Методы выделения чистых культур бактерий.
I. Методы, основанные на механическом разобщении.
1. метод посева штрихом
2. метод посева газоном
3. метод посева по Дригальскому(шпатель не стерелизуют!)
4. метод посева по Голду(количественный)
30-40 штрихов, петлю стерилизуют перед каждым след разнесением
5. метод разведений(количественный)
1:10,1:100,1:1000, потом-посев методом газона из каждой пробирки
6. метод Коха(пластинчатых разводок)
1л,в нем- 1-10мл материала
Разливают ̴ 50 чашек
II. Методы, основанные на биологических свойствах микробов
1. метод прогревания для выделения спорообразующих микробов
материал прогревают при Т=80 ͦ, 20 мин, вегетативные клетки гибнут, споры остаются, при высеве прорастают
2. метод щукевича
для выделения ползучего роста микробов(Proteus, сем. Enterobacteriaceae)
3. обработка материала
а)кислотами для выделения кислотоустойчивых бактерий
б)антибиотиками(пенициллином) – гибнут грамм+, остаются грамм-
в)бактериофагами
4. посев на элективные питательные среды
а)ЖСА(9-10% NaCl для выделения стафилококков)
б)на 1% пептонную воду(pH=8) для выделения холерного вибриона
5. культивирование при определенной температуре
а)+5 ͦ выделение психрофилов
б) +60 ͦ выделение термофилов
Особенности культивирования анаэробных бактерий. Методы создания анаэробиоза.
Физические
• культивирование в анаэростате (выкачивается воздух) или аппарате Киппа (замещается инертным газом, например азотом)
• трубки Виньяль-Вийона (смешивание с расплавленной и охлаждённой питательной средой с её последующим застыванием – глубинное культивирование)
• засев уколом в высокий столбик (полужидкой среды)
• культивирование под слоем масла
• регенерация жидкой питательной среды перед засевом (кипячение с последующим быстрым охлаждением)
• метод Перетца (в чашку Петри заливается охлаждённая среда, смешанная с культурой, на поверхность – предметное стекло, сняв которое можно легко добраться до выросшей культуры)
Химические
• в замкнутом объёме протекает химическая реакция с поглощением кислорода
– метод Аристовского (сыпучие ингредиенты)
– метод Омелянского (жидкие ингредиенты)
• включение в питательную среду редуцирующих веществ (связывают растворённый в среде кислород)
– глюкоза
– тиогликолевая кислота и др.
Биологические
метод Фортнера (в замкнутом объёме культивируются анаэробы и жадный аэроб – после прекращения роста которого в безкислородной среде начинают расти анаэробы)
Метод Кита-Тароцци
среда Китта-Тароцци
МПБ с глюкозой
на поверхности – масло
на дне – кусочки печени
Принципы культивирования микроорганизмов.
| Метод культивирования | Микроорганизмы |
| In vivo: n Культура клеток n Птичий эмбрион n Организм животного | Облигатные паразиты: n Риккетсии n Хламидии n Вирусы |
| In vitro: n Искусственные питательные среды | Почти все патогенные бактерии |
Классификация искусственных питательных сред
n Агар – полисахарид, добываемый из морских водорослей определенных видов; используется для уплотнения питательных сред в бактериологии по такому же алгоритму, как в быту крахмал или желатин
n Свернутые питательные среды – это плотные среды, содержащие сыворотку крови или обогащенные белком (яичные, например), которые уплотняются при прогревании в процессе стерилизации
n Натуральные среды готовятся на основе отваров, экстрактов мяса, рыбы, овощей и др. натуральных продуктов
n Простые натуральные среды представляют собой такие отвары или экстракты
n Сложные натуральные среды получают путем добавления в простые натуральные среды любого вещества (красителя, сахара, антибиотика, крови и т.д.)
n Синтетические питательные среды получают, смешивая чистые химические вещества (как правило, соли)
n Элективные (селективные, избирательные, обогащения) питательные среды – это среды, содержащие вещества, используемые бактериями определенных видов и не благоприятствующие или даже препятствующие росту других бактерий
n Дифференциально-диагностические питательные среды – это среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным свойствам
n Консервирующие питательные среды – это среды, используемые, например, при доставке патологического материала в бактериологическую лабораторию – так как метаболическая активность на них бактерий сводится практически к нулю, то бактерии сохраняются, но не размножаются
N По консистенции
Жидкие
Полужидкие (0,5% агара)
Плотные (1,5-2% агара, свернутые)
N По составу
Натуральные
простые
мясо-пептонный агар и бульон (МПА и МПБ)
желатин
молоко
кусочки овощей
сложные
простые + добавка
Синтетические
N По назначению
Основные:
Универсальные (простые натуральные)
Специальные (сложные натуральные)
Элективные (селективные)
