Селективные агенты Красители

Чувствительность к красителям—один из критериев в систе­матике микроорганизмов. Для их дифференциации на специаль-

 

ных питательных средах используются в основном анилиновые красители. Имеются сообщения о применении красок и для вы­явления факторов патогенности различных бактерий (Григорье­ва Л. В. и соавт., 1991).

Многие красители вводятся в состав сред в качестве инди­каторов рН с целью выявления биохимических свойств микро­организмов по изменению окраски среды. Сведения о диапазо­нах определения рН и особенностях изменения цвета различ­ных красителей представлены в каталоге продукции фирмы «Becton Dickinson» (1988) и в монографии Семенова С. М. (1990).

Широкое применение нашел краситель конго красный для определения вирулентности Sh. flexneri (Daskaleros P., Payne S., 1987; Qadri F. et al., 1988), иерсиний (Riley G., Toma S., 1989) и ус­ловно патогенных энтеробактерий, в частности Е. coli (Поликар­пов Н. А. и соавт., 1990; BerkhoffH., Vinal A., 1986). Вирулентные штаммы данных микроорганизмов связывали конго красный из агаровой среды. В 1988 г. такое же свойство было выявлено BerkhoffH., Vinal А. у трипанового голубого, Calcofluor, Jinopal и бриллиантового желтого.

Синтетическая среда для выявления вирулентных штаммов чумного микроба по признаку пигментации (Инструкция по применению..., 1990) включает 0,03 г/л конго красного.

Для идентификации и дифференциации Y. enterocolitica, об­ладающих плазмидой вирулентности от утративших ее, Bhaduri S. et al. (1991) предлагают метод, основанный на связывании конго красного при лимитировании Са²⁺. Несколько раньше, как уже отмечалось, Bhaduri S. et al. (1987) для выявления вирулентности Y. enterocolitica успешно использовали кристаллический фиоле­товый.

Конго красный входит в состав дифференциально-дигно-стический среды № 67, предложенной Серовым Г. Д. (1966, 1969) для выделения Y. pseudotuberculosis и рекомендуемой так­же для выделения Y. enterocolitica (Ценева Г. Я. и соавт., 1993). Несмотря на высокую селективность, из-за дефицита конго красного (Кузнецов В. И., 1991) и других трудностей в практи­ческих лабораториях она применяется мало. В состав полужид­кой среды для иерсиний Погореловой Н. П. (1984) входит бромтимоловый синий. Для выявления вирулентности Y pestis (Маевский М. И. и соавт., 1988) и Y enterocolitica (Bhaduri S. et al., 1987) предлагается кристаллический фиолетовый. Высокой селективностью и чувствительностью для иерсиний отличается дифференциально-диагностическая среда Кузнецова В. И. (1991), в состав которой входят кристаллический фиолетовый и бромтимоловый синий. Последний краситель является и компонентом плотной дифференциально-диагностической среды БТС (Ценева Г. Я. и соавт., 1991, 1993; Мессорош В. Г., 1994). Cipriano R., Pyle J. (1985) определяли утилизацию сор-

бита штаммами Y. ruckeri на среде с 24 мг/л фенолового крас­ного.

Плотная дифференциальная среда для одновременного вы­явления кальцийзависимости и пигментосорбции, разработан­ная Саямовым С. Р. (1994) на основе 10-кратного концентрата среды 199, содержит 3 мг% трипанового синего в качестве сорби­руемого пигмента.

Генциановый фиолетовый рекомендуют использовать в раз­работанных ими средах для чумного микроба Степанов В. М., Радченко Г. А. (1986), Реброва Р. Н. и соавт. (1986), Васильева 3. И. и соавт. (1992) с целью повышения ростовых свойств и селектив­ности.

Waters G. et al. (1988) предложили выделять патогенные шт. Y enterocolitica из мясных продуктов на среде обогащения ITC, содержащей малахитовый зеленый.

По данным Сох N. et al. (1990) оптимальным для выделения Y. enterocolitica является сочетание бульона Шейманна, включа­ющего бенгальский розовый и фосфатно-буферного раствора с пектиновым или цефсулодин-иргазан-новобиоциновым (CIN, в русской транскрипции—ЦИН) агарами.

Сравнение выделяемости Y. enterocolitica выявило большую эффективность агара МакКонки, модифицированного с тви-ном-80 по сравнению со средой с бриллиантовым зеленым и желчным агаром с фиолетовым красным (Akbulut N. et al., 1994).

Широкое применение в качестве индикатора дифференци­ально-диагностических сред Гисса и ЦДС для идентификации чумного и псевдотуберкулезного микробов нашел фуксин кис­лый. Яромюк Г. А. и соавт. (1990) подробно описывают виды фу-ксинов, производимых отечественной промышленностью и сте­пень пригодности их в бактериологических исследованиях.

Для дифференциации энтеробактерий Балаклеец В. С. и со­авт. (1987, 1991) предлагают среды, где в качестве индикатора и селективного агента используются нейтральный красный, фено­ловый красный и бриллиантовый зеленый. Соколова К. Я. и со­авт. (1992) применяют для этой цели среду с бромтимоловым си­ним.

Veronika L. (1985) отмечает высокую селективность, в сравне­нии со средами Эндо и VRBL, бролациновой среды, содержащей бромтимоловый синий при идентификации колиподобных бак­терий.

Литинским Ю. И. и соавт. (1976) для выделения сальмонелл из испражнений методом «подвижного роста» предложены сре­ды в состав которых входили бромтимоловый синий и крезоло-вый красный.

Из селективных сред наилучшим ростом сальмонелл и ста­бильностью, по данным Schomburg I. (1983), отличался агар с бриллиантовым зеленым.

 

Многолетние работы по выделению сальмонелл из фекалий на полужидкой среде обогащения Раппапорта (стандартная сре­да с 0,8% агара) показали более высокую специфичность (95,1%) и эффективность (80,3%) по сравнению с агарами МакКонки (частота выделения сальмонелл 11,1%),—SS (30,2%) и с брилли­антовым зеленым (77,2%). На модифицированной среде количе­ство выделенных сальмонелл по сравнению со стандартным ме­тодом исследования возрастало в среднем на 22,5% (Goossens H. etal., 1984).

Шиганова В. Л. (1976) для целей выделения сальмонелл и шигелл из морской воды заменила в магниевой среде накопле­ния (Калина Г. П., Шиганова В. Л., 1972) ингибитор бриллиан­товый зеленый более мягким по действию кристаллическим фиолетовым. Она зарекомендовала себя положительно при сравнении с магниевой средой, средой для выделения грамот-рицательных микробов (Graft, Miller, 1956) и средой на охме­ленном сусле (рецепт НИИ общей и коммунальной гигиены им. Сеченова АМН СССР).

Результаты выделения сальмонелл из пищевых продуктов и кормов на бульоне Раппапорта—Вассилиадиса с малахитовым зеленым более воспроизводимы, чем на тетратионатном бульоне с бриллиантовым зеленым (среда Мюллера—Кауффмана) и она рекомендована вместо среды Мюллера—Кауффмана в стандарт­ном методе ISO для выделения Salmonella.

Goetz-Grospiron E, Baron D. (1986) показали, что наилучшим из сравниваемых методов выделения сальмонелл из проб ила сточных вод является получение накопительных культур на сре­де Мюллера—Кауффмана с последующим культивированием на агаре с бриллиантовым зеленым.

Humbert F. et al. (1989) после обогащения выделяли сальмо­неллы из мясных продуктов на агарах с бриллиантовым зеле­ным и дезоксихолатном. Показана идентичность по чувстви­тельности и специфичности субкультивирования сальмонелл на модифицированной плотной среде с бриллиантовым зеле­ным после селективного обогащения (Bager Е, Petersen J., 1991) методу сочетающему обогащение в бульоне Раппапорта—Вас­силиадиса с определением специфических антигенов сальмо­нелл.

При выделении сальмонелл после селективного обогащения на бульоне Раппапорта—Вассилиадиса чувствительность агара Gassner (имеет в составе водный голубой и метахромовый жел­тый) составляла 91,7%, агара Kaunrnann (имеет в составе брилли­антовый зеленый и феноловый красный)—86,1% (Weber A., Re-nate W, 1994).

Из использованных 5 селективных и обогатительных бульо­нов наилучшие результаты при выделении Sal. dublin из испраж­нений КРС Hoszowski A. (1989) получил на бульоне Мюллера— Кауффмана, Sal. typhimurium—на селенитовом бульоне с брил-

лиантовым зеленым (однако хорошее выделение отмечалось и на бульоне Мюллера—Кауффмана и на средах с малахитовым зеле­ным), Sal. cholerae—на V—бульоне.

