1. Изучите онто- и филогенетическую классификацию эпителия.
2. Изучите вопрос о регенерационной способности эпителиальных тканей.
3. Подготовьте доклад о развитии различных эпителиев.
4. Детально ознакомьтесь с процессом ороговения многослойного плоского ороговевающего эпителия.
5. Окрасьте парафиновый срез кожи новорожденного и взрослого животного азур 2-эозииом. Сравните толщину эпидермиса и степень развития его слоев па препаратах кожи новорожденного и взрослого животного.
6. Приготовьте живой препарат эпителия трахеи лягушки. Изучите под микроскопом движение ресничек.
7. Проверьте свои знания по теме эпителий и железы с помощью ЭВМ.
ЛИТЕРАТУРА
Основная
Гистология / Под ред. Афанасьева Ю. И., Юриной Н. А. М.: Медицина, 1989, с. 136-151.
Елисеев В. Г., Афанасьев Ю. И., КотовскийЕ. Ф. Атлас микроскопического и ультрамикроскопического строения клеток, тканей и органов. М.: Медицина, 1970, с. 40-54.
Дополнительная
Заварзин А. А. Основы сравнительной гистологии.— Л.: Изд-во ЛГУ, 1985.
Кнорре.А Г. Эмбриональный гистогенез. — Л.: Медицина, 1971.
Хэм А., Кормак Д. Гистология. М: Мир, 1983. Т. 2, с 31-121.
Тема
КРОВЬ И ЛИМФА
Кровь и лимфа являются особыми разновидностями тканей мезенхимального происхождения, образующими внутреннюю среду организма (вместе с рыхлой неоформленной соединительной тканью). Они имеют жидкую консистенцию и состоят из двух основных компонентов: плазмы (межклеточного вещества) и взвешенных в ней форменных элементов. Основными функциями крови являются: 1) транспортная — перенос кислорода от легких к тканям и углекислоты от тканей к легким (дыхательная функция), доставка питательных веществ от места их поступления к месту их усвоения (трофическая) и транспортировка гормонов и ферментов от места их выработки к местам их активного действия; 2) гомеостатическая — кровь участвует в поддержании постоянства внутренней среды организма; 3) защитная — кровь обеспечивает гуморальный и клеточный иммунитет, фагоцитоз.
Плазма крови представляет собой жидкость, содержащую 90-93% воды и 7-10% сухого вещества, в котором имеется 6,6-8,5% белков и 1,5-3,5% органических и минеральных соединений.
К форменным элементам крови (клеткам крови) относят эритроциты, лейкоциты, кровяные пластинки (тромбоциты).
Эритроциты (erythrocytic) — безъядерные клетки, не способные к делению. Количество эритроцитов в 1 мкл у взрослых мужчин — от 3,9 до 5,5 млн, у женщин — от 3,7 до 4,9 млн. Основная функция эритроцитов дыхательная. Большинство эритроцитов имеет форму двояковогнутого диска (дискоциты), часть — сферическую (сфероциты) или отросчатую (эхиноциты). Форма диска обеспечивает наибольшую поверхность контакта с плазмой. Значительная вариабельность форм эритроцитов называется пойкилоцитозом. Диаметр большинства эритроцитов (нормоцитов — normocytus) колеблется от 7,16 до 7,98 мкм, микроцитов (microcytic) — 6 мкм и меньше, макроцитов (macrocytus) —свыше 8,5 мкм. Повышенная вариабельность размеров эритроцитов носит название анизоцитоз. Большинство зрелых эритроцитов оксифильны (окрашиваются эозином в розовый цвет), однако около 1% молодых эритроцитов являются полихроматофильными, т. е. красятся кислыми и основными красками. В результате суправитального окрашивания бриллиант-крезиловым синим в их цитоплазме выявляется синяя сеточка. Поэтому эти клетки называются также геморетикулоцитами (hacmorctioulocytus).
Лейкоциты (leucocytus), У взрослого человека в 1 мкл насчитывается 3800-9000 лейкоцитов. Увеличение числа лейкоцитов в крови называется лейкоцитозом, а снижение — лейкопенией. Все лейкоциты являются ядерными формами клеток, способными к активному перемещению.
