Глава 1. Основы классификации микроорганизмов. Морфология микроорганизмов

Основные группы микроорганизмов и принципы их классифика­ции. Ветеринарная микробиология изучает бактерии, вирусы, па­тогенные грибы, риккетсии, микоплазмы, хламидии. Для класси­фикации микроорганизмов используют комплекс признаков: фенотипические (морфология, культуральные, физиологические и другие свойства) и генотипические (структуры и гибридизация ДНК для установления гомологии). Методы геносистематики по­зволяют определять микроорганизмы не по сходству их призна­ков, а по степени родства.

Определение вида микроорганизма в практической работе проводят по его основным свойствам: морфологии, росту на питательных средах, биохимическим свойствам, отношению к различным краскам, по антигенным свойствам, патогенности для животных и др. По этим признакам находят место изучаемого микроба в классификационной таблице определителя.

Для обозначения видов принята двойная (бинарная) номен­клатура — название каждого микроба состоит из двух слов: пер­вое слово обозначает род, пишется с прописной буквы; второе — обозначает вид и пишется со строчной буквы. Например, возбу­дитель сибирской язвы — Bacillus anthracis, возбудитель мыта — Streptococcus equi.

Классификация бактерий. Бактерии — микроскопические представители растительного мира — объединены в царство про­кариотов, которое включает отделы, разделенные на классы, по­рядки, семейства, роды, виды.

Вид — основная таксономическая единица. Бактерии с от­клонениями от типичных свойств вида называют подвидом, при отличии по каким-то отдельным свойствам — вариантом (например, по серологическим свойствам — серологический ва­риант, или серовар).

Патогенные для животных бактерии есть в двух классах: 1) в классе шизомицет — возбудители мелиоидоза, кампилобактериоза, болезни укуса крыс, бруцеллеза, туберкулеза, лептоспироза и др. В отдельные семейства выделены возбудители риккетсиозов и хламидиозов; 2) в классе молликутов — возбудители микоплаз­мозов животных: контагиозной плевропневмонии крупного рога­того скота, агалактии овец и коз и др.

Классификация вирусов. Она проводится по типу нуклеиновой кислоты, числу нитей в ней, относительной молекулярной массе, размеру и особенностям строения- вирусных частиц и репродук­ции вирусов, кругу хозяев, патогенности, способам передачи. Вирусы делятся на две группы: содержащие дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) и содержащие рибонуклеиновую кислоту (РНК).

К ДНК-содержащим вирусам относят: аденовирусы (возбудители аденовирусных болезней животных); герпесвирусы (возбудители болезней Ауески и Марека, ринопневмонии лоша­дей, инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота); паповавирусы (вирусы бородавок рогатого скота и собак); парвовирусы (парвовирусные инфекции свиней, собак, кошек, крупного рогатого скота, кроликов, гусей, алеутская болезнь норок, панлейкопения кошек); поксвирусы (возбудители оспы животных, миксоматоза кроликов, эктимы овец).

К РНК-содержащим вирусам принадлежат: бунъявирусы (возбудители болезни Акабане, лихорадки долины Рифт, болезни Найроби); калицивирусы (вирус везикулярной экзантемы свиней, морских львов Сан-Мигель, калицивирус кошек, возбу­дитель геморрагической болезни кроликов); коропавирусы (вирус инфекционного бронхита птиц, трансмиссивного гастроэнтерита свиней); орбивирусы (вирус инфекционной катаральной лихорад­ки овец, африканской чумы лошадей, эпизоотической геморра­гической болезни оленей); ортомиксовирусы (возбудители гриппа животных); парамиксовирусы (возбудители ныокаслской болезни, парагриппа, чумы плотоядных, чумы крупного рогатого скота); пестивирусы (вирус классической чумы свиней, диареи крупного рогатого скота); пикорнавирусы (возбудители ящура, энтеровирусы животных, возбудители везикулярной болезни свиней, болез­ни Тешена); рабдовирусы (возбудители бешенства, везикулярного стоматита); ретровирусы (возбудители лейкоза животных, вирус висны-маэди овец); тогавирусы (возбудители энцефаломиелитов лошадей — восточного, западного и венесуэльского, японского энцефалита, менингоэнцефалита индеек). Ряд вирусов пока еще не классифицирован.