С целью повышения точности идентификации Sal. typhi пу­тем предобогащения и двойного пересева, Подплетенная И. М. (1992) рекомендует дополнительно первично идентифицировать на комбинированных средах лактозоположительные, не образу­ющие газ и сероводород культуры и пересевать их на среду, со­держащую из красителей 11—12 г/л 0,2%-ого водного раствора бромтимолового синего.

Олькеницкий И. С. (1958) предложил модификацию среды Крумвида, в которую входит 0,4%-ый раствор фенолового крас­ного. Из-за невозможности исключения на ней и среде ДУКС аналогов шигелл, Калина Г. П., Трухина Г. М. (1990) разработали среды, имеющие в своем составе щелочные растворы бромтимо­лового синего (среда Ш-2) и фенолового красного в сочетании с водным раствором кристаллического фиолетового (среда Ш-3). В качестве основы селективных для выделения шигелл сред с ан­тибиотиками применяют агар с эозин—метиленовым синим (ЭМС).

Используемый для селективного обогащения и определения титра Е. coli бульон BGB (Brilliant Green Bile Lactose Broth) вклю­чает бриллиантовый зеленый.

Freier Т. et al. (1987) сравнивали эффективность сред m-LMM и m-TMM со стандартными средами Эндо, m-FC и PTG. В состав среды m-LMM входили, помимо других компонентов, 80 мг/л бромкрезолового пурпурного. В среду m-TMM, кроме того, перед стерилизацией вносили 0,25 мг/л Tertigol (тертигол) 7. На этих средах вырастали желтые колонии бактерий группы кишечных и фекальных кишечных палочек.

В журнале «Lab. Pract.» (1989, с. 39) рассматривается способ ускоренного выявления Е. coli—индикатора бактериальной кон­таминации, в образцах воды путем включения MUG (4 methyl-umbelliferyl-p-D-glucuronide) в состав трех питательных сред: желточного бульона с 2% бриллиантового зеленого, лаурилсуль-фатного бульона и бульона ЕС. С помощью данного метода Е. coli может быть выявлена в чистой или смешанной культуре че­рез 4—24 ч.

Для дифференциации энтеропатогенных эшерихий предла­гаются среды, содержащие кристаллических фиолетовый (Кати­на Г. П., 1979), конго красный (Yoder H., 1989), комбинацию фе­нолового красного и анилина синего.

Красильников А. П. и соавт. (1972) рекомендуют выявлять клебсиеллы на бромтимоловом агаре с лактозой и пеницилли­ном.

Предложенная Legakis N. et al. (1976) синтетическая солевая среда, содержащая бромтимоловый синий как рН-индикатор, селективно поддерживает рост не только Kl. pneumoniae, но и

Serratia spp. В составе плотной среды для клебсиелл «Klebsiella 5-АСК» (Сиволодский Е. П. и соавт., 1994) также присутствует 0,06—0,08 г/л бромтимолового синего.

Модификации агара Эндо с использованием других краси­телей с ингибиторным действием для дифференциации по мор­фологии колоний клебсиелл были разработаны Campbell L., Roth G. (1975). В частности, ингибитором для некоторых бакте­рий являлся метиловый фиолетовый 2В, тогда как для клебси­елл он селективен (Campbell L. et al., 1976). Этот краситель, как показали Fung D., Miller R. (1973), в определенной концентра­ции ингибирует рост Е. coli, поддерживая рост Клебсиелла-Эн-теробактер-Серратиа. Мартыненко Л. Д., Солдатова Л. В. (1989) рекомендуют вводить в среду для клебсиелл 0,01% малахитово­го зеленого. Chein Se-Ping, Fung D. (1990) показали возмож­ность выделения и подсчета К1. pneumoniae на желчном агаре с акрифлавином и фиолетовым красным. Наиболее оптимальной для подсчета К1. pneumoniae была концентрация акрифлавина 0,01% (исследовался диапазон от 0,01 до 0,06%). Другие микро­организмы либо подавлялись, либо их колонии отличались от колоний Kl. pneumoniae.

Бромтимоловый синий входит в состав элективных для хо­лерных вибрионов бромтимоловый синий-типол-агара и его оте­чественного аналога, предложенного Либинзоном А. Е. (1974), а также сред Попова А. Б. и соавт. (1976), Фельдмана Ю. М. и со­авт. (1984), Середина В. Г. и соавт. (1990). Последняя среда уско­ряет выделение и идентификацию холерного вибриона.

В полужидкую среду Ибрагимова Ф. X. и соавт. (1989, 1990) входит 2 г/л конго красного, дополняющего, отчасти, ингиби-торный эффект в отношении сопутствующих микробов. Параге-молитические вибрионы, сдвигая рН в кислую сторону, изменя­ют окраску конго красного в иссиня-черный цвет. Показано пре­имущество предложенной среды по сравнению со средой Либинзона А. Е. (1974). Хорошими накопительными свойствами обладают глюкозосолевой типоловый бульон GSTB (Joseph S. et al., 1982) и его модифицированный вариант (Bartley С, Slanets L., 1971), содержащие, в частности, метиловый фиолетовый. В каче­стве среды обогащения используется солевой пептонный бульон с этиловым фиолетовым (Beuchat L., 1976).

По Fung D., Miller R. (1973), изучавшим действие 42 красите­лей на микроорганизмы клинического происхождения (стафи­лококки, микрококки, энтеробактерии, эшерихии и др.), рост Ps. aeruginosa тормозил только кристаллический фиолетовый. Нес­колько иные данные получены Киприановой Е. А., Корнюшен-ко О. Н. (1978), определившими видовую чувствительность псев­домонад к 49 красителям. Наиболее широким антимикробным спектром обладали метиловый и кристаллический фиолетовые, метиловый зеленый; тогда как анилиновый голубой и феноло­вый красный—вообще не угнетали псевдомонады.

Рожавиным М. А., Бугаевой Е. И. (1986) представлен крат­кий, но емкий обзор литературы по использованию селективных агентов для выделения Ps. aerugenosa, в том числе бриллиантово­го зеленого (Жарикова М. С. и соавт., 1983), кристаллического фиолетового (Mossel D. et al., 1976) и кристаллического фиолето­вого в сочетании с нейтральным красным (Daly J. et al., 1984).

Поданным Schubert R., Blum H. (1974) малахитовый зеленый в концентрации 1:100000, не тормозя рост Ps. aeruginosa, задер­живает рост большинства видов других псевдомонад, что послу­жило основанием для включения среды с этим ингибитором в нормативный документ ФРГ DIN (Deutsche Institut fur Normung 3841, часть 5, Эрфурт, 1981). Однако в обстоятельной работе Geuenich H., Muller S. (1982) показана низкая результативность среды с малахитовым зеленым по прописи DIN в сравнении с другими средами. Подвергаются сомнению (Калина Г. П., Ком-золова Н. Б., 1988) ингибирующие свойства и бриллиантового зеленого, отмечавшиеся Lowburry Е. (1951), Gould J., McLeod J. (1960). Этот краситель входит в состав бульона с мертиолатом, применяемого в исследовании испражнений (Lowburry E. (1951) и селенитовой среды—используемой при анализе воды (Neme-di L., Lanyi В., 1970). В нашей стране он включен в накопитель­ный бульон для одноступенчатого выделения Ps. aeruginosa (Кол-кер И. И. и соавт., 1977). Для выявления данного микроорганизма Schubert R. (1989) предложил среду ABGP, включающую крезоло-вый красный, бромтимоловый синий и бриллиантовый зеленый. В частности, бриллиантовый зеленый в использованной концент­рации подавляет рост грамположительных микроорганизмов, но не токсичен для Ps. aeruginosa.

Еще в 1948 году Miller W. et al. рекомендовали для подавления других видов микроорганизмов при изоляции возбудителя ме-лиоидоза применять кристаллический фиолетовый (1:200000), профлавин, акрифлавин, акридины оранжевый и желтый (1:500000), фуксин основной или кислый (1:100000), малахито­вый или бриллиантовый зеленый (1:1000000). Эти красители для аналогичных целей используются и при изоляции возбудителя сапа, хотя в определенной степени задерживают и без того недо­статочный рост последнего. Жога Л. К. и соавт. (1995) при конст­руировании транспортной среды для патогенных псевдомонад в качестве ингибиторов сопутствующей микрофлоры использова­ли красители, не влиявшие на возбудителей сапа и мелиоидоза, устойчивых, например, к генциановому фиолетовому.

Феноловый красный содержится в FC-arape для культивиро­вания Bord. bronchiseptica (Vidic В. et al., 1993).

