Биохимические свойства возбудителей газовой

Анаэробной инфекции на пестром ряду

 

Тест Вид клостридий	Ферментация
Глюкоза	Лактоза	Мальтоза	Маннит	Сахароза	Молоко
Cl.perfringens	КГ	КГ	КГ	–	КГ	бурное свертывание
Cl.novii	КГ	–	КГ	–	–	свертывание
Cl.septicum	КГ	КГ	КГ	–	КГ(+/–)	свертывание
Cl.hystolyticum	–	–	–	–	–	свертывание

Примечание: КГ – образование кислоты и газа, (–) – отсутствие ферментации

6. Знакомство с препаратами для специфической диагностики, профилактики и лечения анаэробной газовой инфекции (записать в тетрадь)

Секстанатоксин – представляет собой смесь анатоксинов, адсорбированных на гидроокиси алюминия. В состав секстанатоксина входят: анатоксин клостридий ботулизма типов А, В, Е, столбняка, перфрингенс типа А и эдематиенс. Введение препарата по утвержденной схеме вызывает формирование антитоксического иммунитета против токсинов этих возбудителей продолжительностью не менее 5 лет. Применяется для профилактики анаэробных инфекций, в том числе анаэробной раневой инфекции. Секстанатоксин применяют для профилактики анаэробной раневой инфекции, ботулизма и столбняка. Введение препарата формирует активный антитоксический иммунитет. Курс первичной иммунизации состоит из 3 прививок: две – с интервалом в 25–30 дней, третью – через 6–9 месяцев. Ревакцинации проводят каждые 5 лет.

Сыворотка антитоксическая противогангренозная – противоперфрингенс А, противоэдематиенс и противосептикум. Противогангренозная антитоксическая сыворотка содержит антитела к токсинам наиболее часто встречающихся патогенных клостридий. Их получают из нативных противогангренозных сывороток крови лошадей, гипериммунизированных анатоксинами или токсинами возбудителей анаэробной раневой инфекции, очищенных и концентрированных методом ферментативного гидролиза (Диаферм-3). Сыворотки выпускают как в виде поливалентного препарата, содержащего в одной ампуле антитела против токсинов трех видов клостридий, так и в виде моновалентных препаратов, содержащих антитоксины одного вида. Поливалентная сыворотка может быть получена как от одной лошади, путем иммунизации ее тремя анатоксинами, так и путем смешивания соответствующих антитоксических сывороток. Противогангренозные сыворотки применяют как с лечебной целью, так и для экстренной профилактики анаэробной раневой инфекции.

Противогангренозная поливалентная сыворотка используется для экстренной профилактики анаэробной раневой инфекции лицам с размозжением мышечной ткани, осложненными открытыми переломами, огнестрельными ранами, загрязненными землей, одеждой или другими инородными телами. Сыворотку вводят в возможно ранние сроки подкожно или внутримышечно.

Противогангренозную поливалентную сыворотку применяют для лечения в случае возникновения анаэробной раневой инфекции после ранений или других травм. Вводят сыворотку внутривенно после определения чувствительности к лошадиному белку. До установления типа токсина и вида возбудителя вводят поливалентную сыворотку, после установления бактериологического диагноза – сыворотку гомологичную с видом возбудителя или типом токсина.

Химическая брюшнотифозная вакцина с секстанатоксином. Химическая брюшнотифозная вакцина с секстанатоксином представляет собой препарат, состоящий из брюшнотифозного антигена и смеси анатоксинов: ботулинического типа А, В, Е, перфрингенс, эдематиенс, столбняка. Используется для профилактики анаэробной раневой инфекции, ботулизма, столбняка и брюшного тифа.

Cl.tetani

1. Изучение мазка из чистой культуры Cl.tetani, окрашенного по Граму (зарисовать)

В поле зрения видны тонкие длинные грамположительные (в старых культурах грамотрицательные) прямые палочки с круглой спорой, превышающей диаметр палочки и расположенной терминально, придающей микробу вид барабанной палочки. У некоторых особей споры имеют вид колечек.

2. Изучение лабораторного диагноза столбняка по таблице (зарисовать)

Столбняк – острое заболевание человека, вызываемое Cl.tetani. Клостридии столбняка продуцирует экзотоксин, представленный двумя фракциями – тетаноспазмином и тетанолизином.

В некоторых случаях, несмотря на характерную клиническую картину, возникает необходимость микробиологического диагноза. Микробиологический диагноз используют для выделения чистой культуры палочки столбняка, а также для выявления столбнячного токсина в крови.

В соответствии с патогенезом заболевания возбудитель находится на месте проникновения, в ране. Исследованию подвергают кусочки ткани из раны, гной, турунды. Исследуют также перевязочный материал, кетгут, шелк и препараты для парентерального введения.