В практической работе выделенные вирусы определяют путем фильтрации через фильтры с определенными размерами пор, электронной микроскопией, по чувствительности к эфиру и дезоксихолату, определенным показателям рН и химическим веще­ствам, позволяющим установить тип нуклеиновой кислоты, по способности размножаться в куриных эмбрионах, культурах кле­ток и организме специфически восприимчивых животных.

Классификация грибов. Грибы — растительные микроорганиз­мы, не содержащие хлорофилла. Их насчитывают более 100 тыс. видов, объединенных в 20 классов. Болезни животных вызывают грибы, относящиеся к классам фикомицетов, аскомицетов (сум­чатых), базидиомицетов и несовершенных грибов.

Морфология и строение бактерий. Бактерии (от греч. bacte­ria — палочка) — преимущественно одноклеточные микроорга­низмы, имеющие клеточную стенку, ДНК и РНК, неоформлен­ное ядро без оболочки, лишены хлорофилла, размножаются про­стым делением. Спорообразующие аэробные бактерии называют бациллами (например, возбудитель сибирской язвы), анаэроб­ные — клостридиями (возбудители столбняка, брадзота). Величи­на бактерий от 0,1 до 20 мкм. Форма и размеры их могут изме­няться в зависимости от внешних условий. Но при определенных стабильных условиях бактерии сохраняют постоянно присущую данному виду морфологию, выработанную в процессе эволюции. Различают 4 основные формы бактерий: шаровидные (кокки), палочковидные (бактерии, бациллы и клостридии), извитые спи­ралевидные (вибрионы, спириллы), нитевидные (хламидобактерии) (рис. 1).

Кокки чаще имеют форму шара. По взаимораспо­ложению, зависящему от плоскости деления, их можно разделить на группы: микрококки, расположенные одиночно и беспорядоч­но; диплококки — парные кокки; стрептококки — цепочки кок­ков; тетракокки, расположенные по четыре клетки; сарцины — пакеты кокков в несколько рядов; стафилококки — скопления кокков, напоминающие виноградные грозди.

Палочковидные (цилиндрические) бактерии, бациллы и клостри­дии бывают короткими, длинными, с закругленными, обрублен­ными или заостренными концами. Парные палочки называют диплобактериями, цепочки палочек — стрептобактериями. У некоторых бактерий обнаруживают боковые выросты или булаво­видные утолщения на концах клетки.

Извитые спиралевидные бактерии: вибрионы, изогнутость тел которых не превышает, одной четверти оборота; спириллы и спи­рохеты — с изгибами из одного или нескольких оборотов.

 

Рис. 1. Основные формы бактерий:

1 — стафилококки; 2 и 3 — диплококки; 4 — стрептококки; 5 — тетракокки; 6 — сарцины;
7, 8 и 9 — различные виды палочек; 10 — вибрионы; 11 — спириллы; 12 — спирохеты

Нитевидные — серобактерии, железобактерии — непатогенные обитатели водоемов.

Строение бактерий. Бактерии состоят из оболочки, цитоплазмы, нуклеоида (ядра) и других структур (рис. 2). Оболоч­ка бактерий — тонкая пленка, в которой заключено содержимое бактериальной клетки. Придает бактериям определенную форму, через нее проходят необходимые для жизнедеятельности клетки вещества и выводятся ненужные продукты обмена веществ. За­щищает бактерию от воздействия вредных факторов внешней среды. Состоит из клеточной стенки и цитоплазматической мем­браны. У бактерий некоторых видов имеется капсула.

Клеточная стенка бактерий состоит из наружного (липопротеидного), среднего (липополисахаридного) и внутреннего (ригид­ного, мукополимерного) слоев. Она проницаема для солей, со­держит ферменты. К ее внутренней поверхности прилегает цитоплазматическая мембрана, состоящая из липидного и протеинового слоев. Она также содержит ферменты и играет роль осмотического барьера. Если действием лизоцима раство­рить клеточную стенку, то такая бактерия превращается в про­топласт.

Рис. 2. Схема бактериальной клетки: 1 — слизистый слой (капсула); 2 — оболоч­ка (клеточная стенка); 3 — ядро (нуклеоид) в начальной стадии деления; 4 — цитоплазматическая мембрана; 5 — начало образо­вания поперечных перегородок; 6 — плазмида (эписома); 7—жгутик; 8 — включе­ние; 9 — рибосома; 10 — мезосома; 11 — спора

Капсула — слизистый слой вокруг клеточной стенки у бакте­рий некоторых видов, предохраняющий их от фагоцитоза и дей­ствия антител. Состоит из полисахаридов, глюкопротеинов или полипептидов, у некоторых бактерий — из протеинов. Является фактором вирулентности бактерий некоторых видов (например, у возбудителя сибирской язвы капсула обнаруживается только в организме животных или человека, см. рис. 14).