Калфин Е. X. (1962) включил для диагностики туберкулеза в среду Безредки ряд дополнительных ингредиентов. Малахито­вый зеленый при этом снижал загрязнение среды банальной ми­крофлорой. Между тем, Stottmeier D. (1962) отмечает невозмож­ность отличить атипичные и сапрофитные микобактерии между

 

2 3-235

собой и от М. avium посредством питательных сред с феноловым
красным или при сочетании фенолового красного с малахито­
вым зеленым. „„ '

Мордовской Г. Г., Ступина Н. М. (1975) изучили эффект ряда красителей на характер и сроки роста микобактерий туберкулеза на среде «Новая». Влияние пищевых красителей и нигренола в концентрациях 80 мг/мл отсутствовало. Конго красный обладал наименьшим туберкулостатическим действием (40 мг/мл), брил­лиантовый зеленый почти в 20 раз (2 мг/мл), малахитовый зеле­ный—в 40 раз и генциановый фиолетовый—в 200 раз более эф­фективнее, а метиленовый синий полностью задерживает рост микобактерий туберкулеза при данных концентрациях. Малахи­товый зеленый в оптимальных концентрациях (0,3—0,6 мг/мл) не задерживает рост микобактерий, но угнетает стафилококки, на которые не влияют пищевые красители и нигренол. Брилли­антовый зеленый задерживает рост стафилококка только при концентрациях в 10 раз превышающих оптимальные величины, не действующие на рост микобактерий туберкулеза. Таким обра­зом, не найдено эквивалентных заменителей малахитового зеле­ного Между тем, имеются данные (Muller G., Galisti G) о рост-стимулирующем эффекте бриллиантового зеленого на М. tuber­culosis, вследствие чего этот краситель используется в среде ПГ-30 (Ковалев Г. К., Александров Н. А., 1969).

Ковалев Г. К. (1982, 1988) сравнил дифференцирующую цен­ность для М. bovis и М. tuberculosis сред Вагенера—Мичерлиха (Wagener К., Mitscherlich E., 1951) с бромкрезоловымпурпурным; Альтерфогта-Кукхерма (Altevogt R., Kuckherm В., 1955) содер­жащей комбинированный индикатор; Лебека (Lebek G 1958) с добавлением бромтимолового синего по Schmiedel A. (1960); и Нассаля (Stottmeier D., 1962). Для последней основой являлась среда II Петраньяни с введением фенолового красного или ком­бинированного индикатора из фенолового красного с малахито­вым зеленым. Принцип действия всех перечисленных сред осно­ван на свойстве М. tuberculosis ферментировать глицерин с обра­зованием кислоты, а М. bovis, напротив, сдвигает рН в щелочную сторону. Сдвиг рН среды улавливается индикатором, в качестве которого и используются те или иные красители. Однако разви­тие резистентности к туберкулостатикам приводит к ряду необ­ратимых нарушений процессов метаболизма у микобактерий, в частности кислотообразования при расщеплении глицерина, и среды не срабатывают (Meissner G., 1961). В то же время, У неко­торых растущих эйгонических вирулентных для кроликов М. bo­vis, напротив, рН смещается в кислую сторону.

Микобактерий очень устойчивы к трифенилметановым кра­сителям (кристаллический фиолетовый, основной фуксин, бриллиантовый и малахитовый зеленые), поэтому малахитовый зеленый часто включают в среды для выделения М. tuberculosis в целях подавления роста других бактерий. Его содержание в про-

писях питательных сред, рекомендуемых разными авторами (табл. 1) колеблется в широких пределах—от 0,0001 до 0,12%. Не задерживая полностью рост плесневых грибов, малахитовый зе­леный, в то же время, абсолютно угнетает рост М. tuberculosis и М. bovis при дозе 0,09% (Тимченко 3. К., 1985).

Таблица 1.

Содержание малахитового зеленого в средах для выделения М. tuberculosis (по Тимченко 3. К., 1985 с дополнениями)

 

 

	Питательная среда	Кол-во малахитового зеленого, %
	Биотин-каталазная	0,0001
	Шула (Sula)	0,0005
	Лангенштейдта	0,00105
	Middlebrook7H10H7Hll	0,0025
	Калфина Е. X. Мельник Е. Т., Плоскирева Н. В.	0,02
	Финна-2	0,02
	Огавы (Ogawa)	0,02
	среда № 10 (Коваля Н. Н., 1977)	0,02
	Гельберга С. И.	0,025
	Левенштейна- Йенсена	0,03
	Лаанес-Тайместер	0,03
	Смолянского А. 3.	0,03
	среда ATS	0,036
	Зимина А. Е.	0,05
	Петраньяни	0,05
	Стоунбрика (Stonebrink)	0,07
	Розенблат В. М.	0,08
	Аникина В. А. и др., 1982 (брил, зел.)	0,01-0,1
	Рр1тястпяп1	0,12
	-Г CLldglldlil Коваль Н. Н., 1980; Самилло Г. К, 1988

По данным Lior H., Patel A. (1987) на модифицированной среде с толуидиновым синим ДНК-азная активность обнаружи­валась у большего, чем на агаре с метиленовым зеленым (Appl. Microbiol., 1969, v. 18, p. 991—993) количества штаммов кампило-бактерий (С. pylori, С. jejuni, С. coli, С. laridis). А у С. pylori ДНК-азная активность вообще выявлялась только при использовании первой среды.

Ставский А. В., Червонная Н. И. (1992) с целью повышения селективных свойств, упрощения и ускорения выделения пато­генных стафилококков дополнительно вводили в среду также 3— 3,5 мл 0,1 %-ого водного раствора кристаллического фиолетового на 1 л среды. Van Enk R., Thompson К. (1992) разработали для вы­деления метициллинустойчивых St. aureus модифицированную

 

2*

селективно-дифференциальную среду, содержащую феноловый красный. Из 30 видов бактерий и 5 видов грибов на ней росли лишь метициллинустойчивые St. aureus, St. xylosus, Candida tropi-calis и Proteus mirabilis.

Для индикации патогенных стрептококков в молоке и молоч­ных продуктах используют среду ТКТ, имеющую в своем составе кристаллический фиолетовый. Для выделения агалактииных стрептококков предлагаются селективные среды с кристалличе­ским фиолетовым (Edwards, 1933), а гноеродных стрептокок­ков—с генциановым фиолетовым (Garrad G., 1933).

Среда SMA, предназначенная для выращивания всех видов вызывающих мастит стрептококков и позволяющая дифферен­цировать Str. faecalis и непатогенные стрептококки, содержит в своем составе кристаллический фиолетовый, бромкрезоловый пурпурный и бромкрезоловый зеленый (Wilson J., Jeffrey D., 1987).

При конструировании элективной среды для выделения па­тогенных стрептококков Дзюбак А. П. (1993) использовал генци-ановый фиолетовый.

Осокина Т. И., Алиева Р. О. (1986) показали неэффектив­ность, в сравнении с 2,3,5-трифенилтетразолия хлоридом, ис­пользования в качестве редоксиндикаторов метиленового сине­го, фенолового красного и нейтрального красного в среде для оп­ределения чувствительности пневмококков к антибиотикам.

Шеломинская Т. Д., Балаклеец В. С. (1991) использовали в среде для выделения энтерококков как селективный агент кри­сталлический фиолетовый.

Гаджиева Г. Р. и соавт. (1989) предлагают оригинальную среду для выделения U. urealyticum с использованием бромкрезолово-го пурпурового. Хилькевич Н. Д. (1991) высевал U. urealyticum на жидкую среду с индикатором бромтимоловым синим (окраска изменяется с желтой на зеленую в течение 24 ч). 67% колоний данного микроорганизма росли на плотной среде, т. е. имели ме­сто 33% ложноположительных результатов.

Башмакова М. А., Солдатова В. М. (1969, 1971) показали при­годность для выделения микоплазм из полового тракта женщин жидких дифференциально-диагностических сред, содержащих как индикатор 0,002% раствор фенолового красного и один из компонентов, по разложению которого проводили индикацию роста микоплазм. Плотные варианты не годились, т. к. ожидае­мого изменения цвета среды вокруг колоний микоплазм не бы­ло. Феноловый красный в качестве индикатора присутствует так­же в среде Escarquel С, Grosso M.-H. (1989), позволяющей высо-коспецифически выращивать микоплазмы, значимые в человеческой патологии, и среде Маврова И. И. и соавт. (1992) для выделения уреаплазм.