Основными методами лабораторного исследования являются:

- микроскопический

- биологический

- бактериологический

Микроскопический метод. Исследуемый материал, кроме жидкого, растирают в ступке со стерильным песком. Из подготовленного материала готовят мазки, красят по Граму. Обнаружение тонких, длинных грамположительных палочек позволяет поставить ориентировочный диагноз и проводить бактериологическое исследование.

Биологический метод. Исследование направлено на обнаружение токсина в исследуемом материале. Для этого исходный материал после растирания с песком заливают изотоническим раствором хлорида натрия и оставляют на 1 час для экстрагирования токсина. Полученный экстракт фильтруют и ставят реакцию нейтрализации. Часть фильтрата смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают смесь 1 час для нейтрализации и вводят двум мышам внутримышечно в бедро. Вторая пара мышей – контрольная, им вводят экстракт. За животными наблюдают. При наличии токсина симптомы столбняка у контрольных животных развиваются на вторые-третьи сутки в мышцах той стороны, куда введен материал. Сначала наблюдается ригидность хвоста, взъерошивание шерсти, быстро наступает паралич конечности, а затем и остальных мышц тела (восходящий столбняк). Животные погибают в позе тюленя (вытянутые задние лапки). Животные, которым введен материал с антитоксической сывороткой, остаются живыми.

Бактериологический метод. Часть исследуемого материала засевают в жидкие среды и на чашки с кровяным агаром. Посевы проводят в двойное число пробирок, один набор прогревают при 80 градусах 20 минут. Посевы инкубируют в анаэростате при 37 °. Через 2, 4, 6 и 10 дней пробирки просматривают, из культуры готовят мазки. При обнаружении типичных микробов делают высев на чашки с кровяным агаром для выделения чистой культуры. На поверхности кровяного агара столбнячные палочки образуют нежные прозрачные колонии, похожие на капельки росы, с зоной гемолиза. Колонии быстро разрастаются и образуют нежную сетчатую пленку, покрывающую всю чашку и плохо видимую невооруженным глазом. Культуру и колонии микроскопируют. При обнаружении бактерий, морфологически похожих на столбнячные, часть колонии пересевают на жидкую среду, изучая способность ее вырабатывать экзотоксин. Присутствие токсина в культуральной жидкости определяют в реакции нейтрализации на мышах или в РНГА.

3. Знакомство с препаратами для специфической диагностики, профилактики и лечения столбняка (записать в тетрадь)

Специфическая профилактика столбняка проводится путем активной иммунизации, как анатоксином, так и ассоциированными вакцинами. Полный курс вакцинации включает первичную вакцинацию и ревакцинации, проведенные в установленные сроки. Он создает у привитых людей надежную защиту против столбняка, обеспечивающую способность к быстрой (в течение нескольких дней) выработке антитоксина на повторное введение анатоксина. Вакцинация против столбняка проводится планово, в рамках прививок и экстренно. Для плановой вакцинации используют: адсорбированный столбнячный анатоксин (АС-анатоксин), адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин (АДС-анатоксин), адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину АКДС-вакцину), химическую сорбированную тифозно-паратифозно-столбнячную вакцину (TABTе-вакцину), химическую сорбированную брюшнотифозную вакцину с концентрированным секстанатоксином, адсорбированный секст-анатоксин. Полный курс вакцинации состоит из двух прививок с интервалом в 30–40 дней и ревакцинацией той же дозой через 6–12 месяцев и последующими ревакцинациями через каждые 10 лет.

Экстренная профилактика столбняка предусматривает первичную хирургическую обработку раны и создание иммунитета против столбняка. Экстренную профилактику столбняка проводят при:

- травмах с нарушением целостности кожных и слизистых покровов

- обморожениях и ожогах второй, третьей и четвертой степени

- внебольничных абортах

- родах вне медицинских учреждений

- гангрене или некрозе тканей, абсцессах

- укусах животных

- проникающих повреждениях желудочно-кишечного тракта

- плановых операциях на желудочно-кишечном тракте

Для экстренной специфической профилактики столбняка применяют столбнячный анатоксин, противостолбнячный иммуноглобулин, сыворотку противостолбнячную очищенную, если нет иммуноглобулина. Выбор профилактических средств зависит от предшествующей плановой вакцинации пострадавших. Травмированным детям и подросткам, имеющим документальное подтверждение полного курса прививок, независимо от срока последней прививки, специфическую профилактику против столбняка не проводят. Травмированным взрослым, имеющим документальное подтверждение полного курса прививок, до 5 лет после последней прививки, профилактику столбняка не проводят. Если же после последней прививки прошло более 5 лет, то таким лицам вводят подкожно 0,5 мл анатоксина.

