Лабораторно-практические занятия. Изготовление и бактериоскопия мазков из патологического материала

Изготовление и бактериоскопия мазков из патологического материала.

Для подтверждения результатов клинического, аллергического, серологического и патоморфологического методов диагностики туберкулеза необходимо бактериологическое исследование. Его результаты особенно важны, когда при постановке первичного диагноза у убитых животных не обнаруживают изменений, свойственных туберкулезу, или они нечетко выражены. Микобактерии можно обнаружить в различном материале, полученном от животных, а также в пробах из объектов внешней среды. От убитых или павших животных в лабораторию направляют лимфоузлы, кусочки органов с подозрительными на туберкулез изменениями. От живых животных в случае необходимости берут пробы молока, мокроты, мочи, фекалий, спермы, истечений из влагалища. Пробы доставляют в лабораторию в свежем виде в стерильной посуде. Кусочки органов можно консервировать в 30%-ном стерильном глицериновом растворе.

При подозрении на туберкулез легких у крупного рогатого скота берут пробы мокроты, собирая ее в кювету или на марлевую салфетку во время искусственно вызванного кашля. При подозрении на туберкулез вымени берут для исследования 150-250 мл молока из всех четвертей вымени (из пораженной четверти — побольше). Учитывают, что первые порции молока непригодны для исследования. Их сдаивают в отдельную посуду. Мочу (200-500 мл) берут с помощью катетера или собирают при мочеиспускании. Фекалии (30-50 г) берут из прямой кишки; истечения из влагалища — с помощью стерильных ватных тампонов или влагалищной ложки.

Первый этап лабораторного исследования доставленного биоматериала — бактериоскопия мазков. Из каждого органа и лимфатического узла готовят по два мазка путем тщательного растирания материала между двумя стеклами. Мазки высушивают на воздухе и фиксируют над пламенем. Из мокроты, гноя, слизи выбирают буроватые или желтоватые комочки и раздавливают их между двумя предметными стеклами, размазывая материал. Для концентрации микобактерии мокроту можно подвергнуть обогащению. Биоматериал в специальной баночке гомогенизируют встряхиванием. Затем добавляют тройной объем 3-6%-ного раствора серной кислоты и вновь встряхивают баночку. После этого материал центрифугируют (10-15 мин при 2000 об/мин). Мазки делают из осадка.

Молоко центрифугируют при 3000 об/мин 30 мин. Мазки готовят из верхнего слоя и осадка молока. После высушивания мазки для удаления жира 20-30 мин обрабатывают хлороформом или спиртом-эфиром. Обнаружение микобактерии облегчается при использовании специального метода подготовки материала. Из молока после его центрифугирования удаляют средний слой, а верхний и нижний — смешивают. К 5 мл такой смеси добавляют 5 мл спирта-ректификата, 5 мл эфира и 10 мл 25%-ного раствора антиформина. Полученную смесь взбалтывают и выдерживают в термостате до приобретения гомогенности (однородности). После этого добавляют 25 мл физраствора и центрифугируют смесь при 3000 об/мин 30 мин. Мазки готовят из осадка, промытого физраствором.

Мочу многократно центрифугируют, каждый раз сливая верхний слой и добавляя новую порцию мочи. Затем к осадку добавляют 3-5 мл 3-6%-ного раствора серной кислоты. Смесь встряхивают 5-10 мин и центрифугируют 10 мин при 2000 об/мин. Мазки для бактериоскопии готовят из осадка.

Пробы фекалий растирают в ступке, добавляя 25%-ный раствор хлористого натрия, пока материал не станет жидким. Следующий этап — фильтрация через марлю. Затем к 5 мл фильтрата добавляют 2 мл эфира или бензина и центрифугируют смесь 20 мин при 3000 об/мин. Мазки готовят из осадка.

Во всех случаях мазки после фиксации окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют с иммерсионной системой. Микобактерии туберкулеза чаще всего имеют вид небольших тонких или слегка изогнутых палочек и выглядят красными на синем фоне. Для люминесцентной микроскопии мазки окрашивают смесью флуорохромов и просматривают под люминесцентным микроскопом при среднем увеличении. Микобактерии в мазках видны в виде светящихся золотисто-оранжевого цвета палочек. Положительные результаты бактериоскопии не дают полного основания для постановки диагноза на туберкулез у животных (кроме птиц) и должны быть подтверждены культуральным и биологическим методами исследования. Но у птиц, в органах которых выявлены типичные для туберкулеза изменения, при положительном результате бактериоскопии диагноз считают установленным. Бактериоскопия позволяет также оценить степень загрязненности биоматериала посторонней микрофлорой. Это учитывают при выборе метода обработки материала на последующих этапах бактериологического исследования.