Praznik J. (1969) рекомендует использовать при выделении М. pneumoniae из дыхательных путей и мочеполового тракта агар

с метиленовым синим по Крейбиллу. Antal V. et al. (1988) выдели­ли от лошадей ахолеплазмы, которые ферментировали глюкозу, редуцировали тетразол и метиленовый синий, адсорбировали эритроциты и не расщепляли аргинин.

Goldschmidt M. et al. (1991) показали пригодность неингиби-рующей среды (YM-arapa), содержащей 0,01% анилинового го­лубого красителя W6, цветной индекс 42780 (YMAB), для уско­ренного выделения и идентификации С. albicans среди изучен­ных 1554 шт. дрожжей.

Ряпис И. В., Янушкина О. С. (1991) предложили селективную среду для определения принадлежности исследуемых дрожжей к виду С. maltosa, включающую для повышения специфичности, упрощения и ускорения исследования, дополнительно родамин 6Ж и акрифлавин.

Bragulat M. et al. (1995) исследовали влияние ряда красителей на эффективность подсчета колоний грибов в чистых и смешан­ных культурах. Используя солодовый экстрактный агар как ос-новую и контрольную среду, были испытаны следующие концен­трации красителей: 0,000025 аурамина, 0,000005 генцианового фиолетового и 0,000001 малахитового зеленого. Наибольшая численность обычно отмечалась в среде с дихлораном, бенгаль­ским розовым (рекомендуемые ингибиторы распространения плесени) или аурамином. Малахитовый зеленый использовался в основном как жесткий ингибитор распространенных плесеней, позволяющий только адекватное развитие и восстановление тес­тируемых штаммов Fusarium и Aspergillus.

Jones L., Brinley M. (1958) показали, что среды с бактериоста-тическими красителями являются ингибиторными для Br. abor­tus биотип 2 и других привередливых штаммов. Использование вместо красителей антибиотиков давало возможность расти всем биотипам видов бруцелл, выявляемых на селективных средах. По данным Пинигина А. Ф. и соавт. (1979) бруцеллы, выделенные от северных оленей, растут на питательных средах в присутствии основного фуксина, тионина; метиловый фиолетовый, кристал­лический фиолетовый и пиронин Б их рост подавляют. Тарасова Т. А. и соавт. (1983) получали гладкий вариант Br. ovis пассажем на средах с анилиновыми красителями. Мо­дифицированная Barrow G., Peel M. (1987) селективная среда Mair N. (1955) содержит, помимо антибиотиков, генциановый фиолетовый. Неспособность некоторых штаммов Br. abortus рас­ти на ней подтверждает их чувствительность к очень низким кон­центрациям красителя, признаваемую Mair N. (1955).

Окрашивание колоний L. pneumophila бромкрезоловым пур­пурным и бромтимоловым фиолетовым в среде Wadowsky R, Yee R. (1981) улучшает их идентификацию (Renner E., Tseng С,

Szynkiewicz Z., Binek M. (1986), оценивая селективные среды Для первичного выделения Т. hyodysenteriae и Т. innocens, опреде-

 

лили оптимальные концентрации наиболее эффективных инги­биторов, в том числе и бриллиантового зеленого.

По данным Mishra S. et al. (1987) из селективных сред для первичного выделения Aeromonas spp. из фекалий животных содержащая бриллиантовый зеленый и соли желчных кислот оказалась наименее эффективной. Хотя наилучшей, в том чис­ле по чувствительности, оказалась среда, содержащая 30 мг/л ампициллина, для улавливания ампициллинчувствительных штаммов Aeromonas и негемолитических A. caviae, авторы реко­мендуют использовать комбинацию среды с ампициллином и среды, содержащей ДНК-азу, толуидин голубой и ампициллин 10 мг/л.

Для подсчета мезофильных видов клостридий Weenk G. et al. (1995) использовали агаровую среду с бромкрезоловым фиолето­вым.

Антибиотики

Селективные среды с антибиотиками для выделения ши-гелл в нашей стране разработаны Черномордиком А. Б. (1957). В качестве их основ применяют обычные коммерческие среды Плоскирева, ЭМС, Эндо с добавлением антибиотика, при вы­боре которого учитывают антибиотикограммы выделяемых в данной местности штаммов шигелл (тетрациклин, стрептоми­цин, левомицетин—у нас в стране и новобиоцин, ампициллин и др.—за рубежом, например в среде МакКонки). Ценность сред с антибиотиками теснейшим образом связана с контролем спектра антибиотикоустойчивости шигелл. В условиях меняю­щейся тактики применения антибиотиков в терапии дизенте­рии, ветеринарной практике и т. д. штаммы шигелл могут не только приобретать новые, но и утрачивать прежние маркеры устойчивости. Последнее следует иметь в виду при конструи­ровании сред с антибиотиками (Прямухина Н. С. и соавт., 1980).

По данным Cummings M. et al. (1987), сравнивавшего 3 жид­кие среды, добавление пенициллина, полимиксина В, амфоте-рицина В и эритромицина положительно сказывается на выделе­нии М. hominis.

По Jorgensen J. et al. (1987) и Barry A. et al. (1988) определе­ние чувствительности Н. influenzae к антибиотикам на среде НТМ сопоставимо, или даже эффективнее (для ампицилли­на, аугментина, бисептола, эритромицина и кларитромици-на), чем на других жидких и плотных средах, включая бульон Мюллера-Хинтона и шоколадный агар, рекомендованных На­циональным Комитетом по стандартам в клинической микро­биологии для этих целей. Особенно важно, что на среде НТМ возможно правильное определение чувствительности к три-

метоприм/сульфометоксазолу. Dabernat H. et al. (1993) опреде­ляли на этой среде чувствительность Н. influenzae к р-лакта-мам.

В качестве селективной при исследовании загрязненных проб используется среда с неомицином, фурацилином и фураги-ном (Шипицын А. Н., Слинько В. Г., 1979).

Adler В. et al. (1986) предлагают для выделения лептоспир из клинического материала, контаминированного посторонней микрофлорой, полужидкую твин-альбуминдвую среду EMJH, в состав которой включены актидион, бацитрацин, 5-фторурацил, неомицина сульфат, полимиксин В и рифампицин.

Szynkiewicz Z., Binek M. (1986) определили оптимальные концентрации наиболее эффективных ингибиторов (спектино-мицина и ванкомицина) в селективных средах для первичного выделения Т. hyodysenteriae и Т. innocens.

По данным Kunkle R. et al. (1988) концентрация микробных клеток Т. hyodysenteriae, выращенных на триптиказо-соевом ага­ре с добавлением спектиномицина; колистина и ванкомицина; либо спирамицина, рифампицина, ванкомицина, колистина и спектиномицина была идентичной.

Комплекс антибиотиков используется в плотных селектив­ных средах для выделения кампилобактерий из фекалий людей и внутренних органов животных и птиц.

Голиков А. В., Зенин И. В. (1980) предлагают среду ПСТК для выделения термофильных кампилобактерий (С. jejuni и С. coli) из фекалий, селективными компонентами которой яв­ляются рифампицин, подавляющий рост грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов; полимиксин М, актив­ный в отношении грамотрицательных микроорганизмов, и противогрибковый препарат нистатин. Перечисленные препа­раты не подавляют рост термофильных кампилобактерий (MIC более 100 мкг).

Bolton F. et al. (1988) исследовали эффективность для выделе­ния из фекалий кампилобактерий следующих селективных ага­ров: Skirrow, Preston, Fennell и модифицированный агар ССД. Самой селективной оказалась среда Fennell. На основании полу­ченных результатов для выделения Campylobacter рекомендуется модифицированный агар ССД с амфотерицином.

Для подавления сопутствующей микрофлоры наиболее по­пулярна комбинация селективных агентов по Скирроу (Skirrow): 10 мг/л ванкомицина, 2500 МЕ/л полимиксина В, 5 мг/л триме-топрима (Рожавин М. А., Струк В. М., 1989; Krajden S. et al, 1987; Coudron P., Kirby D., 1989). В связи с тем, что полимиксин В не­редко угнетает рост С. pylori, он был заменен цефсулодином. а для подавления роста грибов добавлен амфотерицин В, что су­щественно повысило эффективность среды (Dent J., McNalty С, 1988). Кроме того, к средам добавляют цефалексин, налидиксо-вую кислоту, бисептол, рифампицин, полимиксин М и др. как по

 

отдельности, так и в различных сочетаниях (Чайка Н. А. и соавт., 1988; Иванов В. П. и соавт., 1991; Patton С. et al., 1981; Bolton F. et al., 1984; Goodwin С et al., 1985; Rinkard K. et al., 1986; Barbosa A. et al., 1988; Parsonnet J. et al., 1988).

