Серодиагностика
Исследуемый материал: сыворотка больного - АТ
Диагностический препарат: диагностикумы (взвесь убитых м\о в физ. растворе) – АГ
Серотипирование
Исследуемый материал: возбудитель - АГ
Диагностический препарат: диагностическая иммунная сыворотка - АТ
+ реакция: выпадение осадка, просветление осадка
- реакция: помутнение
Применение: реакция Видаля — при брюшном тифе и паратифах, р. Вейгеля — при эпидемическом сыпном тифе, р. Райта — при бруцеллезе, сыпной тиф и др.; серотипирование возбудителя
2) Титрование агглютинирующей сыворотки
Тип реакции: р. Агглютинации
Исследуемый материал: сыворотка жив-го, гипериммунизированного бактериальной взвесью - АТ
Диагностический препарат: взвесь убитых бактерий для гипериммунизации - АГ
Принцип: к серийным разведениям агглютинирующей сыворотки добавляют равные количества взвеси убитых бактерий
+ реакция: обр-е хлопьев, просветление жидкости
- реакция: помутнение
Применение: определение титра агглютинирующей сыворотки
3) Реакция Грубера на стекле (ориентировочная)
Тип реакции: р. Агглютинации
Исследуемый материал: чистая культура – АГ
Диагностический препарат: адсорбированная и неадсорбированная сыворотка – АТ
Принцип: к капле сыворотки добавляют петлю чистой культуры м\о. При соответствии АГ х-культуры антителам в известной сыворотке образуются хлопья и жидкость просветляется.
+ реакция: образование хлопьев
Применение: ориентировочная РА, с целью определения антигенного состава х-культуры
4) Реакция преципитации
Исследуемый материал: сыворотка больного - АГ
Диагностический препарат: преципитирующая сыворотка – АТ
Типы: кольцепреципитация по Асколи, встречная иммунодиффузия, радиальная иммунодиффузия, встречный иммуноэлектрофорез
РП по Оухтерлони:
иссл. материал: метриал от больного – АГ
диагн. препарат: преципитирующая сыворотка - АТ
Принцип: в агаре вырезают лунки, в которые вносят ингредиенты реакции. При соответствии АГ и АТ в зоне эквивалентных соотношений образуется линия преципитата
+ реакция линия преципитата
РП по Асколи:
Исследуемый материал: материал от больного – АГ
Диагностический препарат: преципитирующая сыворотка – АТ
Принцип: в пробирку на преципитирующую сыворотку наслаивают экстракт из иссл. материала
+ реакция: появления мутного кольца
Применение: индикация сибиреязвенного АГ
5) РНГА
Серодиагностика
Исследуемый материал: сыворотка – АТ
Диагностический материал: эритроцитарный диагностикум – АГ
Принцип: к каждому разведению сыв-ки прибавляют равное кол-во эритроцитарного диагностикума
Серотипирование
Исследуемый материал: сыворотка – АГ
Диагн. препарат: антительный эритроцитарный диагностикум(иммунодиагностикум) – АТ
Принцип: к последовательным 2хкратным разведениям исследуемого мат-ла добавляют иммунодиагностикум.
