5. 0,1М цитратно-фосфатный буфер (ЦФБ), рН5,5-6,0
6,4 мл 0,2М Na2НРО4х12Н2О (17,9 г на 250 мл дист. воды)
6,1 мл 0,1М лимонной кислоты (5,255 г на 250 мл дист. воды)
12,5 мл дистиллированной воды.
6. Субстрат-индикаторный раствор
25,0 мл 0,1М ЦФБ
9-10 мг орто-фенилендиамина
0,35 мл 3% перекиси водорода
7. 1Н раствор серной кислоты (Н2SО4). Готовят из
концентрированной серной кислоты 16Н Н2SО4
10 мл концентрированной Н2SО4 растворить
в 150 мл дистиллированной воды.
Приготовление растворов.
Приготовление забуференного физиологического раствора.
В 1 л физиологического раствора (0,87% раствор хлористого
натрия) растворить 1,513 г фосфорнокислого двузамещенного натрия и
0,204 г фосфорнокислого однозамещенного калия. рН забуференного
физиологического раствора должен быть 7,4-7,5.
Приготовление вероналового буфера.
В мерный литровый флакон добавляют 200 мл буфера, затем
наполняют флакон до литровой отметки раствором желатины и
тщательно перемешивают. Измеряют рН.
Приготовление раствора буфера.
В 2-х литровый флакон добавляют 1,5 л дистиллированной воды
83,0 г NаCl
10,19 г Nа-5,5-диэтилбарбитурата
Перемешивают до полного растворения. Добавляют:
34,58 мл 1 М НCl и перемешивают
5,0 мл раствора МgCl2 CaCl2
Затем добавляют дистиллированную воду до отметки 2 литра и
перемешивают.
Готовят разведения буфера 1:5 и измеряют рН.
Приготовление раствора МgCl2 CaCl2
В 250 мл флакон наливают 100 мл дистиллированной воды
Добавляют: 20,3 г МgCl2 4,4 г CaCl2
Перемешивают.
Приготовление водного раствора желатины.
В сосуд емкостью 1 л наливают 100 мл дистиллированной воды и
добавляют 1 г желатины. Кипятят. Охлаждают при комнатной
температуре и добавляют 700 мл дистиллированной воды (срок
хранения - 1 неделя).
Приготовление формалинизированного физиологического раствора.
в 1 л физиологического раствора добавить 3 мл 40%
формальдегида.
Консерванты.
Консервант для комплемента.
Жидкий комплемент хранят при температуре - 20°С либо
консервируют химическими смесями: 0,05 г сернокислого натрия и
0,04 г кристаллической борной кислоты на 1 мл сыворотки (Гинзбург,
Калинина, 1947).
Консерванты для эритроцитов.
1) Консервант крови N 7Б. Выпускается Саранским заводом
медицинских препаратов в стерильных стеклянных флаконах емкостью
250 мл. Консерванта во флаконе - 50 мл. Консервирование
эритроцитов проводят путем непосредственного соединения взятой от
барана крови с консервантом.
2) Раствор "Глюгицир". Представляет собой глюкозо-цитратный
раствор N 7б без левомицетина. Выпускается Пензенским заводом
медицинских препаратов в стеклянных флаконах. Консерванта во
флаконе - 75 мл.
Взятие и обработка крови для серологических реакций.
Для серологических реакций предпочтительнее брать кровь из
пальца. Кровь из пальца берут следующим образом:
Кожу пальца (предпочтительно 4-го левой руки) протирают
спиртом или эфиром и слегка подсушивают. Иглой или пером для
оспопрививания наносят резкий укол в мякоть пальца, появившуюся
первую каплю крови удаляют тампоном, а затем легким, ритмичным
сжатием пальца с боковых поверхностей выдавливают несколько
капель крови. Кровь набирают градуированной пипеткой (1 мл или 2
мл) и переносят в приготовленную стерильную пробирку, которую
рекомендуется держать наклонно для получения скошенной поверхности
крови. Необходимый объем крови - 1-1,5 мл. Пробирки с кровью
помещают в термостат для образования сгустка. Образовавшийся
кровяной сгусток отделяют от стенок пробирки пастеровской пипеткой
или тонкой прокаленной и остуженной проволокой, бактериологической
петлей или осторожным поколачиванием пробирки о ладонь). Пробирки
с кровью помещают в рефрижератор или прохладное место для
образования и отстаивания сыворотки.