Цитоплазма бактерий — внутреннее содержимое клетки. Это коллоидная система, состоящая из воды, белков, нуклеиновых кислот и других веществ. В ней происходят сложные процессы обмена веществ. Цитоплазма содержит мелкие зерна — ри­босомы (рибонуклеопротеиды), функция которых — синтез белка; плазмиды — генетические внехромосомные структуры в виде молекул ДНК; различные включения — гранулы волютина, липопротеиновые тела, гликоген, гранулезу, пигментные скопле­ния, серу, кальций — это резерв питательных веществ клетки или конечные продукты ее обмена; вакуоли, число которых увеличи­вается по мере старения клетки; мезосомы — особые мембранные системы, участвующие в обмене веществ и делении клетки. Су­ществует две группы бактерий, цитоплазма которых имеет раз­ный химический состав. Одни окрашиваются по Граму положи­тельно, другие — отрицательно, что имеет большое значение при дифференциальной диагностике.

Рис. 3. Жгутики бактерий:

1 — монотрихи; 2 — амфитрихи; 3 — лофотрихи; 4 — перитрихи

Нуклеоид (ядро) — плотный хроматиновый тяж в центре бакте­рии, состоит из клубка двойных нитей ДНК.

Жгутики — цитоплазматические тонкие и длинные нити (рис. 3), состоящие из белка — флагелина; обеспечивают движе­ние бактерии. Их обнаруживают с помощью особых методов ок­раски или при исследовании в электронном микроскопе. Бакте­рии по расположению жгутиков и их числу делятся на: моно­трихи — с одним жгутиком на конце; амфшприхи — с двумя полярно расположенными жгутиками; лофотрихи — с пучком жгутиков на одном конце клетки; перитрихи — жгутики распола­гаются по всей поверхности клетки. Характер движения бактерий зависит от числа жгутиков и их расположения, возраста культуры, температуры инкубирования, наличия химических веществ и дру­гих факторов. Наиболее подвижны моно- и лофотрихи, они дви­жутся прямолинейно. Перитрихи движутся беспорядочно.

Подвижность бактерий устанавливают специальными метода­ми. Это свойство используют для дифференциации бактерий.

Кроме активной подвижности микробы способны к молекуляр­ному (пассивному) броуновскому движению, что нужно учиты­вать при оценке степени подвижности бактерий.

Бахромки (пили, реснички, ворсинки) покрывают тело бакте­рий отдельных видов. Они короче и тоньше жгутиков.

Споры — одна из стадий развития бацилл и клостридий, выра­ботанная в процессе эволюции в борьбе за сохранение вида. Спорообразование начинается с появления в клетке спорогенной зоны, затем образуется проспора и, наконец, зрелая спора. Это сопровождается уплотнением цитоплазмы, концентрацией ядер­ной субстанции и формированием плотной трехслойной оболоч­ки. Споры образуются при воздействии неблагоприятных факто­ров (недостаток питательных веществ), старении культуры, а также при определенной температуре и степени аэрации. Так, возбудитель сибирской язвы образует споры при доступе кисло­рода, а возбудитель столбняка — в его отсутствие. Споры устой­чивы, длительно сохраняются в неблагоприятных условиях, вы­держивают кипячение и действие концентрированных дезинфи­цирующих веществ. Вблагоприятных условиях они прорастают в вегетативные клетки. Споры могут располагаться в разных частях микробной клетки, диаметр спор может превышать поперечник бактериальной клетки.

Морфология и строение актиномицетов (лучистых грибов). Клетки актиномицетов — тонкие ветвящиеся нити (гифы) без перегородок, поэтому все разветвление представляет как бы одну клетку. Размножаются с помощью воздушных спор, образующих­ся на ветках мицелия, или путем фрагментации — распада цито­плазмы на отдельные клетки. Гифы актиномицетов имеют обо­лочку, в цитоплазме обнаруживают вакуоли, различные включе­ния, диффузно расположенную ядерную субстанцию. Таким образом, по морфологии, диффузному ядру, свойствам цитоплаз­мы и оболочки, отношению к краскам и питательным веществам актиномицеты сходны с бактериями, а по способу размножения (образование спор и их прорастание) сходны с низшими гриба­ми. В настоящее время их принято относить к бактериям, а не к грибам (цв. табл. 1).