Зернистые лейкоциты характеризуются наличием сегментированного ядра и специфической зернистости в цитоплазме, незернистые лейкоциты — несегментированным ядром и отсутствием специфических гранул в цитоплазме. В группе зернистых лейкоцитов по окрашиванию их цитоплазматических гранул различают ацидофильные (эозинофильные) гранулоциты (гранулы окрашиваются эозином в ярко-розовый цвет), базофильные (гранулы окрашиваются основными красками в темно-синий или фиолетовый цвет) и нейтрофильные (содержат очень мелкую зернистость розовато-фиолетового цвета, т. е. они окрашиваются кислыми и основными красителями). Все зернистые лейкоциты, особенно нейтрофилы, способны к фагоцитозу. Нейтрофилы активно участвуют в остром воспалении, развивающемся в ответ на любое повреждение. Эозинофилы и базофилы кроме того принимают участие в аллергических реакциях, при этом число эозинофилов в крови повышается. К группе незернистых лейкоцитов относят лимфоциты и моноциты.
В клинике определяют количество гемоглобина в крови, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в 1 мкл, процентное соотношение лейкоцитов в крови. Запись количественных показателей крови принято называть гемограммой. Процентное соотношение лейкоцитов называют лейкоцитарной формулой крови. Лейкоцитарная формула входит в гемограмму.
Нейтрофильиые гранулоциты (granulocytic neutrophilicus) составляют 65-75% от общего количества лейкоцитов. Среди нейтрофильных лейкоцитов различают сегментоядерные, палочкоядерные и юные формы. Подавляющую часть лейкоцитов составляют сегментоядерные нейтрофилы — 60-65%. Их диаметр на мазке равен 9-12 мкм. Ядра зрелых нейтрофилов состоят из 2-5 сегментов, связанных перемычкой. Ядерные сегменты содержат компактный хроматин (гетерохроматин). От одного из сегментов ядра нейтрофила может отходить небольшой вырост, имеющий у женщин форму барабанной палочки — это тельце полового хроматина. Характерной чертой цитоплазмы являются многочисленные мелкие гранулы. В нейтрофилах различает два типа гранул: специфические (вторичные гранулы), составляющие большую часть, и азурофильные, неспецифические (первичные гранулы). Первичные гранулы являются лизосомами (рис. 17).
Рис. 17. Схема ультрамикроскопического строения гранулоинтов:
а — сегментоядерный нейтрофильный гранулоцит; б - эозинофильный гранулоцит; в — б азофильный гранулоцит; 1 — сегменты ядра; 2 —половой хроматин; 3 — первичные (азурофильные) гранулы; 4 — вторичные (специфические) гранулы; 5 — зрелые специфические гранулы, содержащие кристаллоиды; 6 — гранулы базофила различной величины и плотности; 7—периферическая зона, не содержащая органелл; 8— микроворсинки и псевдоподии (рис. Н. А. Юриной, Л. С. Румянцевой)
Палочкоядерные нейтрофильные гранулоциты составляют 3-5%. Ядра этих клеток имеют вид изогнутой палочки или буквы S. Юные нейтрофильные гранулоциты содержат бобовидное ядро. В крови они встречаются редко (0-0,5%). В лейкоцитарной формуле слева записывают число юных нейтрофилов, правее — палочкоядерных и еще правее — сегментоядерных. Поэтому увеличение числа молодых форм нейтрофильных гранулоцитов называют «сдвигом влево». Он свидетельствует об усилении кроветворения, что нередко наблюдается при наличии в организме воспалительного процесса, когда из красного костного мозга выходят молодые формы нейтрофильных гранулоцитов. Функция нейтрофильных гранулоцитов защитная — фагоцитоз бактерий.
Эозинофильные гранулоциты — эозинофилы (granulcytus еosinophilius) составляют от 1 до 5% от общего числа лейкоцитов. Их диаметр 12-14 мкм. Ядра эозинофилов имеют, как правило, два сегмента, иногда больше. В цитоплазме содержатся специфические гранулы округлой, овальной или полигональной формы. Оксифильность гранул обусловлена наличием в них основного белка, богатого аргинином. Характерной особенностью ультраструктуры специфических гранул эозинофилов является присутствие в них электронно-плотных кристаллов. Структура кристаллов имеет видовые отличия. У человека в одной грануле может быть один или несколько кристаллов и форма их различна. У кошки эозинофильная гранула содержит один кристалл цилиндрической формы, имеющий пластинчатую структуру. Кроме того, в эозинофилах имеются мелкие округлые неспецифические гранулы (азурофильные), представляющие собой лизосомы и содержащие кислую фосфатазу. Функция эозинофилов — участие в аллергических реакциях.