Туберкулинизация животных разных видов. Для аллергической диагностики туберкулеза применяют очищенный туберкулин для млекопитающих, выпускаемый в жидком или сухом виде, и очищенный туберкулин для птиц, который выпускают только сухим. Перед применением сухой туберкулин растворяют, а жидкий — разводят в специальном растворителе, прилагаемом к каждому флакону с туберкулином. Для диагностики туберкулеза у рогатого скота и птиц при первичной постановке диагноза и для контроля за благополучием в хозяйствах, где реакции на туберкулин обусловлены сенсибилизацией животных (в том числе кур) атипичными микобактериями, применяют симультанную аллергическую пробу. Она заключается в одновременном введении двух аллергенов: очищенного туберкулина для млекопитающих (или птиц) и сухого очищенного комплексного аллергена из атипичных микобактерии (КАМ).

Туберкулинизации подвергают крупный. рогатый скот, яков, лошадей, буйволов, свиней, овец, коз, собак, кошек — с 2-месячного возраста; верблюдов — с 12 мес; маралов, оленей, пушных зверей и птиц — с 6 мес.

Коров (нетелей), буйволиц, ячих, верблюдиц исследуют независимо от периода беременности; коз, овец, свиноматок, кобылиц, ослиц, сук, самок пушных зверей — не ранее месяца после родов. Не разрешается исследовать животных в течение 3 нед после вакцинации или обработки против гельминтов.

Для внутрикожного введения туберкулина используют безыгольные инъекторы или шприцы вместимостью 1-2 мл с бегунком и иглами для внутрикожных инъекций (отдельная игла для каждого животного).Собакам, пушным зверям, кошкам и птицам туберкулин вводят только шприцем с иглой. Для нанесения туберкулина на конъюнктиву применяют глазные пипетки. Все эти инструменты используют только для туберкулинизации. До и после использования шприцы, иглы, пипетки стерилизуют кипячением в течение 10 мин в дистиллированной или кипяченой воде (без добавления дезсредств).

Однократная внутрикожная туберкулиновая проба. Ее применяют у крупного рогатого скота благополучных хозяйств, а также у свиней, верблюдов, оленей, маралов, буйволов, собак, кошек, пушных зверей (кроме норок), птиц (кроме фазанов).

Туберкулин вводят в дозе 0,2 мл крупному рогатому скоту (кроме быков-производителей), буйволам, зебувидным в области средней трети шеи; быкам-производителям в подхвостовую складку; верблюдам в кожу брюшной стенки в области паха на уровне горизонтальной линии от седалищного бугра; свиньям с наружной поверхности уха, отступя 2 см от его основания (2-3-месячным поросятам можно вводить аллерген безыгольным инъектором в кожу поясницы в 5-8 см от позвоночника); овцам и козам под кожу нижнего века; собакам и пушным зверям (кроме норок) в области внутренней поверхности бедра; норкам интрапальпебрально (в верхнее веко); кошкам в области внутренней поверхности уха; курам в кожу бородки; индейкам в подчелюстную сережку; гусям и уткам в подчелюстную складку.

Перед введением туберкулина волосы на месте инъекции выстригают (перья выщипывают), кожу обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом.

Учитывают и оценивают реакцию у крупного рогатого скота, буйволов, зебувидных, яков, верблюдов, маралов и пятнистых оленей через 72 ч; у коз, овец, свиней, собак, кошек, пушных зверей через 48 ч; у птиц через 30-36 ч.

У животных, инфицированных микобактериями, реакция на туберкулин выражается возникновением разлитой припухлости — тестоватой или мягкой и обычно не имеющей четких границ. Это сопровождается гиперемией и болезненностью кожи. Но в некоторых случаях образовавшаяся припухлость плотная, безболезненная, отчетливо контурированная.