+ реакция: зонтик
- реакция: пуговка
Наличие заболевания – превышение титра АТ в 4 раза (диагн. титр = 1\8)
6) РСК
Серодиагностика
Исследуемый материал: парные сыворотки от больного – АТ
Диагностический препарат: сыпнотифозный диагностикум для РСК – АГ
Комплемент – 9 фракций в неактивной форме
Эритроциты барана - АГ
Гемолитическая сыворотка – АТ
Серотипирование
Исследуемый материал: сыворотка от больно – АГ
Диагн. препарат: диагностическая сыворотка – АТ, комплемент – 9 фракций, эритроциты барана – АГ, гемолитическая сыворотка – АТ
+ реакция: задержка гемолиза
- реакция: гемолиз
Диагноз – нарастание титра АТ (дианг. титр = 1\8)
Р. Вассермана
Тип: РСК
Исследуемый материал: сыворотка больного
Диагностический препарат: кардиолипиновый АГ, ультраозвученный трепонемный АГ, комплемент, гемолитическая сыворотка, эритроциты барана
+ реакция: задержка гемолиза
- реакция: гемолиз
РСК с целью раздельного определения IgM и IgG
Тип: РСК
Исследуемый материал: сыворотка крови больного (нативная IgM, G и обработанная меркапэтанолом IgM)
Диагностический препарат: АГ для РСК, комплемент, эритроциты барана - АГ, гемолитическая сыворотка – АТ
Принцип: меркаптэтанол разрушает IgM.Если с обработанной сыв-кой реакция идет в том же титре, то она содержит больше IgG. Если в обработанной сыв-ке титр АТ снизился в 4 раза или более, то она содержит больше IgM
7) РИФ (реакция иммунофлюоресценции)
Серодиагностика (в непрямой 2хэтапной РИФ)
Исследуемый материал: сыворотка больного – АТ
Диагностический препарат: диагностикум из живых штаммов, сыворотка против Ig человека, меченная ФИТЦ
Серотипирование (экспресс-диагностика) в прямой РИФ
Исследуемый материал: материал, содержащий возбудителя – АГ
Диагностический препарат: люминисцирующая сыв-ка против искомого АГ, меченная ФИТЦ, кроличья сыв-ка(АТ), ослиная антикроличья сыв-ка(АТ), комплемент, люм. сыв-ка против комплемента(АТ)
Серотипирование (экспресс-диагностика) в непрямой РИФ
Исследуемый материал: материал, содержащий возбудителя – АГ
Диагностический препарат: люминисцирующая сыв-ка против искомого АГ, кроличья сыворотка(АТ), ослиная антикроличья сыв-ка(АТ), комплемент, люм. сыв-ка против комплемента(АТ)
Принцип: АТ, соединенные с ФИТЦ, фиксируются на соотв. АГ.Промывают, после этого в люминисцентном микроскопе виден искомый м\о или пораженная клетка, светящиеся на фоне.
8) ИФА(иммуно-ферментный анализ)
Серодиагностика
Исследуемый материал: сыворотка больного – АТ
Диагностический препарат: АГ в твердой фазе(вирусный лизат) – АГ, конъюгат – АГ сферментом, хромогенный субстрат
Принцип: АГ фиксируется на носителе. Вносят сывоторку, добавляют АТ против Ig человека, меченные ферментом (конъюгат) и хромогенный субстрат.
+ реакция: окрашивание содержимого пробирки
Серотипирование (экспресс-диагностика)
Исследуемый материал: сыворотка больного – АГ
Диагностический препарат: АТ в твердой фазе, АТ против искомого АГ с ферментом
Принцип: АТ к искомому АГ фиксируются на носителе, вносят иссл. материал, добавляют конъюгат и хромогенный субстрат.
+ реакция: окрашивание
9) Иммуноблоттинг для диагностики ВИЧ-инфекции
Принцип: разделенный с помощью электрофореза комплекс АГ наносят на полоску из нитроцеллюлозы. АГ фиксируюся в различных участках полоски. Далее исследования проводят по схеме ИФА
10) РИА (радио-иммунный анализ)
Принцип: отличается от ИФА тем, что диагностические сыв-ки метят радиоактивной меткой и результат учитывают при помощи счетчика радиоактивности.
11) Реакция нейтрализации токсина антитоксической сыв-кой
Исследуемый материал: фильтрат продукта – АГ (экзотоксин)
Диагностический препарат: антитоксические сыв-ки – АТ
Принцип: 2м мышам вводят материал экзотоксина, одной ещё и антитоксическую сыв-ку.