Базофильные гранулоциты — базофилы (granulocytus basophilicus) составляют в крови человека 0-1% от общего числа лейкоцитов, имеют диаметр 11-12 мкм. Ядра базофилов слабодольчатые, окрашиваются слабее, чем ядра эозинофилов и нейтрофилов. Цитоплазма заполнена большим количеством крупных гранул, имеющих метахроматическую окраску. Метахрома зией называется способность структур изменять цвет красителя. Так, при окрашивании толуидиновым синим гранулы базофилов приобретают красно-фиолетовый цвет. Метахромазия гранул связана с наличием в них кислого гликозамингликана — гепарина. Гранулы базофилов крупные. У человека они имеют преимущественно зернистую ультраструктуру.
Функция базофильных гранулоцитов заключается в синтезе и секреции ряда биологически активных веществ: гепарина, гистамина и др. Кроме гепарина и гистамина в гранулах базофилов содержатся вещества, стимулирующие функции нейтрофилов и макрофагов.
Лимфоциты (lymphocytus) — один из основных видов лейкоцитов. Они встречаются не только в крови, их особенно много в лимфе. В крови взрослых людей лимфоциты составляют 20-35% от общего числа лейкоцитов. В зависимости от размеров различают малые лимфоциты диаметром 4,5-6 мкм, средние диаметром 7-10 мкм и большие диаметром 10 мкм и более.
Лимфоциты имеют округлую форму. Ядро чаще округлое, иногда слегка бобовидное, с плотно упакованным хроматином (рис. 18). Ядро окружает узкий ободок цитоплазмы. В цитоплазме некоторых лимфоцитов содержатся азурофильные гранулы — лизосомы. Функционально и по происхождению различают Т-лимфоциты и В-лимфоциты. Т-лимфоциты образуются в тимусе и могут в лимфоузлах и селезенке дифференцироваться в Т-киллеры (клетки убийцы), которые участвуют в клеточном иммунитете — уничтожают генетически чужеродные клетки (трансплантированные, опухолевые), Т-хелперы и Т-супрессоры, участвующие в регуляции гуморального иммунитета (humor – жидкость). Гуморальный иммунитет заключается в том, что при попадании в организм чужеродных веществ — антигенов, в жидкости организма (кровь и лимфу) поступают специфические белки — антитела, обезвреживающие эти чужеродные агенты. В реакции гуморального иммунитета участвует популяция В-лимфоцитов, которые превращаются в плазмоциты и синтезируют антитела. Свое название они получили от слова «bursa» в связи с тем, что у птиц В-лимфоциты формируются в бурсе (сумке) Фабрициуса (bursa Fabricii). У человека формирование этих клеток происходит в красном костном мозге.
а б
Рис. 18. Схема ультрамикроскопического строения агранулоцитов:
а — лимфоцит; б — моноцит; 1 — ядро; 2 — рибосомы; 3 — микроворсинки; 4 — лизосомы (азурофильные гранулы); 5 —комплекс Гольджи; 6 — митохондрии; 7 — пиноцитозные пузырьки (рис. Н. А. Юриной, Л. С. Румянцевой)
Моноциты (monocytus) в крови человека составляют 6-8°/о. от общего числа лейкоцитов. Это самые крупные лейкоциты в мазках крови. Размер моноцитов 18-20 мкм. Ядра моноцитов разнообразные по форме: бобовидные, подковообразные, иногда дольчатые. Хроматин ядер менее конденсирован, чем в лимфоцитах. В ядре имеется одно или несколько ядрышек. Цитоплазма моноцитов занимает большую часть клетки и окрашивается в голубовато-серый цвет. В цитоплазме видны мелкие азурофильные гранулы — лизосомы. Моноциты относятся к макрофагической системе и являются предшественниками макрофагов соединительной ткани.
Тромбоциты — кровяные пластинки (thrombocytus) составляют в 1 мкл крови от 200 тыс. до 300 тыс. Это безъядерные фрагменты цитоплазмы гигантских клеток костного мозга — мегакариоцитов. Размеры кровяной пластинки 2-3 мкм. Кровяные пластинки принимают участие в процессе свертывания крови. Каждая пластинка состоит из наружной гомогенной части — гиаломера, которая окрашивается в бледно-голубой цвет, и центральной части — грануломера, содержащей гранулы.