На следующий день на кровяном сгустке образуется прозрачная,
желтоватого цвета сыворотка, которую отделяют от сгустка в
стерильную пробирку. Сыворотка не должна содержать эритроцитов!
При условии срочного получения сыворотки последняя отделяется от
сгустка спустя 1-2 часа после его образования с помощью
центрифугирования.
На пробирке с кровью должен быть указан или регистрационный
номер больного, включающий сведения из журнала о его фамилии,
имени, возрасте, дате взятия крови, дне болезни и диагнозе, или
перечисленные сведения пишутся на этикетке, наклеенной на пробирку
с кровью.
В случае, когда предполагается осложнение в получении нужного
количества крови (1 мл), например, у детей, кровь забирают в
пробирки, содержащие стерильный физиологический раствор с 0,25%
лимоннокислым натрием (99,75 мл физиологического раствора + 0,25
мл лимоннокислого натрия).
В этом случае объем взятой крови может быть сокращен до 0,4
мл. В пробирки предварительно набирают 1,8 мл раствора,
препятствующего свертыванию крови, вносят 0,4 мл.
Хранение и транспортировка сывороток.
Разрушение сывороточных белков происходит в результате
тепловой их денатурации, протеолиза или при изменении
рН-растворов. Полное сохранение свойств сывороток (имеются в виду
иммунные глобулины) обеспечивается при содержании их в
замороженном (-70°С) или высушенном (под вакуумом) состоянии.
Риккетсиальные сыворотки, подлежащие исследованию на
протяжении 7-14 дней, рекомендуется хранить при +4°С в ампулах,
под резиновыми пробками в пробирках (можно ватными, но
пропитанными парафином) во избежание высыхания сывороток. На более
длительные сроки хранения сыворотки рекомендуется замораживать при
-20°С (рекомендация научной группы ВОЗ), если отсутствуют условия
для создания более низких температур (-70° или -196°С).
Размораживают сыворотки при +37°С.
Проверенным способом хранения риккетсиальных сывороток
является их лиофилизация. По имеющимся наблюдениям в
лиофилизированных сыворотках уровни титров антител не изменяются
на протяжении до 15 лет хранения при +4°С.
Высушенные на бумаге сыворотки пригодны для серодиагностики (в
РСК) сыпного тифа, крысиного сыпного тифа, лихорадки Ку и
риккетсиозов клещевой группы на протяжении до полутора месяцев их
хранения при +18-37°С.
Транспортировку сывороток, высушенных на бумаге, осуществляют
в двойных конвертах по почте. Жидкие сыворотки в ампулах или
лиофилизированные упаковывают в бумажные салфетки или вату и
пересылают по почте бандеролями. Наилучший метод транспортировки
жидких сывороток в сосудах (термосах с сухим льдом или контейнерах
с жидким азотом - объем контейнера 9,4 л вмещает 180 пробирок)
автотранспортом. При пересылке проб в лабораторию извещают
телеграммой о номере рейса, номере квитанции, дате, времени
отправки и прибытия самолета.
Руководитель
Департамента госсанэпиднадзора
А.А.МОНИСОВ
Приложение N 4
к приказу Министерства
здравоохранения
Российской Федерации
от 26 ноября 1998 г. N 342
ОРГАНИЗАЦИЯ И ПРОВЕДЕНИЕ МЕРОПРИЯТИЙ
ПО БОРЬБЕ С ПЕДИКУЛЕЗОМ
(Методические указания)
1. Эпидемиологическое и санитарно-гигиеническое значение вшей
Педикулез или вшивость (от слова Pediculus - вошь) -
специфическое паразитирование на человеке вшей, питающихся его
кровью.
Основные симптомы педикулеза: 1) зуд, сопровождающийся
расчесами и, у некоторых лиц, аллергией; 2) огрубение кожи от
массовых укусов вшей и воздействия слюны насекомых на дерму; 3)
меланодермия - пигментация кожи за счет тканевых кровоизлияний и
воспалительного процесса, вызываемого воздействием слюны
насекомых; 4) колтун - довольно редкое явление, образующееся при
расчесах головы: волосы запутываются, склеиваются гнойно-серозными
выделениями, которые корками засыхают на голове, а под ними
находится мокнущая поверхность.
Расчесы способствуют возникновению вторичных кожных
заболеваний: дерматитов, экземы и т.д. Иногда, при сильной
завшивленности, появляются субфебрильная температура и припухлость
лимфатических узлов.