Из патогенных актиномицетов известны возбудители актиномикоза животных и человека. В пораженных тканях мицелий гриба образует плотные зерна (друзы) из переплетенных нитей. Огромное значение имеют виды актиномицетов — продуцентов антибиотиков (стрептомицина, хлортетрациклина и др.). Особого внимания заслуживают актиномицеты из рода Mycobacterium. Мицелий у них не образуется, клетки палочковидные, ветвящие­ся. К ним относятся возбудители туберкулеза.

Морфология и строение спирохет. Спирохеты — группа микро­организмов с характерными свойствами и с признаками, общими для бактерий и простейших; имеют штопорообразную извитую форму. Тело их состоит из осевой нити и цитоплазмы; офор­мленного ядра, спор, капсул и жгутиков не обнаружено. Вместо оболочки — тонкий эктоплазматический слой — перипласт. Об­ладают подвижностью благодаря сокращениям тела клетки.

К спирохетам относятся лептоспиры — возбудители лептоспироза животных.

Морфология и строение микоплазм. Микоплазмы — самые мелкие из бактерий, спор не образуют, неподвижны. Растут на сложных питательных средах. Колонии врастают в твердые среды, имеют вид «глазуньи». Микоплазмы полиморфны, так как у них нет истинной клеточной оболочки (есть только трехслой­ная мембрана). Отмечают шаровидную, зернистую, нитевидную, кольцевидную формы. Микоплазмы проходят через бактериаль­ные фильтры и растут на средах, не содержащих живых клеток. Все это позволяет считать их промежуточными микроорганизма­ми между бактериями и вирусами.

К патогенным для животных принадлежат возбудители конта­гиозной плевропневмонии крупного рогатого скота, агалактии овец и коз, контагиозной плевропневмонии коз и овец, респира­торного микоплазмоза птиц. Микоплазмы также контаминируют куриные эмбрионы и культуры клеток, что затрудняет выращива­ние вирусов.

Морфология и строение риккетсий. Риккетсии — самостоя­тельная группа бактерий. С другими бактериями они сходны по морфологии, окраске, некоторым структурным компонентам и антигенным свойствам. Риккетсии — облигатные паразиты, живут и размножаются только в живых клетках, что сближает их с вирусами. Полиморфны, имеют кокковидную, палочковидную или нитевидную форму. Спор и капсул не образуют, неподвиж­ны. У них есть внутренняя и наружная оболочки, цитоплазма с гранулами типа рибосом и вакуолеобразными структурами. Раз­множаются путем деления кокковидных и палочковидных форм, а также дробления нитевидных форм.

К патогенным для животных относятся возбудители Ку-лихорадки, гидроперикардита крупного рогатого скота (ко удриоза).

Бактерии, относящиеся к семейству хламидий. У крупного рогатого скота, овец и свиней встречается Ch. picorni, у птиц — Ch. psittaci, а у кошек — Ch. pneumoniae. Два последних вида патогенны и для людей.

(Морфология вирусов описана в главе 5«Основы учения о вирусах» раздела I.)

Морфология и строение грибов. Грибы размножаются спора­ми, имеют вегетативное тело в виде мицелия. Интерес для вете­ринарной микробиологии представляют плесени, дрожжи и не­совершенные грибы.

Плесени (гифомицеты) образуют длинные гифы, форми­рующие грибницу (мицелий). Гифа имеет оболочку, цитоплазму и ядро. В цитоплазме находят включения, зерна и вакуоли. Широко распространены в природе мукоровые грибы (головчатая плесень). Они имеют ветвящийся одноклеточный мицелий, раз­виваются в сырых местах.

Плесень пенициллиум (кистевидная плесень) также широко рас­пространена в природе, ее обнаруживают в почве, на грубых кормах, в молочных продуктах. Представители этого рода — про­дуценты пенициллина;

Аспергилл (леечная плесень) имеет многоклеточный мицелий, его часто обнаруживают на сене. Один из видов вызывает аспергиллез животных. Некоторые аспергиллы — продуценты анти­биотиков (фумигаллин, аспергиллин). Фузариум — плесень, ми­целий которой бывает окрашен в разные цвета. Поражает пере­зимовавшие в поле злаковые растения и делает их ядовитыми для человека и животных («пьяный хлеб»). Молочная плесень появляется на поверхности молочных продуктов. Один из видов этой плесени вызывает молочницу — заболевание молодняка жи­вотных, в том числе птиц.