При обнаружении указанных изменений у крупного рогатого скота (кроме быков-производителей), буйволов, зебувидных, яков, верблюдов, пятнистых оленей и маралов измеряют кутиметром толщину кожной складки и сравнивают ее с толщиной складки неизмененной кожи вблизи места введения туберкулина. Животных перечисленных видов считают реагирующими на туберкулин при утолщении кожной складки на 3 мм. Быков-производителей, овец, коз, свиней, собак, кошек, пушных зверей и птиц считают реагирующими при образовании припухлости в месте введения туберкулина.

Двукратная туберкулиновая проба. Применяют крупному рогатому скоту, буйволам, зебувидным, якам, верблюдам, маралам, пятнистым оленям в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах. В день учета реакции животным, не реагировавшим на первое введение аллергена в дозе
10 000 ME в 0,2 мл, вводят туберкулин повторно — в той же дозе и в то же место. Реакцию учитывают через 24 ч. Животных считают реагирующими при утолщении кожной складки на 5 мм и более.

Офтальмопроба. Применяют при исследовании лошадей и крупного рогатого скота. 3-5 капель туберкулина наносят на конъюнктиву глаза при оттянутом нижнем веке. Через 5-6 дней вводят туберкулин повторно. Реакцию учитывают через 3, 6, 9 и 12 ч после второго введения аллергена. Животных считают реагирующими при образовании слизисто-гнойного или гнойного секрета, накапливающегося в конъюнктивальном мешке или вытекающего в виде шнура из внутреннего угла глаза. Конъюнктива при этом гиперемирована и отечна.

Внутривенная туберкулиновая проба. Ее разрешается проводить только у взрослого крупного рогатого скота, за исключением коров (нетелей) за месяц до отела и месяц после него. Нельзя исследовать животных с температурой тела выше 39,5 °С. Туберкулин для млекопитающих в стандартном разведении вводят внутривенно в дозе 1 мл на 100 кг живой массы. Через 3, 6, 9 ч проводят термометрию. Реагирующими считают животных с повышением температуры тела на ГС и более максимальной нормальной, т.е. 40,5 °С и выше. На каждую туберкулинизацию составляют акт, в котором указывают время и место проведения работы (хозяйство, населенный пункт, отделение, ферма), виды исследованных животных и их количество по половозрастным и технологическим группам. Указывают метод исследования, характеристику использованного аллергена, обобщают результаты исследования и формулируют предложения в отношении дальнейших действий владельцев животных и ветеринарных специалистов. К акту прилагают опись реагировавших животных с указанием их инвентарных номеров или кличек, пола, возраста, величины утолщения кожной складки.

Составление плана оздоровительных мероприятий в хозяйствах, неблагополучных по туберкулезу. Конкретная основа разработки плана оздоровительных мероприятий — данные предварительного эпизоотологического обследования неблагополучного хозяйства (населенного пункта). Это обследование должно выявить пути заноса возбудителя туберкулеза, определить границы возникшего эпизоотического очага, оценить характер и степень угрозы для других животноводческих хозяйств и ферм. Не менее важны данные о характере течения эпизоотического процесса в обследуемом стаде, степени распространенности болезни, условиях, способствовавших перезаражению животных.

Учитывают, что одним из наиболее частых путей заноса возбудителя туберкулеза является ввод в благополучное стадо зараженного скота. Необходимо иметь в виду и возможность заноса возбудителя животными других видов: свиньями, собаками, кошками, птицей (курами). Нередко он заносится с кормами, особенно с молочной сывороткой и обратом, получаемыми с молокоперерабатывающих предприятий. Заражение животных может произойти при выпасе на инфицированных пастбищах, при контакте с больным скотом личных подворий местных жителей. Следует иметь в виду возможность повторных вспышек туберкулеза через 2-3 или даже 4 года после оздоровления стада за счет молодняка, полученного в период неблагополучия и оставленного в хозяйстве. Источниками возбудителя могут быть люди, больные туберкулезом. Очень опасно скармливать животным необезвреженные пищевые отходы из больниц, туберкулезных санаториев и диспансеров.

Цели планируемых оздоровительных мероприятий — быстрая локализация эпизоотического очага, выявление и изъятие животных — источников возбудителя, обеззараживание инфицированных объектов внешней среды, предупреждение новых случаев заражения животных. Характер мероприятий определяют с учетом положений действующих инструкций и особенностей природно-хозяйственных условий и эпизоотической обстановки, сложившейся в данном районе, в данном хозяйстве.