Queiroz D. et al. (1987) разработали индикаторную среду для С. pylori на основе сердечно-мозгового агара с добавлением ван-комицина, налидиксовой кислоты, амфотерицина В.

Lambert Т. et al. (1986) установили наибольшую ингибирую-щую активность С. pylori у пенициллина, ампициллина, амокси-циллина, цефотаксима, тобрамицина, гентамицина и тетрацик­лина; несколько меньшая—у цефалотина, канамицина и эритро­мицина. Все штаммы были резистентны к ванкомицину, но многие культуры были достаточно чувствительны к колистину и налидиксовой кислоте. Значительная резистентность С. pylori отмечалась к цефсулодину.

Riedel В. et al. (1987) для выделения термофильных кампило-бактерий использовали агар Колумбия с селективными добавка­ми, ингибирующими рост контаминантных бактерий (10 мг/л ванкомицина, 2,5 МЕ/л полимиксина В, 15 мг/л цефалотина и 2 мг/л амфотерицина В). Выделенные штаммы С. jejuni обладали высокой чувствительностью к доксициклину, неомицину, эрит­ромицину, фуразолидону и амоксициклину. Некоторые культуры были устойчивы к хлорамфениколу и абсолютно все штаммы С. jejuni—резистентны к сульфаметоксидиазину.

Известно, что возбудители сапа и миелоидоза чувствительны к тетрациклину, новобиоцину, канамицину, хлорамфениколу, то­гда как антибиотикограммы Ps. fluorescens и Ps. putida носят иной характер—они чувствительны к полимиксину и антибиотикам-аминогликозидам (Von Graevenitz A., 1985). Более подробно видо­вая чувствительность псевдомонад к различным антибиотикам рассмотрена в монографии Смирнова В. В., Киприанова Е. А. (1990).

Рассмотрим вкратце отдельные антибиотики, наиболее часто используемые в микробиологических средах.

Препараты нитрофуранового ряда (производные 5-нитрофу-рана)—фурациллин, фурагин, фурадонин. Zacharian P., Listen J. (1973) установили отсутствие влияния фурагина на рост Ps. aeru­ginosa при угнетении развития других микроорганизмов. Используется фурагин в сочетании с фурапилином в средах для выделения лептоспир (Шипицын А. Н., Слинько В. Г, 1979) и Ps. aeruginosa (Ароне Р. М., Чурсина Т. В., 1975, 1976). Кроме то­го, для выделения Ps. aeruginosa применяются фурациллин с фу-радонином (Mossel D. et al., 1976; Negretti E, Trabattoni C, 1984). Фурадонин в качестве ингибитора сопутствующей микрофлоры входит в состав селективной среды для выделения кишечных иерсиний (Бондаренок В. М. и соавт., 1983).

Пенициллин рекомендуется вводить в среды для подавления сопутствующих видов микроорганизмов при выделении псевдо-

монад, в частности возбудителя мелиоидоза (Miller W. et al., 1948), Ps. aeruginosa (Sands D., Rovira A, 1970; Тыдельская И. Л. и соавт., 1980). Недостатком этого антибиотика является невоз­можность длительного (более 2 нед) хранения готового состава сред в холодильнике из-за инактивации (Рожавин М. А., Бугаева Е. А., 1986). Калина Е П., Комзолова Н. Б. (1988) рекомендуют для накопления Ps. aeruginosa заменить в среде Bonde пеницил­лин на кристаллический фиолетовый как более мягкий ингиби­тор—эффективность этой модифицированной среды проверена на большом материале и признана официально. Ps. mallei доста­точно чувствительны к пенициллину, который, наряду с посто­ронней микрофлорой, тормозит и их рост. Важно отметить что бензилпенициллин является питательным субстратом для па­тогенного микроорганизма Ps. cepacia, вызывающего более тя­желые осложнения и больший процент летальных исходов, чем Ps. aeruginosa (Prince A., 1986).

Устойчивость микоплазм к пенициллину позволяет исполь­зовать его в качестве селективного агента. Cummings M. et al. (1987) показали увеличение выделяемое™ М. hominis при добав­лении в среду культивирования 500 ЕД/мл пенициллина. Жевер-жеева И. В. и соавт. (1983) добавляли в среду 1000 ЕД/мл пени­циллина. Однако некоторые виды (М. neurolyticum, M. hyopneu-moniae, M. floculare) более чувствительны к нему. Raddi M. et al.

(1992) рекомендуют культивировать уреаплазмы, в частности
U. urealyticum, в клинических лабораториях на среде U-9, в со­
став которой входит пенициллин.

Среда G20G, содержащая пенициллин (Smith I., Baskerville A., 1979), и агар МакКонки, куда дополнительно вводят пенициллин и нитрофурантин (Elias В., Galgoczi В., 1981), используются для изоляции Bord. bronchiseptica (Smith I., Baskerville A., 1979). Наи­более эффективно добавление в питательную среду комбинации пенициллина с фуралтадоном (Hommez J. et al., 1984). Vidic В. et al.

(1993) на различных плотных средах исследовали чувствитель­
ность Bord. bronchiseptica к ряду антибиотиков. Наилучшие ре­
зультаты получены при использовании кровяного и FC—агаров,
содержащих пенициллин в сочетании с цепорексом или с нитро-
фурантином (68-69,4%).

Пенициллин используется в среде для выделения возбудите­ля туляремии из материалов обильно обсемененных другими ми­кробами (Кундин В. А., 1969). Однако эта среда слабочувстви­тельна и имеет низкие ростовые свойства (Сухарь В. В. и соавт., 1989).

В состав полужидкой среды Погореловой Н. П. (1984) для J- enterocolitica помимо других компонетов вводятся 20 ЕД/мл пенициллина в сочетании с полимиксином.

Отмечается чувствительность к бензилпенициллину 95,4% штаммов цитробактеров, выделенных из фекалий людей и из внешней среды (Садыкова М. Ш. и соавт., 1986).

Красильников А. П. и соавт. (1972) предложили специальный бромтимоловый агар с пенициллином для диагностики склеро­мы и озены (клебсиеллы).

В средах Campbell L., Roth G. (1975) ингибитором ряда бакте­рий является пенициллин, тогда как для группы Клебсиелла-Энтеробактер-Серратиа он селективен.

Lambert Т. et al. (1986) установили высокую ингибирующую активность пенициллина применительно к С. pylori.

Пенициллин входит в состав селективной среды VPBC для парагемолитических вибрионов, где подавляет, по оценке Ushiji-ma Т. et al. (1985), рост большинства энтеробактерий, стафило­кокков, клостридий, бифидумбактерий и некоторых других.

Неустроева В. В. и соавт. (1983) культивировали L-формы стрептококка на среде с 1000 ЕД/мл пенициллина. Отмечается L-трансформации микобактериальных клеток под воздействием пенициллина (Шим Н. В. и соавт., 1989).

Бойков Ю. И. (1968) рекомендует дифференцировать В. ап-thracis по росту на МПА с пенициллином. Отмечается L-транс-формация микобактериальных клеток под воздействием пени­циллина (Шим Н. В. и соавт., 1989).

Карбенициллин. Evans M. et al. (1986) продемонстрировали слабую вариабельность чувствительности Ps. aeruginosa к нему в 10 видах жидких сред, главным образом являющихся модифика­циями бульона Мюллера-Хинтона.

Бондаренок В. М. и соавт. (1983) в селективной среде для вы­деления кишечных иерсиний в качестве ингибитора сопутствую­щей микрофлоры использовали, в частности, карбенициллин.

По данным Садыкова М. Ш. и соавт. (1986) 59,4% штаммов цитробактеров, выделенных из фекалий людей и из внешней среды, чувствительны к этому антибиотику.

Thorn В. (1970), Davis Т., Matsen J. (1974), Bagley S., Seidler R. (1978) выделяли клебсиеллы из фекалий на селективной среде с основой из агара МакКонки со 100 мг/мл и менее карбеницилли-на, в связи с высокой резистентностью к нему данных микроор­ганизмов. Распознавание на этой среде клебсиелл было лучше, чем на агаре Эндо. Тем не менее, позже Tomas J. et al. (1986) заме­нили карбенициллин теллуритом калия. Показано некоторое преимущество последней среды и, кроме того, она пригодна к употреблению в течение 10 нед при 4°С. Однако интерес иссле­дователей к карбенициллину не остыл (Пахил С. И., 1992). Пого-релова Н. П. (1995) сконструировала простую высокочувстви­тельную и селективную среду для выделения Kl. pneumoniae, основанную на нитрат-сахарозной среде ИСК и включающую 10 мкг/мл карбенициллина.