Цель занятия — изучение морфологии и функционального значения форменных элементов крови и лимфы.
Задачи:
1. При микроскопическом анализе мазков крови, окрашенных по Романовскому—Гимза, уметь находить эритроциты, тромбоциты, нейтрофилы, базофилы, эозинофилы, лимфоциты, моноциты, кровяные пластинки.
2. Научиться считать в мазке крови человека лейкоцитарную формулу.
3. Изучить особенности ультраструктуры различных лейкоцитов.
4. Изучить микроскопическое и ультрамикроскопическое строение эритроцитов и кровяных пластинок.
Необходимый исходный уровень знаний:
1. Знать классификацию форменных элементов крови и их морфофункциональные характеристики.
2. Иметь представление о гемограмме.
3. Иметь представление о лейкоцитарной формуле крови.
Объекты изучения
Микропрепараты для изучения и зарисовки
Мазок крови человека. Окраска по Романовскому—Гимза. На препарате необходимо найти и зарисовать эритроциты, окрашенные эозином в розовый цвет. Так как эритроциты имеют форму двояковогнутого диска, центральная часть их более тонкая и имеет более светлую окраску. Эритроциты — самые многочисленные клетки крови, и на мазке они составляют большинство. Среди эритроцитов видны лейкоциты (1-5 в поле зрения).
Наиболее часто встречаются сегментоядерные нейтрофилы, имеющие темно-фиолетовое сегментированное ядро и почти прозрачную (слабо-розовую) цитоплазму с очень мелкой, трудно различимой зернистостью. Эозинофильные гранулоциты, наоборот, отличаются ярко выраженной оксифилией цитоплазмы, заполненной крупными розовыми гранулами одинаковых размеров. Ядро менее плотное, чем у сегментоядерного нейтрофила, обычно имеет два сегмента, но может быть и три. Базофильные гранулоциты встречаются редко, поэтому их следует посмотреть и зарисовать с демонстрационного препарата. Для них характерны бледные, не всегда полностью сегментированные ядра и фиолетовые разных размеров (преимущественно крупные) гранулы в цитоплазме.
Лимфоциты в отличие от гранулоцитов имеют округлое ядро и малый ободок цитоплазмы. Хроматин ядра резко конденсирован, поэтому на препаратах имеет темно-фиолетовую окраску. Малые, средние и большие лимфоциты отличаются друг от друга по размерам и плотности ядер. Малые лимфоциты имеют очень конденсированный хроматин в ядре и узкий ободок цитоплазмы. Хроматин ядра среднего лимфоцита несколько более дисперсный, а ободок цитоплазмы шире. Ядро большого лимфоцита еще более крупное и рыхлое, а объем цитоплазмы увеличен.
Моноциты легче найти на периферии мазка. Это крупные клетки, имеющие обширную зону цитоплазмы голубого цвета и крупное бобовидное или неправильной формы бледно окрашенное ядро.
Кровяные пластинки имеют небольшие размеры (в три раза меньше эритроцита), расположены небольшими группами между клетками и имеют слабо-фиолетовую окраску.
Зарисовать и обозначить: 1) эритроцит (erythrocytes), 2) палочкоядерный нейтрофильный гранулоцит, 3) сегментоядериый нейтрофильный гранулоцит (granulocytus neutrophilicus segmentonuciearis), 4) эозинофильный гранулоцит (granulocytus eosinophilicus), 5) лимфоцит (lymphocytus), 6) моноцит (monocytus), 7) тромбоцит (thrombocytus).
Подсчет лейкоцитарной формулы крови. Последовательно продвигая препарат сверху вниз и слева направо, подсчитать в каждом поле зрения количество лейкоцитов. Каждый лейкоцит отмечается в соответствующей графе схемы палочкой. Десять клеток можно обозначить символом. Общее число подсчитанных клеток должно быть не менее 100. Полученные данные суммируются в каждой графе таблицы и производится подсчет процентного содержания каждого вида лейкоцитов, принимая за 100% общее число подсчитанных лейкоцитов (схема 1).
Необходимо рассчитать процентное содержание каждого вида лейкоцитов, сравнить их с нормой (схема 2) и оценить обнаруженные отклонения от нормального уровня.
Схема 1