В плане перечисляют необходимые ограничительные и оздоровительные мероприятия, указывают срок их исполнения, определяют ответственных лиц и непосредственных исполнителей.

В целях быстрой локализации эпизоотического очага предусматривают категорический запрет вывода животных неблагополучной группы в другие стада, вывоз кормов, подозреваемых в инфицировании микобактериями туберкулеза. Планируют мероприятия по приведению в должный порядок всех санитарных объектов (ограждения фермы, санпропускник, дезбарьеры, родильное отделение, карантинное помещение, навозохранилище). Предусматривают немедленную организацию обеззараживания молока, получаемого от коров неблагополучного стада.

Комплекс мероприятий, направленных на выявление и устранение источников возбудителя болезни, должен включать проведение систематических исследований скота, немедленную изоляцию и последующую сдачу на убой всех выявляемых больных животных. Соответственно определяют порядок диагностических исследований скота, их масштабы, сроки туберкулинизации. Обязательно указывают, как поступить с реагирующими на туберкулин животными (место изоляции, сроки отправки на мясокомбинат).

Важное мероприятие, направленное на предупреждение дальнейшего перезаражения животных, — текущая дезинфекция. Ее проводят систематически и обязательно после каждого очередного обследования неблагополучного поголовья. В плане оздоровительных мероприятий определяют порядок проведения дезинфекции, которая должна включать не только обработку помещений и инвентаря, но и обеззараживание навоза, а также обуви и одежды обслуживающего персонала. Обязательно и обеззараживание территории, прилегающей к животноводческим помещениям. Также в целях профилактики новых случаев заражения животных определяют порядок использования пастбищ, исключая выпас на инфицированных участках.

Обязательно учитывают важность проблемы получения здорового молодняка. Предусматривают сдачу на убой всех телят, родившихся от больных коров. Заранее обеспечивают возможность изолированного выращивания молодняка, который будет получен после постановки стада на контрольное наблюдение.

Сдача больных животных не гарантирует благополучия оставшегося поголовья без проведения санитарного ремонта животноводческих помещений и других санитарных мер. Соответственно в плане оздоровительных мероприятий предусматривают вывод скота в летние лагеря и санитарный ремонт всех помещений фермы. Освободившиеся помещения очищают от навоза, снимают в стойлах старый деревянный настил, убирают 15-20 см грунта под полом и настилают новый пол. Очищают стены, инвентарь, оборудование. Весь скопившийся на ферме навоз вывозят в специально отведенное огражденное место и складируют в бурты. Очищают от мусора и навоза территорию фермы, выгульные площадки. Все эти виды работ отражают в плане. Предусматривают и проведение заключительной дезинфекции во всех помещениях на территории фермы с обязательной лабораторной проверкой качества дезинфекции.

* * *

Бруцеллез(Brucellosis) — хроническая инфекционная болезнь животных, опасная и для человека. Проявляется у самок абортами, задержанием последа, эндометритами, у самцов — орхитами, но преимущественно протекает без симптомов.

Распространенность. Болезнь регистрируют во многих странах мира. Неблагополучен и ряд регионов нашей страны.

Экономический ущерб, причиняемый этой болезнью неблагополучным хозяйствам, весьма значителен. Он обусловливается снижением сроков хозяйственного использования животных из-за вынужденного убоя в случаях заражения, снижением производства молока, недополучением приплода, большими затратами на оздоровительные мероприятия.

Возбудитель. Известны 6 видов бруцелл, подразделяемых на ряд биологических вариантов (биоваров). Вид В. melitensis — возбудитель болезни у овец, коз и наиболее опасный для человека — включает 3 биовара; В. abortus — возбудитель бруцеллеза крупного рогатого скота, яков, буйволов, верблюдов, лошадей — 7 биоваров. Вид В. suis — возбудитель болезни у свиней и оленей — включает 5 биоваров. Носителями 2-го биовара В. suis являются не только свиньи, но и зайцы, 4-го — олени, 5-го — мышевидные грызуны. В род бруцелл входят также В. ovis — возбудитель инфекционного эпидидимита баранов и не циркуллирую-щие на территории нашей страны В. canis, выделенная от собак, В. neotomae, выделенная от пустынной кустарниковой крысы в США. Определение видов и биоваров имеет значение при уточнении характера резервуара, источника возбудителя и путей распространения болезни.