Holm A. et al. (1987) сообщают о модификации агара из триптического перевара сои с рядом компонентов, в том числе и карбенициллином—среда Н для выделения Н. aphrophilus бактерий при различных заболеваниях полости рта. При этом

массивная контаминация посевов на средах снизился с 52 до 2%, а количество колоний Haemophilus даже увеличивалось. По сравнению с кровяным агаром рост Haemophilus на этой среде угнетался не более, чем в 10 раз, в то время как рост сопутству­ющей микрофлоры (6 шт. Capnocytophaga и Neisseria)—в 1000— 1000 000 раз.

Mitchison D. et al. (1972, 1973) усовершенствовали селектив­ную агаровую среду 7Н10 для микобактерий добавив комплекс антибиотиков, включающий и 100 мкг/мл карбенициллина (PACT). В дальнейшем McClatchy et al. (1976) уменьшили кон­центрацию последнего в этой среде до 50 мкг/мл. В связи с инги-бирующим действием на рост микобактерий, а также со слабым влиянием на рост псевдомонад среды PACT, разработана смесь PANTA, где карбенициллин заменен другими антибиотиками. Продемонстрированы существенные преимущества PANTA по сравнению с PACT (Tice L., Roberts G., 1986; Siddigi S., Hwang-bo C, 1986; Libonati J. et al., 1986), в частности снижение количе­ства проростов до 2% при той же длительности выявления мико­бактерий.

Полимиксины В и М подавляют грамотрицательную микро­флору. Учитывая малую чувствительность возбудителя мелиои-доза к полимиксину Ширяев Д. Т. и соавт. (1976) рекомендуют добавлять его в среды для исследования проб.

Полимиксин В вместе с бацитрапином входят в состав среды OFPBL для выделения Ps. cepacia (Welch D. et al., 1987).

Жога Л. К. и соавт. (1995) в транспортной среде для патоген­ных псевдомонад в качестве ингибиторов сопутствующей мик­рофлоры использовали, в том числе, 0.0025 г/л полимиксина. Возбудитель сапа относительно устойчив к полимиксину (MIC 1000 мкг/мл), который применяется в соответствующих средах для подавления посторонней микрофлоры. Тем не менее, при прямом посеве он задерживает рост и Ps. mallei.

По данным Cumrnings M. et al. (1987) добавление полимикси­на В в комплексе с другими антибиотиками повышало эффек­тивность выделения М. hominis на среде SP-4.

Этот антибиотик входит в состав полужидкой твин-альбуми-новой среды EMJH для выделения лептоспир из клинического материала, контаминированного посторонней микрофлорой (AdlerB. etal., 1986).

В различных сочетаниях с другими антибиотиками он содер­жится в среде для гонококков Thayer J., Martin J. (1964) и ее мо­дификации (Кунцевич Л. Д. и соавт., 1975; Alessi E. et al, 1982 и др.). Недостатком указанных сред является чувствительность части гонококков к данным антибиотикам, вследствие чего оп­ределенный процент заболеваний гонорейной инфекцией не подтверждается бактериологически. Ухудшает культуральную диагностику гонореи также нестабильное подавление перечис­ленными средами сплошного роста сопутствующей микрофлоры

 

в связи с повышением антибиотикорезистентности нормально вегетирующей на слизистых микрофлоры вследствие широкого, не всегда контролируемого применения антибиотиков и форми­рования перекрестных антибиотикоустойчивых штаммов бакте­рий. Известное множество других сред с селективными добавка­ми (Berger U., 1966; Granato P. et al., 1980; Mirret S. et al., 1981 и др.) в какой-то степени отражает необходимость создания улуч­шенной селективной среды для изоляции и роста гонококков. Полимиксин входит также в состав сред для выделения гонокок­ков Овчинникова Н. М., Яцухи М. В. (1970), Гаджиевой Г. Р. и со-авт. (1989), Evans G. et al. (1989).

Полимиксин содержат высокоселективная среда Farrell I., Robinson L. (1972) для бруцелл, среда Wadowsky R., Yee R. (1981) для изоляции L. pneumophila, элективная среда для культивиро­вания листерий (Метод, рекомендации..., 1987).

Предварительный посев используемого материала в солевой бульон с полимиксином В позволяет повысить специфичность TCSB-arapa, широко используемого для выделения вибрионов. В связи с неадекватностью имеющихся сред для выделения пато­генных вибрионов, Massad G., Oliver J. (1987) разработали высо­коизбирательный в отношении V. cholerae и V. vulnificus CPC-агар, также содержащий полимиксин В.

Полимиксины М и В входят в комбинацию антибиоти­ков по Skirrow М. (1977), а также в состав среды ПСТК (Голи­ков А. В., Зенин И. В., 1980), используемых для выделения кампилобактерий. Schulze F. et al. (1987) выделяли и дифферен­цировали кампилобактерии на агаре Мюллера-Хинтона с ком­плексом антибиотиков, включающим 5000 МЕ/л полимикси­на В. Колтс К. К. и соавт. (1990) при выделении С. pylori из биоптатов слизистой желудка добавляли в среду 40 000 ЕД/л полимиксина М. Cellini L. et al. (1992) предложили для выра­щивания и определения уреазной активности у С. pylori моди­фикацию агара Колумбия, где селективность достигалась доба­влением антибиотиков, в том числе полимиксина В. Campy­lobacter-селективный комплекс фирмы «Oxoid», добавляемый в среды для выделения С. jejuni, содержит 5 антибиотиков, в том числе 92 500 МЕ/л полимиксина В. Для выделения кам­пилобактерий Chan Е, Mackenzie А. (1986), Gericke В., Reiss-rodt R. (1986), Riedel B. et al. (1987), Сотирова П., Александро­ва Ст. (1989) использовали среды с селективными добавками, включающими полимиксин.

Полимиксин входит в состав желчно-цитратной и щелочно-полимиксиновой сред для количественного учета энтерококков (Рекомендации..., 1972) и молочной среды для идентификации энтерококков (Калина Г. П., 1973).

При выделении В. cereus рекомендуется посев осуществлять в солевом полимиксиновом агаре Пивоварова Ю. П. (1970) и среде ЖАМПФ (желточный агар с маннитом, полимиксином и феноло-

вым красным). В сравнении с традиционной средой Mossel (MYP) для изоляции, идентификации и предварительного подсчета В. cereus и соответствующих видов В. thuringiensis, альтернативная селективно/индикаторная культуральная среда VRM (Devascon-cellos E, Rabinovitch L., 1995) не требует наличия антибиотиков, таких как полимиксин В. При этом В. megaterium в ней ингибиру-ется.

Полимиксин содержат модифицированный агар Яро-щук В. А. и соавт. (1985)—для выделения, и среды Ставрополь­ского НИИВС—для обнаружения и лабораторной диагностики сибиреязвенного микроба (Метод, указания..., 1986). Высокой чувствительностью, по данным Тартаковского И. С. и соавт. (1983), Airlie W. (1987), обладает буферный угольно-дрожжевой агар с полимиксином. Входит этот антибиотик и в состав полу­жидкой среды Погореловой Н. П. (1984).

Дрожжеподобные и грибы рода Candida рекомендуется выде­лять на среде Сабуро с 200 мг/мл полимиксина (Грачева Н. М. и соавт., 1986).

Mitchison D. et al. (1972, 1973) усовершенствовали селектив­ную для микобактерий агаровую среду 7Н10 добавив в нее 4 ан­тибактериальных агента, в том числе 200 ЕД/мл полимиксина В. Он представлен в составе антимикробных смесей Mitchison (PACT) и PANTA, применяемых в средах для выявления микоба­ктерий. Последняя используется в комбинации со средами Bactec 12Аи7Н12.

Thomas С. et al. (1989) показали ингибирование роста М. avi-um-intracellulare, M. xenopi, M. kansasi и М. fortuitum на различ­ных нерадиоактивных жидких средах (Bactec 6A, сердечно-моз­говой бульон, среда Дюбо и некоторые модификации среды Кирхнера) при добавлении антибиотиков пиперапиллина, ам-фотерицина В, полимиксина В.

Для выделения CI. perfringens и его количественного опреде­ления рекомендуется применение среды СПН (сульфит-поли-миксин-неомициновая среда) (Метод, письмо..., 1971).

Изящный вариант методики подсчета спор мезофильных ви­дов клостридий в сухих продуктах предлагают Weenk G. et al. (1995), использовавшие сочетание дифференциального клостри-диального (DCA) и маннитол-яичный желток-полимиксин-бромкрезоловый фиолетовый-агаров.