Травмированным взрослым и детям, которым не проведен полный курс вакцинации и прошло не более 5 лет после вакцинации, вводят 0,5 мл анатоксина подкожно. Если прошло более 5 лет, то вводят 1,0 мл анатоксина подкожно и 250 МЕ противостолбнячной сыворотки подкожно.

Непривитым детям с 5- месячного возраста и взрослым вводят 1,0 мл анатоксина и 250 МЕ противостолбнячного иммуноглобулина или 300 МЕ противостолбнячной сыворотки.

Если курс вакцинации документально не подтвержден, то детям от 5 месяцев, подросткам и военнослужащим вводят анатоксин, а всем остальным вводят 1,0 мл анатоксина и 250 МЕ противостолбнячного иммуноглобулина или 300 МЕ противостолбнячной сыворотки.

При введении антител предпочтение отдают противостолбнячному иммуноглобулину, потому что он не дает аллергических реакций, представляет собой единственный препарат для профилактики столбняка у людей с повышенной чувствительностью к лошадиному белку. Кроме того, введение одной дозы иммуноглобулина обеспечивает защитный уровень антитоксина в крови на протяжении 3 не-

дель.

Столбнячный анатоксин. Адсорбированный столбнячный анатоксин представляет собой очищенный от балластных белков столбнячный токсин, обезвреженный формалином и теплом и сорбированный на гидроокиси алюминия. Препарат содержит в 1 мл 20 антигенных единиц связывания. В качестве консерванта используют мертиолят или фенол. Столбнячный анатоксин используют для активной иммунизации против столбняка, формируется антитоксический иммунитет.

Противостолбнячная сыворотка. С лечебной целью противостолбнячную сыворотку вводят больным в максимально ранние сроки от начала болезни в дозе 10.000-20.000 МЕ. Сыворотку вводят внутривенно или в спинномозговой канал после определения индивидуальной чувствительности к лошадиному белку. При положительной внутрикожной пробе вместо сыворотки вводят иммуноглобулин противостолбнячный. Сыворотка противостолбнячная очищенная, концентрированная представляет собой сыворотку лошадей, гипериммунизированных столбнячным анатоксином или токсином, очищенную и концентрированную методом пептического переваривания, содержащую специфические иммуноглобулины-антитоксины в концентрации 3000 МЕ/мл. Противостолбнячная сыворотка используется для лечения и экстренной профилактики столбняка, создает пассивный антитоксический иммунитет.

Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный. Иммуноглобулин противостолбнячный представляет собой раствор (10-16%) гамма-глобулиновой фракции крови доноров, вакцинированных очищенным столбнячным анатоксином. Используется для экстренной профилактики столбняка, в необходимых случаях может быть применен для лечения.

 

Cl.botulinum

 

1. Изучение мазка из чистой культуры Cl.botulinum, окрашенного по Граму (зарисовать)

В поле зрения видны крупные полиморфные грамположительные палочки с овальными спорами, расположенными субтерминально. Диаметр спор превышает диаметр палочек, поэтому палочка со спорой имеет вид теннисной ракетки.

2. Изучение лабораторного диагноза ботулизма по таблице (зарисовать)

Ботулизм – тяжелая интоксикация человека, возникающая в результате приема пищи, содержащей ботулинический экзотоксин (фактор патогенности). Лабораторная диагностика направлена на обнаружение ботулинического токсина в материале, взятом от больного, а также обнаружение токсина и выделение возбудителя из пищевых продуктов, которые вызвали отравление. При этом важно не только установить присутствие токсина и микроба, но и определить тип токсина, чтобы раньше начать специфическое лечение больного и специфическую профилактику ботулизма у лиц, которые вместе с заболевшим употребляли один и тот же продукт.

Материалом для исследования служат рвотные массы, которые забирают стерильным шпателем в стерильные банки, промывные воды желудка, испражнения, их забирают также в стерильные банки, кровь, которую берут в объеме 6–8 мл асептично до введения антитоксической сыворотки. Кроме материала от больного на исследование берут остатки пищевых продуктов в стерильную посуду. Посуду с собранным материалом закрывают корковыми или резиновыми пробками и доставляют в лабораторию на исследование.

Основными методами лабораторной диагностики являются:

- биологический

- бактериологический

Все пробы, доставленные в лабораторию, одновременно исследуют в двух направлениях: выделение возбудителя и обнаружение токсина. Все пробы растирают в стерильной ступке с равным или двойным объемом физиологического раствора и делят на две части.