Бруцеллы — очень мелкие полиморфные бактерии. Даже в одном препарате можно обнаружить кокковидные, овоидные, палочковидные формы этих микробов. Они неподвижны, хорошо красятся всеми анилиновыми красками, грамотрицательны. Хорошо растут на сывороточных средах, печеночных средах с добавлением глицерина и глюкозы, на среде Д из рыбного и дрожжевого гидролизата.

Бруцеллы термолабильны. В жидкой среде при 60 °C они погибают за 30 мин, при кипячении — моментально. Но низкие температуры фактически консервируют бруцелл. В замороженном мясе они остаются жизнеспособными более 5 мес, в сырах и масле — более 2, в почве, воде, навозе — до 4; в овечьей и козьей шерсти — до 3-4 мес. В охлажденном молоке бруцеллы сохраняются 6-8 дней. Устойчивость к дезсредствам невелика: 1%-ные растворы формальдегида, фенола убивают бруцелл за 30 мин.

Эпизоотологические данные. Восприимчивы к болезни сельскохозяйственные и домашние животные всех видов. Доказана и восприимчивость многих видов диких животных — прежде всего копытных. Основной хозяин В. abortus — крупный рогатый скот, В. melitensis — овцы и козы, В. suis — свиньи. Однако доказана возможность миграции В. melitensis от коз и овец к коровам и свиньям, В. suis — от свиней к козам и овцам. Главный резервуар возбудителя бруцеллеза — больные сельскохозяйственные животные; роль диких животных в распространении болезни невелика.

Источники возбудителей бруцеллеза — больные животные. Они особенно опасны при клинических проявлениях болезни. С маточными истечениями, околоплодными водами, плодными оболочками, абортированными плодами во внешнюю среду выделяется огромное количество бруцелл. Локализуясь в молочной железе, бруцеллы длительное время (до 3лет у овец, до 9 лет у коров) выделяются с молоком. Не исключается возможность выделения возбудителей болезни с мочой и калом. Больные самцы выделяют бруцелл главным образом со спермой.

Факторами передачи возбудителя могут стать молоко и обрат, полученные от больных животных, инфицированные растительные корма, подстилка, вода, контаминированная бруцеллами сперма при искусственном осеменении животных. Молодняк чаще всего заражается алиментарным путем, но не исключается и внутриутробное заражение. У взросдых животных также преобладает алиментарный путь заражения, но возможна и передача возбудителя при случке.

В благополучные стада болезнь чаще заносят вновь поступившие животные — невыявленные носители и выделители бруцелл. Особенно опасно приобретение молодняка из неблагополучных или недавно оздоровленных хозяйств. Нередко заражение животных происходит при контактах с неблагополучным поголовьем на пастбище или водопое, при использовании сена, соломы и других кормов, заготовленных в неблагополучных хозяйствах.

В недавно возникших (свежих) эпизоотических очагах в течение нескольких месяцев может заразиться до 50-60% поголовья животных. Особенно быстро болезнь распространяется в период стойлового содержания скота. В стаде возникают единичные, а затем массовые аборты. Перезаражению животных способствуют нарушения санитарного режима: несвоевременная уборка абортированных плодов и последов, нерегулярная дезинфекция помещений.

Патогенез. Проникшие в организм бруцеллы по лимфатическим путям попадают в регионарные лимфатические узлы, а затем в другие лимфоузлы и паренхиматозные органы. В развитии инфекционного процесса выделяют 3 фазы: регионарную инфекцию (первичная латенция), генерализацию, вторичную латенцию.

Фаза регионарной инфекции характеризуется адаптацией возбудителя к определенным тканям и его размножением в регионарных лимфатических узлах. Показатели серологических реакций еще отрицательны, но животные уже могут быть выделителями бруцелл.

Фаза генерализации процесса развивается при снижении резистентности животного, чаще — во второй половине беременности. Для нее характерны бактериемия и развитие явных клинических признаков болезни. У беременных животных бруцеллы проникают в слизистые оболочки матки, в плодные оболочки и плод, вызывая воспалительно-некротические изменения, часто приводящие к гибели плода и аборту. Воспалительно-некротические изменения могут развиться и в других органах и тканях, что проявляется возникновением маститов, бурситов, артритов, орхитов. В большинстве случаев становится высоким уровень специфических сывороточных антител.

