1. Приготовление мазков
Бактерии обнаруживаются в плотных гнойных частицах мокроты. Захватите петлей материал и распределите тонким слоем на 2/3 части предметного стекла. Можно стекло с кусочком мокроты покрыть другим предметным стеклом, придавить друг к другу и раздавить в противоположном направлении до образования тонкого мазка. Можно для приготовления мазка пользоваться деревянными палочками
2. Высушивание
Приготовленные мазки высушиваются на воздухе 15-30 мин
3. Фиксация
Медленно провести мазок в течение 3-5 мин 3 раза через верхнюю или среднюю наиболее яркую часть пламени спиртовки
4. Окрашивание
а) мазок накрыть фильтровальной бумагой и на всю поверхность бумаги нанести карболовый фуксин Циля
б) медленно нагревайте стекло с мазком над пламенем спиртовки до появления паров, не допуская кипения и высушивания. Оставить мазок с прогретым раствором на 5 мин
5. Обесцвечивание
а) снять фильтровальную бумагу и удалить окрашивающий раствор под слабой струей воды
б) обработать каждый мазок индивидуально 25% раствором серной кислоты в течение 3-х минут
в) смыть водой
г) обработать каждое стекло в течение 5 минут 96% спиртом
д) смыть водой
6. Дополнительная окраска
Обесцвеченные и промытые стекла с мазками обработать 0,3% раствором метиленовой синьки в течение 1 минуты
7. Промыть водой и высушить на воздухе
ОСНОВАНИЕ: МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ МЕЖДУНАРОДНОГО СОЮЗА БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ. ФРАНЦИЯ, ПАРИЖ, 1999г
МЕТОД ЦИЛЯ-НИЛЬСЕНА
(ИНСТРУКЦИЯ 1999ГОД)
1. 
На фиксированный препарат накладывают фильтровальную бумагу, на которую наносят карболовый фуксин Циля. Подогревают до отхождения паров, процедуру можно повторить. Выдерживают 5 мин
2. Н2О
3. 25% Н2SО4 - 3 мин
4. Н2О
5. Спирт 96% - 5 мин
6. Н2О
7. Метиленовый синий 0,3 % - 1 мин
8. Н2О
Рис. №4. Кислотоустойчивая микобактерия
МЕТОД ЦИЛЯ-НИЛЬСЕНА
1. На фиксированный препарат + фильтровальная бумага + фуксин Циля. Подогреваем до отхождения паров + краситель (2 раза)
2. Н2О
3. 5% Н2SО4 (погружая 2-3 раза)
4. Н2О
5. Метиленовый синий 1 % - 3-5 мин
6. Н2О
7. Микроскопия с иммерсией.
Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, остальные – в синий (рис. № 4,5).
Рис. № 5 Mycobacterium tuberculosis в мокроте
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №3
Выявление капсул по методу Бурри, Бурри-Гинса.
Студент должен иметь представления:
- негативные методы окраски.
Студент должен знать:
- методы микробиологических исследований,
- виды микроскопии, их особенности,
- строение, состав и функции капсулы,
- капсулообразование как фактор патогенности,
- примеры капсульных микробов,
- особенности фиксации и окраски по методу Бурри и Бурри-Гинса, красители и реактивы,
- цель применения и сущность метода.
Студент должен уметь:
- выявление капсул у бактерий методом Бурри – Гинса,
-микроскопия окрашенных препаратов с использованием иммерсионной системы,
- соблюдение мер безопасной работы с живыми культурами микробов,
- обработка рабочего места и рук дез. веществами.
Этапы самостоятельной аудиторной работы:
5. Подготовить препарат из культуры и окрасить его по методу Бурри-Гинса
6. Препараты, подготовленные и демонстрационные, промикроскопировать с иммерсией
7. Обработать рабочие места и руки
8. Зарисовать результаты микроскопирования и записать алгоритм метода в дневник
ОБНАРУЖЕНИЕ КАПСУЛ У БАКТЕРИЙ
Некоторые микробы обладают способностью откладывать на поверхности своего тела мощный слизистый слой вокруг клеточной стенки. Его называют капсулой. В состав капсул входят, главным образом, полисахариды (пневмококк), но у некоторых они содержат и полипептиды (палочка сибирской язвы). Капсулы имеют консистенцию геля, поэтому при микроскопии живых бактерий они видны очень плохо. Для обнаружения применяют негативную окраску. При этом краситель заполняет пространство вокруг бактерий, в результате чего они выглядят светлыми частицами на темном фоне.
Рис. №6. ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ КАПСУЛЫ