Бактериологический метод. Для выделения чистой культуры палочек ботулизма часть материала засевают в пробирки или флаконы в большой объем жидкой питательной среды (чтобы хватило на все исследования): бульон Хоттингера с 0,5% глюкозой или казеиново-грибную среду. Для регенерации кислорода среды перед посевом кипятят. После посева часть пробирок или флаконов прогревают при 60 и 80 градусах для уничтожения аэробной флоры. После этого все флаконы помещают в анаэростат: непрогретый и прогретый при 60 градусах инкубируют при 28 градусах для обнаружения Cl.botulinum типа E, F, непрогретый и прогретый при 80 градусах инкубируют при 35 градусах для обнаружения Cl.botulinum типов А, В и С. Через 48 часов посевы исследуют на наличие возбудителей ботулизма. Обращают внимание на интенсивность газообразования. Из культур готовят мазки, красят их по Граму и микроскопируют. При обнаружении микробов, сходных по морфологии с Cl.botulinum, в культуральной жидкости определяют наличие токсина в реакции нейтрализации, сначала с поливалентной сывороткой. При положительном результате реакцию повторяют с каждой сывороткой в отдельности.

Если в исследуемом посеве обнаружены палочки, типичные для Cl.botulinum, и токсин, делают заключение о присутствии в исследуемом материале возбудителей ботулизма. Выделение чистой культуры необязательно. Если в посеве обнаружены микробы, похожие по морфологии на Cl.botulinum, а токсин отсутствует, то проводят активацию его панкреатином или трипсином, реакцию нейтрализации повторяют.

Для выделения чистой культуры из исследуемого материала его засевают или в высокий столбик сахарного агара, или на чашки с кровяно-сахарным агаром. Инкубируют в анаэростате при 35–37 градусах в полном вакууме. Через сутки на кровяном агаре вырастают прозрачные, в виде росинок, дымчатые колонии, окруженные зоной гемолиза. В столбике агара вырастают колонии в виде комочков ваты, пушинок или правильных дисков. Подозрительные колонии отсевают на сахарный бульон, выросшие культуры изучают в мазках, окрашенных по Граму, на способность ферментировать углеводы и белки, определяют токсигенность в реакции нейтрализации.

Биологический метод. Метод используется для обнаружения ботулинического токсина. Для этого вторую порцию материала выдерживают 30–40 минут для экстрагирования материала, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, фильтрат разливают в 2 пробирки. В одну из них добавляют поливалентную противоботулиническую сыворотку, оставляют смесь на 30–40 минут для нейтрализации. Затем вводят смесь мышам, контрольным мышам вводят фильтрат без сыворотки. За животными наблюдают. При наличии токсина в пробах материала через несколько дней контрольные мыши погибнут, а мыши, которым введен фильтрат с сывороткой, останутся живыми. При положительном результате реакцию нейтрализации повторяют с каждой сывороткой в отдельности.

3. Знакомство с препаратами для специфической диагностики, профилактики и лечения ботулизма (записать в тетрадь)

Противоботулинические антитоксические сыворотки применяются для экстренной профилактики ботулизма. Их вводят лицам, употреблявшим одновременно с больным продукты, которые вызвали заболевание. Если тип токсина не установлен, вводят внутримышечно поливалентную сыворотку после определения индивидуальной чувствительности к лошадиному белку. После установления типа токсина вводят типовую сыворотку.

Для лечения ботулизма сыворотку вводят в максимально ранние сроки от момента появления первых симптомов ботулизма. Если тип токсина неизвестен, применяют поливалентную сыворотку или смесь моновалентных. Если тип токсина известен, то используют моновалентную типовую сыворотку. Независимо от тяжести течения сыворотку вводят однократно внутривенно капельно, предварительно определив индивидуальную чувствительность к лошадиному белку. Если у больного чувствительность к лошадиному белку повышена, рекомендуется использовать донорский противоботулинический иммуноглобулин или противоботулиническую сыворотку, полученную от другого животного. Если таких сывороток нет, то препарат вводят с особыми предосторожностями под прикрытием антигистаминных препаратов и преднизолона, дробно.

Сыворотки противоботулинические типов А, В, С, Е, F. Противоботулинические сыворотки представляют собой сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных ботулиническими анатоксинами или токсинами типов А, В, С, Е,F, очищенные и концентрированные методом пептического переваривания и солевого фракционирования, содержащие иммуноглобулины – антитоксины. В качестве консерванта содержат 0,5% хлороформа. Противоботулинические сыворотки нейтрализуют ботулинические токсины соответствующего типа, их используют для экстренной профилактики и терапии ботулизма.

ЗАНЯТИЕ 3

 

Тема. Кишечная палочка. E.coli. Общая характеристика семейства кишечных бактерий. Морфоло­гия, биология, культуральные, биохимические и антигенные свойства кишечной палочки. Лабораторный диагноз эшерихиоза. Дисбиоз

 

Цель занятия. Познакомить студентов с характеристикой семейства кишечных бактерий, изучить свойства кишечной палочки, её роль в патологии человека, бактериологический диагноз эшерихиоза, препараты для лечения острых кишечных заболева­ний и дисбиоза