Дрожжи относятся к классу сумчатых грибов — аскомицетов. Это одноклеточные организмы округлой, овальной или уд­линенной формы с двухконтурной оболочкой и ядром. Размно­жаются почкованием или спорообразованием. Большое значение имеют расы дрожжей, вызывающие спиртовое брожение, а также используемые для приготовления кефира. Патогенным для лоша­дей является возбудитель эпизоотического лимфангита.

Несовершенные грибы — группа грибов, имеющих многоклеточный мицелий, размножаются спорами, бесполым путем. Имеют оболочку, цитоплазму, ядро, включения. К ним относятся возбудители дерматомикозов — трихофитии, микро­спории, парши (фавуса).

Лабораторная работа

Техника безопасности при работе с инфекционным материалом и больными животными. Приготовление и исследование мазков из культур бактерий и органов животных

При работе с патологическим материалом и больными живот­ными внимание ветеринарного специалиста должно быть сосре­доточено на двух основных моментах: предупредить заражение людей и не допустить распространения возбудителя инфекции. Существуют инфекционные болезни животных, которыми может заразиться человек (зооантропонозы): сибирская язва, туберку­лез, бруцеллез, туляремия, Ку-лихорадка, лептоспироз, листериоз, мелиоидоз, бешенство, болезнь Ауески, ящур, дерматомикозы (трихофития, микроспория), сап, сальмонеллезы, эктима, чума верблюдов (зооантропонозная чума), рожа свиней, орнитоз. За­ражение человека этими болезнями может произойти при: кли­ническом осмотре животных и оказании им лечебной помощи; вскрытии трупов и взятии патологического материала для лабо­раторного исследования; проведении прививок и диагностичес­ких исследований; работе с патологическим материалом в лабо­ратории; соприкосновении с необеззараженным сырьем живот­ного происхождения (кожа, шерсть и т.п.); переработке мясных и молочных продуктов; употреблении в пищу инфицированных продуктов животного происхождения. В организм человека пато­генные микробы проникают через кожу при нарушении ее це­лости, главным образом рук, а также через слизистые оболочки рта, носовой полости, дыхательных путей, глаз и пищеваритель­ного тракта.

Чтобы предохранить себя и других от заражения инфекцион­ной болезнью и не допустить ее распространения, нужно соблю­дать следующие меры предосторожности:

1) люди, допускаемые к работе с патологическим материалом и больными животными, должны быть тщательно проинструкти­рованы;

2) все работы с больными животными и патологическим ма­териалом выполняют только в защитной одежде, включающей халат (с завязками на спине и рукавах), колпак или косынку, при необходимости — нарукавники, передники, резиновые пер­чатки, резиновые сапоги, очки и защитные марлевые маски. Людей с повреждениями на руках к этой работе, как правило, не допускают. При необходимости разрешают работать только в резиновых перчатках, раны на руках смазывают настойкой йода и затем коллодием. Перед надеванием проверяют целость рези­новых перчаток;

3) оборудование лаборатории и рабочего места должны обес­печивать высокую производительность труда и его безопасность;

4) при работе с патологическим материалом нельзя курить, разговаривать, касаться лица руками, сморкаться, поправлять во­лосы, отвлекаться от работы. Следует избегать лишних передви­жений. В лаборатории запрещается хранить и принимать пищу;

5) руки после работы погружают в сосуд с дезинфицирующей жидкостью (2%-ным раствором фенола) на 1-2 мин, затем тща­тельно моют водой с мылом;

6) использованные в работе пипетки, предметные и покров­ные стекла, куски ваты и т.п. тотчас помещают в сосуд с дезин­фицирующей жидкостью (5%-ный раствор фенола; 3%-ный рас­твор лизола или креолина). Металлические предметы, бывшие в контакте с патологическим материалом, немедленно обеззаражи­вают прокаливанием на пламени. Инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и др.) после употребления кипятят в стери­лизаторе или кладут в закрытый сосуд для последующего автоклавирования. Если патологический материал попал на окружающие предметы, необходимо немедленно провести тщатель­ную дезинфекцию, залив это место дезинфицирующим раство­ром, а затем, если можно, прожечь данное место с помощью тампона, смоченного спиртом;,

7) весь патологический материал (культуры микробов, трупы животных и т.п.), не подлежащий дальнейшему исследованию, обеззараживают (автоклавируют, сжигают). Место работы с этим материалом должно быть тщательно продезинфицировано и очи­щено. Допускается только влажная уборка помещений. Особое внимание уделяют удалению пыли с предметов, находящихся в лаборатории. Для обеззараживания комнат, где работают с пато­логическим материалом, применяют бактерицидные лампы.