+ реакция: животное остается живым
- реакция: животное погибает, тк. сыв-ка не соотв. Экзотоксин
12) РТГА
Тип: р. Нейтрализации вируса
Серодиагностика
Исследуемый материал: парные сыворотки от больного
Диагностический препарат: вирусный диагностикум
Доп. ингредиенты: эритроциты
+пуговка
Серотипирование
Исследуемый материал: вируссодержащая жидкость
Диагностический препарат: противовирусные сыворотки – АТ к вирусам гриппа типа А и В.
Доп. ингредиенты: эритроциты курицы
Принцип: к серийным разведениям диагностических сывороток добавляют вирус в рабочей дозе.
+ реакция пуговка
13) Цветная проба Солка
Принцип: рост культуры клеток в пит. среде сопровождается накоплением кислых продуктов и изменением рН → изменение цвета среды. Если вирус присутствует, то изменения среды не происходит, тк клетки погибают.
14) Бактериоцинотипирование
Исследуемый материал: чистая культура
Диагностический материал: бактериоциногенный штамм
Принцип: на чашку с МПА уколом засевают эталонные бактериоциногенные штаммы. После инкубации в термостате, выросшие м\о убивают парами хлороформа. В чашку заливают растопленный полужидкий МПА с внесенной в него суспензией исследуемой культуры. Стерильные зоны появляются вокруг тех колоний, к бактериоцинам которых чувствительна иссл. культура.
15) Метод стандартных дисков
Принцип: на поверхность плотной питательной среды засевают «газоном» исследуемую культуру. Накладывают диски из фильтрованной бумаги, пропитанные АБ. После инкубации учитыают диаметр зон отсутсвия
16) Метод серийных разведений
Принцип: на чашки с МПА, содержащим возрастающие концентрации антибиотиков, с помощью штампа-репликатора проводят посев испытуемых культур. Результаты учитывают по наличию или отсутствию роста культуры на чашке с определенной концентрацией АБ.
МПК- минимальная подавляющая концентрация
17) Определение концентрации АБ в биосубстратах
Принцип: В пит. агаре, на котором газоном засеян эталонный чувствительный к данному АБ штамм, вырезают лунки. В них вносят исследуемые биосубстраты и определенные разведения АБ. После инкубации измеряют зоны задержки роста тест-штамма вокруг лунок и по калибровочной кривой определяют концентрацию АБ в биосубстрате.
18) Идентификация бактериофага по Отто
Принцип: на пит. среду засевается известная культура в виде стекающей капли, наносится фильтрат фаголизата. При + результате видна стерильная полоса
19) Метод Фюрта
Принцип: В агар вносят фильтрат фаголизата, на поверхность секторально засевают разные культуры. Где роста нет, там подействовал бактериофаг.
20) Титрование бактериофага по Аппельману
Принцип: в ряд пробирок с МПБ вносят индикаторную культуру и по 1 мл соотв. разведения фагосодержащего материала. После инкубации учитывают результат: + лизис культуры (просветление среды)
21) Метод агаровых слоев Грациа
Принцип: в пробирки с растопленным агаром вносят индикаторную культуру и по 1 мл соотв.разведения фагосодержащего материала, перемешивают и выливают на чашки с МПА. После инкубации подсчитывают число негативных колоний на чашках.
22) Фагодифференцировка
Исследуемый материал: чистая культура неизвестная
Диагностический препарат: индикаторный бактериофаг
Принцип: неизвестная культура засевается на МПА. Наносятся капли индикаторных бактериофагов. Происходит лизис соотв. Бактериофагом.
23) Фаготипирование
Исследуемый материал: известная чистая культура
Диагностический препарат: набор типовых бактериофагов
Принцип: исследуемую культуру засевают газоном на МПА Наносят по 1 капле типовых бактериофагов. Учет результатов производят после инкубации по наличию стерильных пятен.
24) ПЦР (полимеразная цепная реакция)
Принцип: иссл. материал подвергается специальной обработке, при которой происходит лизис клеток с выходом ДНК. Чась материала переносится в пробирку, содержащую смесь мононуклеотидов, ДНК-полимеразу и прймер.Циклическое изменение температуры позволяет осуществить репликацию определенного гена возбудителя – амплификация