В фазе вторичной латенции происходит клиническое выздоровление животного, но носительство возбудителя и опасность его выделения сохраняются. Хорошо выражены аллергические реакции, но антитела в крови зачастую уже не выявляются.

Клиническая картина. Инкубационный период при бруцеллезе продолжается 2-4 нед. У беременных животных всех видов основной симптом бруцеллеза — аборт. В некоторых случаях рождается слаборазвитый приплод. У коров, овец, коз аборты обычно возникают во второй половине беременности, у свиней — в разные сроки супоросности с нередкой мумификацией плодов. За 1-2 дня до аборта у самок набухает вымя, припухают срамные губы, из влагалища выделяется незначительное количество буровато-красной слизи. Абортам обычно сопутствуют задержание последа, развитие эндометрита. Нередко эндометрит сочетается с маститом, поражением яичников, сальпингитом, что обусловливает длительное бесплодие. Повторные аборты у крупного рогатого скота и овец бывают очень редко, но вполне возможны у свиней.

У некоторых животных инфекция может проявиться серозными бурситами, гигромами, артритами, тендовагинитами, а у самцов (очень редко) — орхитами и эпидидимитами. У свиней могут образоваться абсцессы в подкожной клетчатке, в мышцах скелета и даже в паренхиматозных органах. У лошадей аборты на почве бруцеллеза чрезвычайно редки, чаще воспалительно-некротические процессы развиваются в тканях области затылка и холки. У северных оленей, маралов характерным проявлением бруцеллеза, считают бурситы конечностей.

У многих зараженных животных бруцеллез протекает бессимптомно, латентно. Выявить таких животных, являющихся источниками возбудителей болезни, можно лишь с помощью серологического или аллергического исследования.

Патологоанатомические изменения. У абортировавших животных плодные оболочки утолщены, студенисто инфильтрированы, покрыты хлопьями фибрина и гноем, местами — с кровоизлияниями. У абортированных плодов устанавливают отечность подкожной клетчатки и пупочного канатика (серозно-геморрагическая инфильтрация). В брюшной и грудной полостях плода обнаруживают буровато-красную жидкость с хлопьями фибрина, в сычуге — белую или желтоватую слизистую массу. В некоторых случаях устанавливают изменения легких, свойственные серознокатаральной пневмонии, изменения кишечника, свойственные катарально-геморрагическому энтериту. В печени плода могут быть очажки некроза.

У абортировавших маток устанавливают гнойно-некротический эндометрит, иногда — интерстициальный мастит. У самцов обнаруживают гнойно-некротические очаги в семенниках и придатках.

Диагноз ставят на основании результатов бактериологических, серологических и аллергических исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни. На основе клинических проявлений болезни (аборты, чаще во второй половине беременности, задержания последа и т.д.) можно только заподозрить бруцеллез. При эпизоотологическом обследовании учитывают эпизоотическую обстановку в соседних хозяйствах, анализируют результаты исследований животных данного стада в прошлом, изучают хозяйственные связи и порядок комплектования стада, в том числе соблюдение правил профилактического карантинирования приобретенных животных. Анализируют причины недополучения приплода.

При наличии клинических проявлений болезни обязательно бактериологическое исследование соответствующего биоматериала. В лабораторию направляют абортированный плод с плодными оболочками (от свиноматок берут не менее 3 плодов) или желудок плода с содержимым, кусочки печени и селезенки. Одновременно направляют на исследование кровь абортировавшего животного.

При появлении у животных других признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и пр.), также обязательна отправка соответствующего патологического материала на бактериологическое исследование. У абортировавших животных берут на исследование и пробы молока.

Бактериологическая диагностика бруцеллеза включает бактериоскопию мазков из патологического материала, выделение культур бруцелл на питательных средах и (при необходимости) постановку биологической пробы на морских свинках. Результат исследования считают положительным при выделении культуры возбудителя или положительном результате биопробы.

Серологическая диагностика бруцеллеза заключается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животных с помощью реакции агглютинации в пробирках (РА), реакции связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента (РДСК), пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба — РБП), реакции иммунодиффузии с О-ПС-антигеном (РИД). Специфические антитела в молоке коров выявляют с помощью кольцевой реакции (КР).

Аллергический метод с использованием бруцеллина ВИЭВ применяют при исследовании свиней.