Eisgruber H., Reuter G. (1995) отмечают селективность, суль-фитредуцирующую способность и ростовые свойства для клост­ридий сульфит-полимиксин-сульфадиазинового (SPS) и олеан-домицин-полимиксин-сульфадиазин-перфрингенс-селективно-го (OPSP) агаров.

Элективная среда Дзюбак А. П. (1993) для выделения пато­генных стрептококков содержит 500—1000 ЕД/мл полимиксина.

Van Enk R., Thompson К. (1992) предложили для выделения метициллинустойчивых St. aureus модифицированную селектив-

 

но-дифференциальную плотную среду с 10 мг/л полимиксина В. На ней росли также метициллинустойчивые St. xylosus (диффе­ренцируют пробой на коагулазу), а также Candida tropicalis и Pro­teus mirabilis (не ферментируют, в отличие от St. aureus, маннит). Для выделения стафилококков из пищевых продуктов использу­ется и теллурит-полимиксин-желточный агар (Varadaraj M., Ran-ganathanB., 1985).

Стрептомицин. Учитывая малую чувствительность возбу­дителя мелиоидоза к стрептомицину Ширяев Д. Т. и соавт. (1976) рекомендуют при исследовании проб добавлять в среду 50 мкг/мл его. Такие количества, подавляя рост большинства видов посторонней микрофлоры не угнетали рост музейных штаммов возбудителя мелиоидоза.

В известную среду ADM для дифференциации Aspergillus позднее был введен стрептомицин (Hocking A., Pitt J., 1986). Shipton W, Zahari P. (1987) для выделения возбудителя базидио-боломикоза из патологического материала предварительно обра­батывали его раствором пенициллина (20 МЕ/мл) и стрептоми­цина (40 мкг/мл).

В зависимости от антибиотикограммы штаммов, стрептоми­цин может входить в состав селективных сред для выделения ши-гелл (Черномордик А. Б., 1957).

Klink E., Smulder E (1990) выделили из печени, почек и мышц откормленных телят серотип Sal. dublin чувствительный, в част­ности, к стрептомицину.

Тщательно исследовали чувствительность М. bovis БЦЖ к стрептомицину Rousseaum P., Dupuis M. (1990).

Амфотерицин В. Cummings M. et al. (1987) отмечают эффек­тивность добавления комбинации антибиотиков, включающей амфотерицин, в среды для выделения М. hominis.

Этот антибиотик присутствует в среде Evans G. et al. (1989) для изоляции и роста гонококков.

Амфотерицин В входит в комплекс антибиотиков, использу­емых в плотных селективных средах для выделения кампилобак терий из фекалий (Chan E, Mackenzie А., 1986; Султанов Г. В. и соавт., 1987; Riedel В. et al., 1987; Dent J., McNalty С, 1988), сре­дах для выращивания и определения уреазной активности С. py­lori (Cellini L. et al., 1992) и индикаторных средах (Queiroz D. et al., 1987 и др.). Bolton E et al. (1988) на основании сравнительных исследований эффективности различных сред для выделения из фекалий кампилобактерий рекомендуют модифицированный агар ССД с амфотерицином. Во многие среды для выделения С. jejuni добавляется Campylobacter-селективный комплекс ан­тибиотиков фирмы «Oxoid», включающий 2 мг/л амфотерици-наВ.

Гаджиева Е Р. и соавт. (1989) предлагают оригинальную среду для выделения U. urealyticum, включающую в свой состав и ам­фотерицин.

Mitchison D. et al. (1972, 1973) усовершенствовали селектив­ную для микобактерий агаровую среду 7Н10 добавив в нее среди других антибиотиков и 10 мкг/мл амфотерицина В.

По данным Thomas С. et al. (1989) добавление в различные нерадиоактивные жидкие среды амфотерицина В ингибировало рост М. avium-intracellulare, M. xenopi, M. kansasi и М. fortuitum. Этот антибиотик входит в состав сред PACT и PANTA для выяв­ления микобактерий (Tice L., Roberts G., 1986; Siddigi S., Hwang-bo C, 1986; Libonati J. et al., '986).

Левомицетин. При выборе антибиотиков в средах для вы­деления шигелл учитывают антибиотикограммы выделяе­мых в данной местности штаммов (например к левомицети-ну у нас в стране). Рекомендуется добавлять левомицетин в наиболее часто употребляемые в лабораториях среды Плоски-рева и Левина, т. к. в последние годы среди шигелл доминиру­ют варианты устойчивые к ним (Черномордик А. Б. и соавт., 1976).

К левомицетину чувствительны 59,4% штаммов цитробакте-ров, выделенных из фекалий людей и из внешней среды (Сады-кова М. Ш. и соавт., 1986).

При выявлении патогенных микроорганизмов иммунофлуо-ресцентным анализом рекомендуется подращивание исследуе­мых материалов на простых или элективных средах, в качестве которых можно применять МПБ с левомицетином (Наставле­ния..., 1969).

Новобиоцин. При выборе антибиотика в средах для выде­ления шигелл учитывают их антибиотикограммы (новобио­цин, ампициллин и др.—за рубежом, например в среде Мак-Конки).

В качестве селективных агентов в средах для выделения Ps. aeruginosa используют новобиоцин в сочетании с пеницилли­ном (Sands D., Rovira А., 1970). Azad H, Cooksey D. (1995) разра­ботали для изоляции Ps. savastanoi высокоселективный агар ОКА, обладающий хорошими ростовыми свойствами и содержа­щий из антибиотиков также новобиоцин.

Mattar S. (1994) оценивали эффективность выделения раз­личных энтеробактерий (Е. coli, Salmonella sp., Shigella sp.) на ря­де сред, в том числе на бриллиантовом зеленом-глицерин-ново-биоцин-лактозном агаре. Salmonella sp. обнаруживались в 77,2% на этой среде, которая является селективной для Shigella sp. (100%).

Для лабораторной диагностики вибриоза Центральной ве­теринарной лабораторией рекомендована (1979) сафранино-железо-новобиоциновая (СЖН) среда Голикова А. В. и соавт. (1969).

Используя среду NNS, содержащую новобиоцин, нитрат на­трия и сахарозу, Tondella M. et al. (1989) дифференцировали уро­логические штаммы St. saprophyticus от других видов коагулазоо-

 

трицательных стафилококков. Чувствительность метода—95,5%, специфичность—100%.

Watts J. et al. (1991) показали возможность использования по­сева в бульон с арабинозой и целлобиозой при скрининге штам­мов коагулазоотрицательных стафилококков, устойчивых к но-вобиоцину.

По данным Yabu К. (1991) при добавлении к 6-часовой куль­туре St. aureus новобиоцина в концентрациях, подавляющих ми­кробный рост, вместо крупных везикулярных телец образова­лись малые тельца без везикул. Выживаемость культур снижа­лась. Одной из сред для выделения и идентификации стафилококков, представленных в методических рекомендаци­ях Вальвачева Н. И. и соавт. (1984) является среда для определе­ния устойчивости к новобиоцину.

Ампициллин. Жога Л. К. и соавт. (1995) сконструировали транспортную среду для патогенных псевдомонад в состав кото­рой входили в качестве ингибиторов антибиотики и красители ампициллин—0,01г/л; полимиксин—0,0025 г/л; генциановый фиолетовый—0,0025 г/л. Ингибиторы роста сопутствующей ми­крофлоры не влияли на возбудителей сапа и мелиоидоза, устой­чивых к ампициллину (MIC 250—500 мкг/мл), полимиксину (1000 мкг/мл) и генциановому фиолетовому.

При выборе селективных агентов при выделении шигелл учитывают антибиотикограммы местных штаммов (новобиоцин, ампициллин и др.—за рубежом, например в среде МакКонки). По данным Jorgensen J. et al. (1987) MIC ампициллина на среде HTM несколько выше, чем на других.

Lambert Т. et al. (1986) установили высокую ингибирующую способность С. pylori к ампициллину.

Агар ОКА для изоляции Ps. savastanoi (Azad H., Cooksey D., 1995) содержит, помимо других антибиотиков, также 0,015 г/л ампициллина.