На человеке паразитируют три вида вшей - платяная (Pediculus
vestimenti de Geer), головная (Р. capitis de Geer) и лобковая
(Phthyrus pubis L.).
Платяные и головные вши являются переносчиками возбудителей
сыпного тифа, волынской лихорадки и возвратного тифа. Наибольшую
эпидемиологическую опасность представляют платяные вши. Вши,
напившись крови, содержащей возбудителей сыпного или возвратного
тифов, волынской лихорадки, через 4-7 дней становятся способными
передавать возбудителей от больного человека здоровому.
При сыпном тифе возбудитель локализуется в клетках эпителия
желудка или тонкой кишки вши, размножается и выделяется с
испражнениями.
Возбудитель волынской лихорадки размножается в кишечнике вши
внеклеточно. Человек заражается сыпным тифом и волынской
лихорадкой при попадании выделений инфицированной вши в ранки в
местах расчеса после укуса или при раздавливании насекомого. В
испражнениях вшей, попадающих на одежду, риккетсии сохраняют
жизнеспособность и патогенность до 3-х и более месяцев.
При возвратном тифе спирохеты с кровью попадают в желудок вши,
а затем в полость тела. Человек инфицируется от зараженной вши при
раздавливании ее, занося спирохеты в поверхностные участки кожи
при расчесах или на слизистые оболочки.
Возбудители инфекций (сыпного, возвратного тифов, волынской
лихорадки), переносимые вшами, трансовариально (от самки -
потомству) не передаются.
Лобковая вошь практически не имеет эпидемиологического
значения, однако также, как платяная и головная вши, причиняет
человеку большое беспокойство, вызывая зуд. При сильных расчесах
возможно возникновение различных гнойничковых заболеваний кожи.
2. Общие сведения о морфологии и биологии вшей.
ВШИ - отряд кровососущих насекомых, постоянные эктопаразиты
человека и других млекопитающих. Основные признаки отряда: тело
овальное или продолговатое, уплощенное в спинно-брюшном
направлении; окраска серовато-коричневая, у особей, напитавшихся
свежей кровью, окраска варьирует от красноватой до черной; голова
небольшая, суживающаяся кпереди, несет пятичлениковые усики
(антенны); ротовой аппарат колюще-сосущий; грудь слитная; брюшко
состоит из 9 члеников, задний конец его у самок двулопастной, а у
самцов закруглен и сквозь три последних членика просвечивает
хитинизированный конический совокупительный аппарат; ноги сильные,
пятичлениковые, на голени имеется выступ, лапки заканчиваются
серповидными коготками, которые подгибаются к выступу голени,
напоминают по форме клешню и служат для закрепления на волосах и
одежде. Самцы обычно мельче самок. Вши яйцекладущи. Яйца (гниды)
продолговато-овальной формы (1,0-1,5 мм длины), сверху покрыты
плоской крышечкой, желтовато-белого цвета, приклеиваются нижним
концом к волосу или ворсинкам ткани выделениями самки во время
кладки; неполовозрелые стадии (нимфы) отличаются от взрослых
меньшими размерами и отсутствием наружных половых органов. Вши на
всех стадиях развития, кроме яйца, сосут кровь хозяина. Головная
вошь держится в волосяном покрове близ кожи, платяная -
преимущественно на одежде. Заражение людей вшами происходит при
контакте с завшивленными людьми, например, при общении детей в
организованных коллективах, в переполненном транспорте, при
совместном пользовании одеждой, постелью, спальными
принадлежностями, гребнями, щетками и т.п. Заражение взрослых
людей лобковыми вшами происходит при интимном контакте, а у детей
- от взрослых, ухаживающих за ними, а также через белье.
Головная и платяная вошь относятся к одному роду Pediculus и
по внешнему виду очень сходны. Однако они имеют морфологические
отличия, которые можно установить, используя лупу с 2-х-10-и
кратным увеличением или микроскоп <*>.
--------------------------------
<*> Для определения вида вши приготавливают временный
препарат. На предметное стекло наносят каплю глицерина, помещают в
нее вошь и накрывают покровным стеклом или целлофаном.
ГОЛОВНАЯ ВОШЬ - Pediculus capitis de Geer (см. фото), мельче
платяной, длина тела самки 2,1-3,5 мм, самца - 2,0-3,0 мм; по
бокам членики брюшка (фестоны) разделены относительно глубокими
вырезками; щетинки стернитов брюшка более крупные, кинжаловидные;
гениталии самки широкие и более тупые на конце; антенны
относительно короткие и плотные, третий членик едва длиннее своей
ширины; третий членик (бедро) 2-й пары ног относительно короткий,
длина превышает ширину в 2,4 раза; коготки более тонко заострены.