Меры против заражения при попадании патологического ма­териала в организм человека: а) при ранениях инфицированным инструментом или при покусе животным не следует торопиться с остановкой кровотечения. Рану нужно прижечь настойкой йода и наложить 40-60%-ную спиртовую повязку; б) при попадании патологического материала в рот его немедленно выплевывают в чашку с дезинфицирующей жидкостью, а рот в течение несколь­ких минут прополаскивают слабым раствором йода (3-5 капель настойки йода на стакан воды) или перманганата калия; в) если патологический материал попал в глаз, его нельзя тереть; следует промыть глаз слабым раствором йода или перманганата калия.

Правила обращения с больными инфекционными болезнями животными. Ветеринарный специалист соприкасается с больны­ми животными во время их исследования (при постановке диа­гноза), при оказании лечебной помощи, убое животных, вскры­тии трупов, проведении противоэпизоотических мероприятий. Любая работа с больными и в особенности с подозрительными по заболеванию заразными болезнями животными проводится только в защитной одежде.

Исследование больного животного слагается из предвари­тельного ознакомления, включающего регистрацию его, изучение документов и сбор анамнестических, в том числе эпизоотологических, данных, и собственно исследования, которое, в свою очередь, делится на общее исследование (внешний осмотр, исследование кожного покрова и видимых слизистых оболочек и лимфатических узлов, термометрия) и специальное исследование (исследование отдельных систем и органов). При необходимости берут кровь и другие материалы для лабораторно­го исследования. При исследовании больных и подозрительных по заболеванию животных необходимы чрезвычайная осторож­ность и продуманность действий. Прежде чем вплотную присту­пить к этому, надо собрать по возможности полный анамнез, провести предварительное наблюдение за животным и беглый клинический осмотр. Например, если кажется, что собака пода­вилась костью, прежде чем исследовать глотку, надо тщательно расспросить хозяина о поведении животного в последние дни, характере кормления, о возможных контактах с другими живот­ными, особенно собаками, выяснить, нет ли подобных призна­ков у собак или кошек, принадлежащих соседям. И только после всего этого, соблюдая все меры предосторожности, можно начи­нать исследовать животное (возможно бешенство!).

Осторожность нужно соблюдать и при оказании больным жи­вотным лечебной помощи (при отделении последа или родовспо­можении можно заразиться бруцеллезом; ошибочное вскрытие сибиреязвенного карбункула повлечет за собой рассеивание воз­будителя болезни и возможность заражения человека). Место, где проводилась работа с больным животным, дезинфицируют.

Изготовление мазков. Мазки из культур микробов и мазки-от­печатки из органов трупа готовят на чистых обезжиренных пред­метных стеклах. Непосредственно перед приготовлением мазка предметное стекло несколько раз проводят через пламя горелки. При изготовлении мазка из культуры микробов надо предохра­нить ее от загрязнения микробами из окружающей среды и не допустить инфицирования этой культурой окружающих предме­тов. Материал из пробирки с культурой берут прокаленной на пламени горелки бактериологической (платиновой) петлей или стерильной пастеровской пипеткой. Тонкий конец пипетки после прокаливания на пламени сгибают под прямым углом. Открывают пробирку над пламенем, вынимают пробку и откры­тый конец пробирки также обжигают на пламени. Петлю прожи­гают еще раз и, остудив, вводят в пробирку, не касаясь ее краев, захватывают каплю культуры. При пользовании пипеткой тонкий конец ее обламывают и насасывают культуру, пользуясь при этом резиновой грушей (а не ртом). Пробирку в этот момент держат чуть в стороне от пламени горелки. Затем закрывают пробирку над пламенем пробкой, также проведенной через пламя горелки. Взятый материал наносят на предметное стекло и размазывают тонким слоем, петлю прокаливают и ставят в шта­тив, пипетку — в сосуд с дезраствором.

При изготовлении мазков из агаровых культур на предметное стекло предварительно наносят каплю стерильного физиологи­ческого раствора или бульона.

