ОПЫТ 1. Биуретовая реакция Пиотровского

При добавлении к щелочному раствору белка раствора сернокислой меди жидкость приобретает красно-фиолетовый или сине-фиолетовый цвет. Реакция обусловлена присутствием в белке пептидных связей, которые с ионами меди образуют окрашенное комплексное соединение. В щелочной среде кетонная форма полипептида переходит в енольную.

 

 

Енольная форма полипептида взаимодействует со щелочным раствором медной соли с образованием так называемого биуретового комплекса.

Интенсивность окраски зависит от длинны пептида и варьирует от сине-фиолетовой до красно-фиолетовой. Положительную реакцию дают соединения, содержащие не менее двух пептидных связей.

Ход работы:

В одну пробирку налить 2 мл раствора яичного белка, в другую столько же раствора желатина. Затем в каждую прибавить равный объем 10%-ного раствора едкого натра и по 2-3 капли 1%-ного раствора сернокислой меди СuSO₄. Проявляется красно-фиолетовое окрашивание.

 

ОПЫТ 2. Нингидриновая реакция на α-аминокислоты

Эта реакция обусловлена присутствием в белке аминокислот, имеющих аминогруппу в α-положении.

Белки, пептиды и аминокислоты образуют с нингидрином соединение синего или сине-фиолетового цвета. α-Аминокислоты, реагируя с нингидрином, окисляются и распадаются с образованием аммиака, альдегида и углекислого газа. Нингидрин восстанавливается и конденсируется с другой молекулой нингидрина и аммиаком. В результате образуется сложное соединение, окрашенное в синий цвет /пурпурный Руэмана/.

Реакция может быть представлена следующим образом:

 

 

Ход работы:

В одну пробирку налить 1-2 мл 1%-ного раствора глицина, в другую столько же раствора яичного белка. В обе пробирки добавить 0,1-ный спиртовый раствор нингидрина (в первую пробирку 5-6 капель, во вторую 10-12 капель) и нагревать около минуты. В пробирке с глицином быстро появляется сине-фиолетовое окрашивание. В пробирке с белком окраска более бледная красно-фиолетовая и развивается медленнее.

 

ОПЫТ 3. Ксантопротеиновая реакция на циклические аминокислоты

Ксантопротеиновая реакция характерна для некоторых ароматических аминокислот (фенилаланина, тирозина, триптофана). При нагревании белков, содержащих эти аминокислоты, с концентрированной азотной кислотой образуется соединение желтого цвета:

 

 

На второй стадии нитропроизводное реагирует с гидроксидом аммония с образованием аммонийной соли желто-оранжевого цвета.

 

 

Ксантопротеиновую реакцию, кроме белков, пептидов и циклических аминокислот, дают также многие простые ароматические соединения (бензол, фенол др.)

Ход работы:

1. К 2 мл 0,1%-ного раствора фенола осторожно по стенке прилить 1-2 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно нагреть. Появляется желтое окрашивание.

2. В другую пробирку налить 2 мл яичного белка, прибавить 8-10 капель концентрированной азотной кислоты и осторожно нагреть. Выпадает осадок, который окрашивается в желтый цвет.

После охлаждения в пробирку осторожно по стенке приливают избыток концентрированного раствора аммиака. Жидкость приобретает желто-оранжевый цвет.

Реакцию проводят под тягой!

3. Те же реакции проводят с раствором желатина. Однако желтое окрашивание с ней не появляется, так как желатин не содержит ароматических аминокислот.