Головная вошь живет и размножается в волосистой части головы,
предпочтительно на висках, затылке и темени. Питается каждые 2-3
часа. Голод переносит плохо, при +30°С обычно через сутки гибнет.
Развитие яиц происходит в течение 5-9 дней, личинок - 15-17 дней.
Продолжительность жизни взрослых особей - 27-30 дней. Самка
откладывает ежедневно 3-7 яиц, за всю жизнь - от 38 до 120 яиц.
Очень чувствительны к изменению температуры и влажности, оптимум
около +28°С; при понижении температуры развитие замедляется, при
+20°С самка перестает откладывать яйца и развитие личинок
приостанавливается. Вне тела хозяина погибает через сутки.
ПЛАТЯНАЯ ВОШЬ - Pediculus vestimenti de Geer (см. фото)
крупнее головной, длина тела самки 2,3-4,75 мм, самца -2,1-3,7 мм,
окраска более светлая. Вырезки между фестонами брюшка менее
глубокие; щетинки на стернитах мелкие, игольчатые; гениталии самки
более острые, клещевидные, антенны более тонкие, третий членик
вдвое длиннее своей ширины; бедро 2-й пары ног почти вдвое длиннее
своей ширины; коготки на лапках относительно более широкие,
серповидные.
Платяная вошь живет в складках белья и платья, особенно в
швах, где и откладывает яйца, приклеивая их к ворсинкам ткани,
яйца могут приклеиваться также к волосам на теле человека, кроме
головы. Питается 2-3 раза в сутки: насыщается за 3-10 минут,
единовременно выпивает крови заметно больше, чем головная.
Ежедневно откладывает около 10 яиц, в течение жизни в среднем
около 200, максимально - 300. Яйца развиваются в течение 7-14
дней, личинки 14-18 дней. Средняя продолжительность жизни взрослых
особей 34 дня, максимально - 46 дней. Оптимальная температура
развития вшей на 2-4 градуса выше, чем у головной, +30-32°С; при
температуре +25-30°С могут голодать 2-3 дня, а с понижением
температуры до +10-20°С могут голодать около недели. Все стадии
развития, включая яйцо, очень чувствительны к температуре выше
+37°С.
Сухой жар (+47-50°С) вши переносят до 10 минут, а затем
гибнут. Это используется при дезинсекции одежды. Понижение
температуры и высокую влажность вши переносят значительно лучше,
при -13°С сохраняют жизнеспособность до 7 дней, в воде остаются
живыми до 2 суток. Отрицательное отношение вшей к высоким
температурам важно эпидемиологически, т.к. вши покидают
лихорадящих больных и могут переползать на окружающих людей.
ЛОБКОВАЯ ВОШЬ или ПЛОЩИЦА относится к роду Phthyrus виду Р.
pubis L. (см. фото), это самая мелкая из вшей человека; длина тела
1,36-1,6 мм; по форме тела напоминает щит, четыре последних
членика брюшка по бокам несут пальцевидные отростки с пучком
щетинок; ноги, особенно 2-я и 3-я пары, утолщены; лапки с крупными
изогнутыми коготками. Такое строение ног и тела позволяет площице
удерживаться на коротких волосках лобка, бровей, ресниц. При
значительной численности насекомые могут распространяться на всей
нижней части туловища, особенно на животе, где в результате их
кровососания надолго остаются характерные синюшные следы. Лобковая
вошь малоподвижна, обычно остается на месте, погрузив хоботок в
кожу человека, и сосет кровь часто, с небольшими перерывами.
Плодовитость невелика, самка в течение жизни откладывает не более
50 яиц, из яйца вылупляется нимфа, которая живет 15-17 дней,
продолжительность жизни самки около месяца. Площица вне человека
может жить только 10-12 часов.
3. Организация и проведение противопедикулезных мероприятий
3.1. Противопедикулезные мероприятия включают как комплекс
общих мероприятий, направленных на соблюдение должного
санитарно-гигиенического и противоэпидемического режимов в
организациях, коллективах т.п., так и специфические меры по
санации людей, у которых обнаружен педикулез.
Противопедикулезные мероприятия входят в систему мер по
сохранению и укреплению здоровья населения и проводятся среди всех
контингентов и групп населения. Ответственность за их организацию
и осуществление несут руководители детских и подростковых
организованных коллективов, учебных заведений, предприятий,
хозяйств, организаций, учреждений, независимо от форм
собственности и ведомственной принадлежности.