При изготовлении мазков-отпечатков из органов участок ор­гана, откуда предполагается сделать отпечаток, прижигают шпа­телем или обжигают на пламени. Стерильными ножницами вы­резают небольшой кусочек исследуемого органа и, захватив его пинцетом, прижимают поверхностью разреза к 'предметному стеклу, делая таким образом несколько отпечатков.

Мазки с обратной стороны специальным карандашом по стеклу обводят и надписывают, указывая при этом номер или кличку животного и дату изготовления мазка. Приготовленные тем или иным способом мазки высушивают на воздухе и фикси­руют физическим (3-4-кратным проведением над пламенем го­релки) или химическим (спирт-ректификат в течение 15-20 мин; смесь спирта с эфиром поровну — 10-15; метиловый спирт — 5 мин; хлороформ — несколько секунд) способом.

Окраска мазков. Ее проводят простым или сложными спосо­бами.

Простой способ: на фиксированный мазок наливают несколько капель раствора карболового фуксина Циля в разведе­нии 1:10 или метиленовой синьки Леффлера. Затем краску смы­вают дистиллированной водой, мазок высушивают фильтроваль­ной бумагой.

Сложные способы. Окраска по Грому: на фиксирован­ный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги и на него наливают раствор генцианвиолета. Через 2 мин бумагу удаляют, раствор сливают, на препарат наливают люголевский раствор. Спустя 1 мин его сливают и препарат в течение 30 с обрабаты­вают спиртом-ректификатом, затем промывают водой и окраши­вают спирто-водным фуксином (для этого карболовый фуксин разводят 1:10 водой) в течение 2 мин. После этого препарат промывают водой и рассматривают под микроскопом.

Можно использовать заранее приготовленные и высушенные бумажки, пропитанные 1%-ным спиртовым раствором генциан­виолета. Их кладут на фиксированный мазок и смачивают водой; в остальном техника окраски та же.

Микрокартина: грамположительные микробы темно-фиолето­вые, грамотрицательные — розовые.

Окраска по Цилю — Нильсену. Применяют при микроскопи­ческой диагностике туберкулеза и паратуберкулеза. Фиксирован­ный на пламени мазок покрывают фильтровальной бумажкой, наливают на нее карболовый фуксин и подогревают до появле­ния паров, после чего нагревание прекращают и оставляют крас­ку на препарате 2-3 мин. Затем пинцетом удаляют бумажку и промывают мазок водой. После этого обесцвечивают препарат 5%-ным водным раствором серной кислоты в течение 3-5 с, тщательно промывают водой и в течение 10-15 с обрабатывают спиртом. Снова промывают водой и докрашивают в течение 3-5 мин метиленовой синькой Леффлера. Краску смывают водой, препарат высушивают.

Микрокартина: спирто-кислотоустойчивые микробы красные, остальные — синие (см. цв. табл. I).

Окраску по Козловскому применяют для микроскопической диагностики бруцеллеза. Фиксированный на пламени мазок ок­рашивают 2%-ным раствором сафранина (раствор готовят непо­средственно перед употреблением) с интенсивным подогревани­ем (до появления паров). Промывают водой и окрашивают 1%-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 1 мин. Затем промывают водой и высушивают.

Микрокартина: бруцеллы красные, остальные микробы зеле­ные (см. цв. табл. 1).

Окраска капсул применяется при микроскопической диагностике сибирской язвы.

Способ Михина. Фиксированный мазок при подогревании ок­рашивают метиленовой синькой Леффлера в течение 2-3 мин до появления паров. Краску быстро смывают водой, мазок высу­шивают.

Микрокартина: капсулы светло-розовые, бациллы темно-синие.

Окраска спор. Способ Пешкова. Фиксированный мазок окрашивают кипящей метиленовой синькой Леффлера в течение 20 с. После охлаждения мазок промывают водой и докрашивают 0,5%-ным водным раствором нейтральрота в течение 30 с, затем промывают водой и высушивают.

Микрокартина: споры синие, микробные тела розовые, ядра фиолетовые.

 

Контрольные вопросы. 1. Каковы основные группы микроорганизмов? 2. На каких принципах основана классификация микроорганизмов? 3. Из каких струк­тур состоят бактерии? 4. В чем состоят меры личной профилактики при работе с патологическим материалом, культурами микроорганизмов и животными, боль­ными инфекционными болезнями? 5. Как приготовить и окрасить мазки из культур микробов, из патологического материала?