Очевидно, что биосинтез ЛС необходимо проводить в асептиче­ских условиях. Тем не менее проблема стерильности инъекционных

Вариант ответа

В реальных условиях радиационную или лучевую стерилизацию применяют на отдельных производствах. Разрешенными для сте­рилизации ЛС являются γ-лучи изотопа кобальта (⁶⁰Со) и быстрые электроны с энергией не выше 5 млн эВ (электроновольт), получае­мые на ускорителях при отсутствии наведенной радиации у обрабо­танных лекарственных препаратов (нет расщепления атомного ядра). Стерилизующая доза ионизирующего облучения составляет 2,5 млн рад, т.е. 2,5 мегарад.

Промышленная установка представляет собой герметическую сте-рилизационную камеру со стандартными стержнями с ⁶⁰Со. Стержни могут автоматически вдвигаться и удаляться из камеры: Режим сте­рилизации подбирают таким образом, чтобы нужная доза набира­лась препаратом примерно за сутки. В случае применения быстрых электронов стерилизующая доза набирается за несколько секунд. Флаконы подаются по одному к «окошку», набирают дозу и двига­ются дальше.

Лучевая стерилизация обеспечивает необходимый результат, при этом лекарственные препараты сохраняют свою активность и удо­влетворяют фармакопейным тестам. Внешний вид облученных пре­паратов может меняться, например белые порошки теряют блеск и приобретают матовый оттенок.

Также необходимо иметь в виду, что под влиянием облучения меняется кристаллическая решетка стекла. Оно мутнеет, темнеет, но при этом полностью сохраняет свои функциональные качества. Потемнение стекла обратимо и со временем исчезает.

Существует опыт применения такой стерилизации на примере антибиотиков. Порошки красного цвета (актиномицины) и желтого (тетрациклины) становятся более тусклыми, но обладают прежней активностью. При стерилизации природных и полусинтетических пенициллинов, аминогликозидов и тетрациклинов снижения актив­ности также не происходит. Исключение составляют полиеновые антибиотики: например, нистатин заметно теряет свою активность.

ЗАДАЧА 44

На сегодняшний день производство иммунодиагностикумов можно рассматривать как самостоятельную область…

Вариант ответа

Самые важные области применения иммунохимического анали­за — контроль банков крови, обнаружение возбудителей во внешней среде, диагностика инфекционных заболеваний, диагностика диабета. Иммунодиагностические тест-системы с использованием поликлональных антител созданы практически для всех лекарственных препаратов, однако наиболее широко распространено использова­ние моноклональных антител, так как они являются практически чистыми реагентами, обладают стабильными характеристиками и доступны в неограниченных количествах.

Схема получения моноклональных антител. Каким-либо синтетиче­ским конъюгированным антигеном иммунизируют мышей. Затем лимфоциты из селезенки мыши сливают с помощью ПЭГ с клетками стабильной миеломной линии. Из полученных гибридных клеток отбирают только те, которые унаследовали от клеток селезенки спо­собность продуцировать антитела к ЛС, а от миеломных (опухолевых) клеток — способность к неограниченному росту. Их культивируют и получают клон клеток, продуцирующих антитела к лекарственному препарату. Этот клон прививают мышам для получения асцитных опухолей, и уже из асцитной жидкости выделяют антитела.

При определении хорионического гонадотропина методом твер­дофазного ИФАна полистирольные шарики сорбируют моноклональные антитела к хорионическому гонадотропину. К сенсиби­лизированным шарикам добавляют исследуемую пробу (мочу) и конъюгат, состоящий из маркера и моноклональных антител к другой детерминанте гормона. В результате иммунологической реакции хорионический гонадотропин связывается одной детерминантой с моноклональными антителами, иммобилизованными на поверхно­сти шариков, а другой — с моноклональными антителами конъюгата с маркером (фермент пероксидаза). Затем шарики отмывают от всех несвязавшихся компонентов мочи и определяют активность фермен­та в составе иммунных комплексов с помощью субстратхромогенной смеси. Степень окраски раствора прямо пропорциональна количеству хорионического гонадотропина в образце мочи.

ЗАДАЧА 45

Биотехнологическое производство в фармацевтической промыш­ленности — это система устройств периодического или непрерывного…

Вариант ответа

Объем ферментационных аппаратов для промышленного про­изводства, например антибиотиков, колеблется от 1 до 150 м³. Цилиндрическая поверхность снабжена так называемой тепловой рубашкой, представляющей собой систему змеевиков для обеспечения постоянной температуры. Также ферментер снабжен мешалкой (про­пеллерной, турбинной) для обеспечения хорошего массообмена и спе­циальным устройством для подачи стерильного воздуха определенной температуры — барботером. В нижней части аппарата имеются отбой­ники, необходимые для создания вихревых потоков, которые препят­ствуют образованию «застойных зон». Выращивание посевного мате­риала проходит в отдельном ферментере — инокуляторе. Современные ферментеры снабжены контрольно-измерительной аппаратурой, кото­рая обеспечивает контроль рН, температуры внутри ферментера, коли­чества кислорода в среде, давления внутри аппарата и т.д.

Важность аэрации на стадии ферментации обусловлена тем, что большинство используемых микроорганизмов-продуцентов являются аэробами. В целом потребность в кислороде зависит от концентрации биомассы и ее метаболической активности, что требует регулирования скорости подачи воздуха в аппарат. Регуляцию осуществляют по сово­купности параметров, характеризующих метаболическую активность культуры: скорости потребления углерода, азота, кислорода, интен­сивности дыхания, изменения рН, концентрации растворенного кис­лорода, вязкости культуральной жидкости, концентрации биомассы и т.д. Кроме того, добавление компонентов питательной среды ведет к значительному разбавлению культуральной жидкости и увеличению ее объема в ферментере, что позволяет делать периодические отборы культуральной жидкости, которая затем передается в цех очистки.