Для выделения Aeromonas рекомендуется агар с бараньей кровью (эритроцитами), дополненный ампициллином (Mish-ra S. et al., 1987). Для того, чтобы не пропустить ампициллин-чувствительные штаммы Aeromonas и негемолитические А. са-viae, авторы рекомендуют использовать комбинацию среды с ампициллином и среды, содержащей ДНК-аза-толуидин голу-бой-ампициллин 10 мг/л. Abeyta С. et al. (1986) получены высо­кие результаты по выявлению A. hydrophila из образцов окру­жающей среды с использованием триптического соевого буль­она с ампициллином (TSBA). Во все среды предложенные Jeppesen С. (1995) для количественной оценки Aeromonas spp. из образцов продовольствия входит ампициллин и наилучшей из них является крахмал-ампициллиный агар (starch ampicillin agar—SAA), хотя можно использовать и другие: ампициллин-желчные соли-инозитол-ксилозный агар (ampicillin bile salts in­ositol xylose-MIX agar), ампициллин-декстриновый агар (ampi-

cillin dextrin agar—ADA), крахмал-глутамат-ампициллин-пени-циллин С-глюкозный агар (starch glutamate ampicillin penicillin C-glucose agar—SGAP-ЮС) в дополнении к SAA.

Kelly M. et al. (1988) провели комплексное двухэтапное ис­следование по оценке 4 сред (агар МакКонки, содержащий 100 мкг/мл ампициллина и 1% твина-80; кровяной агар без и с 20 мкг/мл ампициллина—КАА; CIN-arap; а также комбинация КАА и CIN-агаров) для выделения шт. Aeromonas из фекалий, определения значения чувствительности к ампициллину в вы­боре культуральных сред и роли (3-гемолизина в скрининге кровяных сред для Aeromonas. Комбинация КАА и CIN-arapa позволяла добиться 100%-ого выделения Aeromonas. Все штам­мы, выявленные на кровяном агаре, были также выделены на КАА; 89% штаммов, выделенных на этой среде, обладали спо­собностью к р-гемолизу. Отмечается, что КАА—наилучшая среда для выделения Aeromonas из фекалий, но оптимальным является использование более чем одной среды.

Klink Е., Smulder F. (1990) выделили штаммы Sal. dublin устойчивые к хлорамфениколу и тетрациклину, но чувстви­тельные к ампициллину, канамицину, неомицину и стрептоми­цину.

Бурдь В. Н. и соавт. (1994) селекционировали трансформанты Е. coli на плотных средах с 100 мкг/мл ампициллина, 40 мкг/мл 5 бром-4-хлор-З индолил-(3-0-галактопиранозида и 0,2 мМ изо-пропил-Р-О-тиогалактопиранозида.

Alsima M. et al. (1994) предлагают осуществлять предположи­тельную идентификацию V. anguillaram на дифференциальной среде VAM (наличие желчных солей, ампициллина, высокий рН и большая концентрация хлорида натрия).

Chang Т. (1995) разработал селективную среду для изоляции Phellinus noxius, содержащую 20 г/л солодового экстракта, 20 г/л агара, 10 мг/л беномила, 10 мг/л дихлорана, 100 мг/л ампицилли­на и 500 мг/л галловой кислоты. Для изоляции P. noxius из почвы добавляли 1000 мг/л тертигола NP-7 с целью ограничения от­дельных колоний. Сравнение этой среды с другими используе­мыми для изоляции гименомицетов показало большую эффек­тивность ее для изоляции P. noxius.

Тетракциклин. При разработке сред с антибиотиками для вы­деления шигелл необходимо учитывать антибиотикограммы ме­стных штаммов (тетрациклин, стрептомицин, левомицетин—у нас в стране).

Lambert Т. et al. (1986) установили наибольшую ингибирую­щую активность для С. pylori у 7 антимикробных препаратов из 20, в том числе у тетрациклина, при посеве материала из слизи­стой оболочки желудка на шоколадный агар или среду для выде­ления бруцелл с 10% крови барана.

Woodford N., Ison С. (1988) определяли на агарах для диаг­ностического теста чувствительности с 5% лизированной кро-

 

ви лошади с 1% изовиталекса (IsoVitaleX): (рассматривался как стандарт) и без него; GC и Proteose № 3 с 1 % гемоглобина чув­ствительность различных штаммов N. gonorrhoeae к пеницил­лину, цефуроксиму тетрациклину и эритромицину. Различий у двух первых агаров не обнаружено. На агаре Proteose по срав­нению со стандартом MIC ко всем антибиотикам, кроме эрит­ромицина, была снижена. На агаре GC гонококки были менее чувствительны к эритромицину и более чувствительны к тетра­циклину по сравнению со стандартным агаром. Однако влия­ния агара GC на чувствительность к р-лактамным соединени­ям не обнаружено, хотя MIC были несколько выше, чем на стандартной среде.

Dillon J. et al. (1987) показали отсутствие влияния добав­ления гемоглобина к средам на величину MIC пенициллина, спектиномицина и эритромицина, тогда как MIC тетрацик­лина на среде с гемоглобином была на два и более разведения выше.

Vidic В. et al. (1993) исследовали чувствительность Bord. bron-chiseptica к различным антибиотикам и терапевтическим аген­там, в том числе к тетрациклину при культивировании на следу­ющих агарах: кровяной; МакКонки, содержащий 1% декстрозы; Эндо; триптон-соевый, пептонный, Bordet-Gengou, древесно-угольный и FC. Последний содержал 10 г/л пептона; 10 г/л лак­тозы; 10 г/л глюкозы; 3 г/л мясного экстракта; 1,5 г/л желч­ных солей; 5 г/л NaCl и 6,6 мл/л 0,2%-ого фенолового красного, рН-7,4.

Klink E., Smulder F. (1990) выявили намного большую эффек­тивность среды Раппапорта-Вассилиадиса в сравнении со средой Мюллера-Кауффмана при выделении'Sal. dublin из печени, по­чек и мышц откормленных телят. Все выделенные штаммы были устойчивы к хлорамфениколу и тетрациклину.

Стимулирующим эффектом на синтез термолабильного эн-теротоксина Е. coli обладают сублетальные дозы линкомицина и тетрациклина (Yoh M. et al., 1983). По этой причине Мартынен-ко Л. Д. и соавт. (1994) при глубинном культивировании этого микроорганизма в МПБ дополнительно вводили, кроме прочих компонентов, 15 мг тетрациклина и 90 мкг/мл линкомицина для усиления синтеза энтеротоксина (Степанова М. В. и соавт, 1985).

По данным Садыкова М. Ш. и соавт. (1986) 59,4% штаммов цитробактеров чувствительны и к тетрациклину.

Мультиустойчивость к антибиотикам у видов рода Vibrio встречается редко, однако, уже выделены штаммы устойчивые к тетрациклину (Khemiri F. et al., 1991).

Friis N., Szancer J. (1994) показали значительное интибирова-ние рядом сильнодействующих антимикробных агентов, в том числе тетрациклином, М. hyosynoviae, M. hyopneumoniae, M. dis-

par и М. bovis при использовании тестирующей жидкой среды и дискового анализа.

Lenovich L. et al. (1984) сравнили 4 среды для подсчета дрож­жей и плесневых грибов в инфицированных сухих продуктах. На среде PDA с хлортетрациклином и хлорамфениколом (CCPDA) отмечались разрастание колоний большинства выделяемых плесневых грибов и сильно спорулирующий воздушный мице­лий Mucorales. На среде CCPDA, содержащей 2,5 мкг/мл дихло-рана, имело место разрастание колоний Aspergillus flavus, Al-ternaria и Paecilomyces.

Hastings J. et al. (1986) определяя количество плесневых гри­бов в пище на общей среде TPDA (PDA «Difco» и 40 мг/мл тетра­циклина) и селективной среде DRBC, сделали вывод, что при сходных результатах на TPDA легче распознать род по типу коло­ний. Однако недостатком этой среды является чрезмерный рост грибов Mucor и рекомендуется использовать ее при высокой контаминации образцов Rhizopus и Mucor.

Deak Т. et al. (19866) представили результаты сравнительно­го исследования двух референс-сред DG18 и DRBC, изготов­ленных фирмой «Oxoid», с 3 средами, приготовленными в на­учно-исследовательских лабораториях для рутинной работы. Все 3 среды имели одинаковую основу—глюкозо-дрожжевой агар. Но к среде OGY добавляли окситетрациклин, к среде CGY—хлорамфеникол, а среда AGY (подкисленный глюкозо-дрожжевой агар) имела тот же состав, что и OGY, но без окси-тетрацилина. За исключением двух случаев не отмечались зна­чительные различия в исследованных средах. При количест­венном определении плесневых грибов в непросеянной муке наибольшее количество их получено на CGY, тогда как с пше­ничной мукой результат был хуже на AGY, чем на любой другой среде. При количественном определении дрожжей не выявле­но различий в качестве сред.

Dijkmann К. (1986) изучал достоинства и недостатки сред DG18, DRBC производства «Oxoid», OGY и OGGY (OGY с гентамицином) для количественного определения дрожжевых и плесневых грибов при исследованшг сырого мяса. В каче