План
10. Знакомство с иммерсионной системой микроскопа.
11. Приготовление микроскопического препарата бактерий (Вас. subtilis, Proteus vulgaris или Вас. mesentericus): а) метод раздавленной капли с прижизненной окраской микробов; б) метод висячей капли.
12. Фиксация и окраска препаратов бактерий. Изучение препарата при помощи иммерсионного объектива.
Материалы и оборудование
1. Чистые и накопительные культуры бактерий Вас. subtilis, Вас. mesentericus.
2. Чистые и накопительные культуры бактерий Proteus vulgaris.
3. Метиленовый синий.
4. Карболовый фуксин.
5. Нейтральный красный.
6. Иммерсионное масло.
7. Раствор Люголя.
8. Микроскоп.
9. Предметные и покровные стекла.
10. Предметное стекло с вышлифованным углублением.
11. Препаровальные иглы и петли для пересева.
12. Стеклянные палочки.
13. Спиртовка или газовая горелка.
14. Штативы для предметных стекол с лотками.
15. Марлевые салфетки.
Основные сведения
Определенное представлении о форме, размерах и движении микробной клетки можно получить, изучая ее прижизненно. Для прижизненного микроскопирования бактерий применяются методы раздавленной капли и висячей капли, описанные ниже. Однако клетки большинства микробов бесцветны и прозрачны, что затрудняет их изучение. Кроме того, часто показатель преломления цитоплазмы очень близок к показателю преломления жидкости, в которой она находится, и тогда микроорганизм становится практически невидимым в световом микроскопе. Поэтому микроорганизмы можно слегка подкрасить нейтральной краской. Такая окраска называется прижизненной.
Красители, которые применяют для прижизненной окраски клеток бактерий, называют витальными. Они бывают основными и кислотными в
После высушивания препарат фиксируют. Для этого высушенный мазок несколько раз быстро проводят через пламя горелки. Фиксация ставит своей целью убить микроорганизмы, обеспечить лучшее прикрепление мазка к стеклу, сделать мазок более восприимчивым к краске.
После фиксации приступают к окраске. Фиксированный мазок на 1-2 мин. покрывают раствором метиленового синего или карболового фуксина. Избыток краски тщательно смывают струёй воды до полного обесцвечивания стекающих капель. После окраски препарат высушивают над пламенем горелки и рассматривают с иммерсионным объективом. Для этого на фиксированный окрашенный и хорошо высушенный охлажденный мазок наносят каплю иммерсионного масла (покровным стеклом накрывать не надо).
К отчету о работе прилагаются рисунки изучаемых бактерий, латинские названия их и краткое описание формы и движения клеток.
Контрольные вопросы
13. Перечислите способы приготовления микроскопических препаратов.
14. Как можно приготовить препарат для наблюдения живых клеток бактерий под микроскопом?
15. С какой целью применяется фиксация при приготовлении препаратов бактериальных клеток?
16. Какие красители называются витальными, или прижизненными?
17. Какие красители называются кислотными, а какие основными?
Тема 2. МОРФОЛОГИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КЛЕТОК
Занятие 2. Основные формы бактерий. Шаровидные и