3.2. Работа по предупреждению педикулеза и борьбе с ним
проводится в соответствии с региональными программами (планами) по
борьбе с педикулезом и профилактики инфекционных заболеваний,
передаваемых вшами, согласованными с заинтересованными
министерствами и ведомствами, органами и учреждениями просвещения,
жилищного и коммунального хозяйства и др.
При разработке программы (плана) предусматривают выполнение
следующих мероприятий:
3.2.1. Организация и проведение плановых осмотров населения
(детские дома, дома ребенка, детские дошкольные учреждения,
учреждения общего и профессионального образования, учреждения
системы социального обеспечения (дома престарелых и дома
инвалидов), общежития, промышленные предприятия и др.) с целью
выявления и санации людей с педикулезом;
3.2.2. Обеспечение условий, необходимых для соблюдения
санитарно-гигиенического и противоэпидемического режимов в
организованных коллективах (обеспеченность санпропускниками,
банями, прачечными, душевыми, горячей водой, сменным постельным
бельем и др.);
3.2.3. Организация подготовки медицинского персонала
лечебно-профилактических учреждений, детских домов, домов ребенка,
детских дошкольных учреждений, учреждений общего и
профессионального образования, учреждений системы социального
обеспечения (домов престарелых и домов инвалидов) по вопросам
борьбы с педикулезом и профилактики сыпного тифа;
3.2.4. Обеспечение лечебно-профилактических учреждений,
центров госсанэпиднадзора, дезстанций, Государственных унитарных
дезинфекционных предприятий (ГУДП) и населения педикулицидными
средствами;
3.2.5. Обеспечение лечебно-профилактических учреждений,
центров госсанэпиднадзора, дезстанций и ГУДП дезинфекционным
оборудованием;
3.2.6. Организация противопедикулезных мероприятий в очагах
педикулеза;
3.2.7. Проведение информационно-разъяснительной работы среди
населения по вопросам борьбы с педикулезом.
3.3. При проведении осмотров на педикулез учету подлежат люди,
у которых при осмотре выявлены как жизнеспособные, так и
нежизнеспособные вши в любой стадии развития (яйцо-гнида, личинка,
взрослое насекомое).
Каждый выявленный случай педикулеза заносят в медицинскую
документацию: "Медицинскую карту стационарного больного" (ф.
N 003-1/у), "Медицинскую карту амбулаторного больного" (ф.
N 025/у-87), "Историю развития ребенка" (ф. N 112/у), "Медицинскую
карту больного грибковыми заболеваниями" (ф. N 065-1/у),
"Медицинскую карту ребенка" (ф. N 026/у), "Карту вызова скорой
медицинской помощи" (ф. N 110/у), "Вкладной лист на подростка к
медицинской карте амбулаторного больного" (ф. N 025-1/у),
"Медицинскую карту больного венерическими заболеваниями" (ф.
N 065/у).
В общепринятом порядке каждый случай выявленного педикулеза
вносят в "Статистический талон для регистрации заключительных
(уточненных) диагнозов" (ф. N 025-2/у); "Талон амбулаторного
пациента" (ф. N 025-10/у-97), а также в "Журнал учета инфекционных
заболеваний" (ф. N 060/у). Журнал ведется во всех
лечебно-профилактических учреждениях, включая специализированные,
независимо от форм собственности и ведомственной принадлежности,
детских домах, домах ребенка, детских дошкольных учреждениях,
учреждениях общего и профессионального образования, учреждениях
системы социального обеспечения (домах престарелых и домах
инвалидов), детских оздоровительных учреждениях и др. О каждом
выявленном случае педикулеза медицинский или другой работник
должен информировать территориальный центр госсанэпиднадзора по
телефону с последующим направлением экстренного извещения (ф.
N 058/у) в установленном порядке.
В отчетных формах "Сведения об инфекционных и паразитарных
заболеваниях" N 1 (ежемесячно) и N 2 (ежегодно) показывают впервые
выявленные случаи головного, платяного и смешанного педикулеза.
Информацию о педикулезе и заявки на проведение
противопедикулезной обработки медицинские работники
лечебно-профилактических учреждений, центров госсанэпиднадзора
направляют в дезотделы (дезотделения) центров госсанэпиднадзора,
отделы очаговой дезинфекции дезстанции или ГУДП, где они
регистрируются в установленном порядке.