Крупный рогатый скот, яков, зебу и буйволов исследуют с помощью РА, РСК или РДСК, РБП, КР, РИД; овец, коз, оленей, маралов, лошадей, верблюдов, — с помощью РА, РСК или РДСК, РБП; свиней-с помощью РСК или РДСК, РБП, а также аллергическим методом; собак и животных других видов (кроме перечисленных выше) — с помощью РА и РСК.

Дифференциальный диагноз. Бруцеллез дифференцируют от других инфекций, проявляющихся абортами. У крупного рогатого скота необходимо исключать кампилобактериоз и хламидиоз, а также трихомоноз. У овец и коз исключают кампилобактериоз, листериоз, хламидиоз, у свиней — лептоспироз. Клиническая картина этих болезней не позволяет провести точную дифференциацию. Необходимы лабораторные исследования. При серологической диагностике следует учитывать возможность перекрестных реакций, обусловленных одним из серовариантов иерсиний. У овец исключают инфекционный эпидидимит баранов.

Лечение. Больные бруцеллезом животные подлежат убою. Их не лечат.

Иммунитет и средства специфической профилактики. Иммунитет при бруцеллезе недостаточно прочный, относительный. Его называют фагоцитарным — связанным в основном со специфически сенсибилизированными (иммунными) фагоцитами. Однако фагоцитоз, как и при туберкулезе, часто имеет незавершенный характер. Синтез сывороточных антител отстает во времени от специфических изменений иммунокомпетентных клеток. Защитная роль антител невелика. При латентной инфекции серологические реакции часто отрицательны. Полное выздоровление заразившегося животного с освобождением организма от бруцелл представляется сомнительным.

В комплексе мероприятий по борьбе с болезнью у крупного скота важное место занимает профилактическая вакцинация живыми вакцинами из слабовирулентных, но иммуногенных штаммов возбудителей бруцеллеза. Наиболее широко используется вакцина из слабоагглютиногенного штамма Br. abortus 82. Вакцинируют крупный рогатый скот в неблагополучных и угрожаемых по бруцеллезу стадах. В этих же целях, но в меньших масштабах используются вакцины из штаммов Br. abortus 19 и 104-М.

Для профилактической иммунизации мелкого рогатого скота в неблагополучных районах страны используют вакцину из штамма Br. abortus 19 и Br. melitensis Rev-1.

Профилактика и меры борьбы. Основа профилактики бруцеллеза — выполнение комплекса ветеринарно-санитарных правил, направленных на охрану хозяйств и ферм от заноса возбудителей инфекции. Соответственно на каждой ферме должны быть оборудованы необходимые объекты ветеринарного и санитарного назначения.

Без разрешения ветеринарных специалистов нельзя вводить в благополучные стада животных из других хозяйств и населенных пунктов. Не допускаются и бесконтрольные внутрихозяйственные перемещения животных. Весь скот, поступающий в хозяйство по разрешению, в течение 30 дней содержат изолированно в карантинном помещении и исследуют на бруцеллез. В общие стада этих животных вводят только после получения у каждого из них отрицательных результатов исследований. Исключают возможность контактов со скотом неблагополучных хозяйств и населенных пунктов на пастбищах и в местах водопоев. Корма за пределами хозяйства заготавливают только в благополучной местности. Обязательны систематические (плановые) контрольные исследования скота, а в необходимых случаях и профилактическая вакцинация. В случае аборта, преждевременных родов и появления других признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, немедленно изолируют таких животных и принимают меры для срочного уточнения диагноза.

При выявлении бруцеллеза хозяйства (фермы, отделения), а также населенные пункты объявляют неблагополучными и вводят соответствующие ограничения. Запрещают ввод и вывод животных из неблагополучных стад. На всей территории, объявленной неблагополучной, запрещают заготовку кормов для вывоза в другие хозяйства, а также прогон и провоз животных через эту территорию.

Больной скот немедленно изолируют и в течение 15 дней сдают на убой. Предупреждают всякие контакты животных неблагополучных стад (отар) со здоровыми животными. Вводят систему гарантированного обеззараживания продуктов животноводства. В частности, немедленно прекращается вывоз необеззараженного молока, полученного от коров неблагополучного стада. Обеспечивают обеззараживание навоза и сточных вод, проведение текущей дезинфекции. Трупы животных, абортированные плоды подлежат немедленному уничтожению или утилизации.

