►Определение антигенов:
Для обнаружения антигенов применяется модификация метода ИФА, которая представлена на рисунках 1-4. На поверхности планшета (твердой фазе) сорбируются антитела к искомому агенту. Образующаяся в ходе анализа цепочка выглядит так: сорбированные антитела – антиген - известные антитела к искомому антигену, меченные ферментом (конъюгат). То есть, если в исследуемом образце присутствует искомый антиген, то образуется иммунный комплекс. В ячейке присутствует фермент, который способен расщеплять вносимый туда хромоген с образованием окрашенного продукта. Это возможно только при наличии полной цепочки. Если в исследуемом образце искомый антиген отсутствует, то цепочка не образуется, и окрашивания не происходит.
| Рис.1. Специфические антитела (2) сорбированы на поверхности лунок (1) планшета. |
| Рис.2. В лунку добавляется исследуемый материал, и, если в нем есть антигены (3) соответствующие данным антителам (2), то во время инкубации происходит взаимоузнавание, в результате которого образуется комплекс антиген/антитело (2/3). |
| Рис.3. После отмывки лунок в них добавляют специфические для искомого антигена антитела (4), меченые ферментом (конъюгат). Во время инкубации конъюгат фиксируется на связавшихся с фиксированными антителами антигенах. |
| Рис.4. После отмывки не связавшегося конъюгата в лунку добавляется бесцветный субстрат (5), на который действует фермент (Е), в результате чего субстрат превращается в окрашенный продукт (6). |
►Определение антител:
| На рисунке схематично показана лунка полистиролового планшета, в которой последовательно выполняются все стадии иммуноферментного анализа. Рис.1.Специфические антигены (2) сорбированы на поверхностилунок (1) планшета. |
| Рис.2. В лунку добавляется исследуемая сыворотка, и, если в ней есть антитела (3) к данным антигенам (2), то во время инкубации происходит взаимоузнавание, в результате которого образуется комплекс антиген/антитело (2/3). |
| Рис.3.После отмывки лунок от не связавшихся субстанций в них добавляют специфические антиглобулиновые антитела (т. е. антитела против человеческих иммуноглобулинов) (4). К этим антителам химически пришит активный фермент (Е). Такое комплексное соединение называется конъюгат. Во время инкубации конъюгат фиксируется на связавшихся с антигеном человеческих антителах, в результате чего в лунке образуется структура типа "сэндвич" (2\3\4). |
| Рис.4. После отмывки не связавшегося конъюгата в лунку добавляется бесцветный субстрат (5), на который действует фермент (Е), в результате чего субстрат превращается в окрашенный продукт (6). |
| Рис.5.Количество окрашенного продукта измеряется на фотометре при определенной длине волны. В качестве контроля используют образцы заведомо положительные и заведомо отрицательные. |
| Интенсивность цветной реакции на третьей стадии точно коррелирует с наличием специфических антител в анализируемой сыворотке. |
