становится суховатой, а чешуя шероховатой.

Дифференцированно следует подходить и к оценке точечных, пятнистых и полосчатых кровоизлияний на туловище, плавниках, жаберных крышках, глазах. Их обнаруживают не только при отравлениях, но и ряде других болезней. Так, серповидные кровоизлияния на склере глаз служат одним из признаков асфиксии и наблюдают при псевдомонозе. Выраженное пучеглазие, ерошение чешуи, брюшная водянка встречаются только при некоторых токсикозах смешанного характера, например при токсической водянке. В этих случаях отмечено помутнение, изъязвление и прободение роговицы глаза. В то же время многие резорбтивные яды (пестициды и др.) не вызывают существенной местной реакции.

Жабры являются важнейшим органом всасывания и выведения ядовитых веществ из организма рыб. Различные токсиканты оказывают на жабры рефлекторное, раздражающее и реже некротизирующее действие. Поэтому к постоянным компонентам большинства токсикозов рыб относят различные фор­мы нарушения кровообращения в жаберном аппарате: застой крови, кровоизлияния, анемия, токсический отек.

Микрокартина проявляется отслое­нием и набуханием респираторного эпителия, гипертрофией и пролиферацией слизистых и хлоридных клеток, дистрофией эпителия, что приводит к утол­щению лепестков, сглаживанию рисунка, увеличению объема и дряблости жабр, выпячиванию их из-под жаберных крышек. Вещества локального действия в высоких концентрациях вызывают диффузную десквамацию эпителия инекроз ткани. При хроническом отравлении некоторыми веществами (напри­мер, аммиаком) наблюдается очаговый некроз жабр.

При вскрытии брюшной полости обращают внимание на ее содержимое, топографию и внешний вид органов, их консистенцию, размеры, степень кровенаполнения, окраску крови, серозных и слизистых оболочек, а также нали­чие запаха того или иного химического вещества.

В брюшной полости при острых отравлениях нередко обнаруживают прозрачный транссудат (жидкость), иногда с примесью крови. Брюшина и серозные покровы органов отечны, изредка встречаются мелкоточечные кровоизлияния.

Внутренние органы, особенно печень и почки кровенаполнены, темно-красного цвета, дряблой консистенции, селезенка не увеличена, темно-вишневого цвета. Околосердечная полость, венозный синус и предсердие нередко (например, при действии пестицидов) сильно переполнены свернувшейся кровью. Заметные изменения в слизистой кишечника наблюдают только при поступлении ядов перорально. В головном мозге обнаруживают отек и дистрофию нейронов, застойную гиперемию.

Картина хронических отравлений отличается снижением упитанности рыб, общей анемией и мышечной гидратацией, побледнением и атрофией печени и других органов.

Поскольку патологоанатомические изменения недостаточно специфичны, а лишь ориентируют на наличие отравления, то для их уточнения и более достоверной оценки проводят гистологические исследования. Это дает возможность дифференцировать отравления от патологических процессов, вызванных другими причинами, а также различать формы токсикозов.

 

Вопросы для контроля:

1 Как проводится обследование водоема на наличие токсических веществ?

2 Какие степени отравления рыб токсикантами известны?

3 На что надо обращать особое внимание при вскрытии отравленной рыбы?

Лабораторная работа № 17