Оздоровительные мероприятия проводят на основе комплексных планов, учитывающих общие инструктивные положения, эпизоотическую обстановку и местные природно-хозяйственные условия. Конкретные пути оздоровления зависят от широты распространения болезни в районе, области, республике, уровня заболеваемости и характера течения бруцеллеза в оздоравливаемом хозяйстве.

При выявлении бруцеллеза крупного рогатого скота в благополучных областях (краях, республиках) или в благополучных, не проводящих иммунизацию скота районах неблагополучных областей используют метод полной замены неблагополучного поголовья. Так же поступают в случаях острого течения бруцеллеза с массовыми абортами и в случаях, когда в течение 2-5 лет не достигается оздоровление хозяйства с применением противобруцеллезных вакцин. Хозяйства признают оздоровленными при полной ликвидации неблагополучного поголовья и проведении комплекса мероприятий по санации помещений и территории ферм, пастбищ и мест водопоя животных. Кроме того, должно быть получено два (с интервалом 30 дней) отрицательных результата серологических исследований других видов животных (включая собак), имевших контакты с поголовьем неблагополучного стада (фермы). Это требование распространяется и на скот, принадлежащий жителям соответствующего населенного пункта.

В районах и областях (краях, республиках) с широким распространением бруцеллеза может быть разрешено оздоровление неблагополучных хозяйств с использованием противобруцеллезных вакцин. В таком случае ограничения снимают при получении двукратных (с интервалом 30 дней) отрицательных результатов серологических исследований всего поголовья крупного рогатого скота в оздоравливаемом хозяйстве, всех других видов животных, имевших контакты с этим поголовьем, и скота, принадлежащего жителям данного населенного пункта. Обязательным условием остается и выполнение мер по санации помещений, территории ферм, пастбищ и мест водопоя.

При выявлении бруцеллеза овец (коз) в благополучных районах, областях (краях, республиках) все неблагополучное поголовье овец и коз любого хозяйства независимо от форм собственности вместе с приплодом подлежит немедленному убою. Ограничения снимают при получении отрицательного результата двукратных (с интервалом 30 дней) серологических исследований остального поголовья овец (коз), контактировавшего с неблагополучной отарой, и проведения санитарных мероприятий. При выявлении бруцеллеза в стационарно неблагополучных областях (краях, республиках) все неблагополучное поголовье овец и коз с приплодом подлежит убою на мясо. Остальное поголовье хозяйства, давшее отрицательные результаты серологического исследования, иммунизируют противобруцеллезной вакциной.

При выявлении бруцеллеза у буйволов, яков, зебу и верблюдов оздоровительные мероприятия проводят в таком же порядке, как и в стадах крупного рогатого скота.

На фермах и комплексах с поголовьем до 12 тыс. свиней при выявлении бруцеллеза сдают на убой все поголовье (супоросных маток — после опороса и отъема поросят). На более крупных комплексах убою подвергают все поголовье неблагополучных технологических групп, секторов (блоков) или свинарников.

Неблагополучные стада северных оленей признают оздоровленными, если в течение последних двух лет в них не были выявлены животные с клиническими признаками бруцеллеза (аборты, орхиты, эпидидимиты, бурситы), а при серологическом исследовании получены отрицательные результаты.

В неблагополучных звероводческих хозяйствах ежемесячно до получения отрицательных результатов проводят серологические исследования зверей. Реагирующих (самок вместе с пометом) содержат в изоляторе до убоя на мех.

При выявлении бруцеллеза у крупного рогатого скота (буйволов, верблюдов) личных подворий граждан проводят систематические серологические исследования имеющихся животных до получения двукратных (подряд) отрицательных результатов. Если животные содержались в общем стаде, исследуют все поголовье скота неблагополучного населенного пункта. В случае выявления больных бруцеллезом овец или коз немедленно подвергают убою всех имеющихся в хозяйстве животных этих видов. Овец и коз, принадлежащих другим жителям данного населенного пункта, исследуют серологическим методом до получения двукратного (подряд) отрицательного результата. При выявлении бруцеллеза у свиней подвергают убою все свинопоголовье, имеющееся у данного владельца. В зонах значительного распространения бруцеллеза крупный и мелкий рогатый скот, принадлежащий населению, в целях профилактики разрешается иммунизировать противобруцеллезными вакцинами.