 |
Сопряженные реакции – используются в случаях, если нет возможности прямо определить количество продукта исследуемой реакции. В таких случаях в реагирующую смесь добавляется фермент (Е2) катализирующий превращение образующегося продукта в реакции, которую можно оценить количественно, одним из вышеперечисленных методов.
Если фермент Е2 присутствует в избытке, скорость образования C отражает скорость образования В.
Например, сопряженное исследование активности глюкокиназы (используется избыток глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы и НАДФ+)
Глюкоза + AТФ → глюкоза 6-Ф + AДФ: (катализируется глюкокиназой –Е1)
Глюкоза-6-Ф + НАДФ+ → 6-фосфоглюконолактон + НАДФН + H+ : (катализируется глюкоза-6Ф –дегидрогеназой – Е2):
Скорость образования НАДФH (измеряется по поглощению при 340 нм) пропорциональна активности глюкокиназы (см выше)
В настоящее время известны и используются 3 вида классификации ферментов:
1. Тривиальная (исторически сложившаяся) номенклатура: (пепсин, трипсин).
2. Рациональная предложена французским физиологом П. Дюкло в 1883 году (к корню названия субстрата прибавляется суффикс
- аза (липид - липаза, протеин - протеаза и т.д.).
3. Современная классификация рассмотрена и утверждена V Всемирным биохимическим конгрессом в г. Москве в 1961 г. В основу ее положен тип катализируемой реакции (всего 6 классов):
1) Оксидоредуктазы: катализируют окислительно-восстановительные реакции, лежащие в основе биологического окисления. Название дается по схеме: донор: «акцептор-оксидоредуктаза» ---> лактат: НАД-оксидоредуктаза.
Различают аэробные дегидрогеназы или оксидазы, катализирующие перенос протонов (е) непосредственно на кислород; анаэробные дегидрогеназы ускоряющие перенос протонов (е) на промежуточный S, но не на кислород; цитохромы - катализируют перенос только е. Сюда также относятся каталаза и пероксидаза.
2) Трансферазы: ферменты, катализирующие перенос (внутри- и межмолекулярный) различных групп атомов. Название дается по форме: «донор - транспортируемая группа - трансфераза ---> метил-, формилтрансферазы, аминотрансферазы.
Оба этих класса ферментов работают при участии коферментов, которые являются водорастворимыми витаминами: В6, В12, В1, В15.
3) Гидролазы: ферменты, катализирующие расщепление внутримолекулярных связей при участии молекулы воды.
Название: «субстрат-гидролаза». К ним относятся все ферменты ЖКТ; в частности: эстеразы - гидролиз сложных эфиров; гликозидазы - гидролиз гликозидных связей углеводов; пептидгидролазы - гидролиз пептидных связей.
4) Лиазы - ферменты, расщепляющие C-C, C-N, C-O связи не гидролитическим путем с образованием двойной связи. Название: «субстрат-лиаза». Они обеспечивают отщепление CO2, H2O, NH3. Декарбоксилазы.
5) Изомеразы: ферменты, катализирующие различные типы реакций изомеризации. Сюда относятся рацемазы и эпимеразы.
6) Лигазы (синтетазы) - ферменты, катализирующие синтез органических веществ из 2-х исходных молекул с использованием энергии АТФ. Название: «X-Y-лигаза». X и Y - исходные вещества. Например: глутомат-аммиак-лигаза.
Кроме всего этого все существующие ферменты (более 2000) имеют свой цифровой шифр, который присваивается по 4-х значному коду. Т. о. шифр каждого фермента состоит из 4-х цифр, разделенных точками и составляется по следующему принципу.
Первая цифра указывает на номер одногоиз классов ферментов.
Вторая цифра озночает подкласс, который характеризует тип связи, на которую действует фермент.
Третья цифра означает подподкласс, который характеризует химическую природу донора или акцептора, участвующего в реакции.
Четвертая цифра обозначает порядковый номер фермента.
Алкогольдегидрогеназа (АДГ); КФ: 1. 1. 1. 1.
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ); КФ: 1. 1. 1. 27.
