Обобщенная (типовая) схема выделения возбудителей оппортунистических инфекций

1-й день

1. Забор и доставка материала в лабораторию (см. разд. 20.7.1 «Правила забора, хранения и транспорти­ровки материала»).

2. Обработка материала с целью его гомогенезации и концентрации (в необходимых случаях).

3. Приготовление и окраска мазка по Граму. В необходимых случаях, например при подозрении на присутствие в материале простейших, грибов, хламидий, микобактерий и т. п., дополнительно применяют специальные методы окраски.

4. Приготовление разведений патологического ма­териала от 10 ' до 10'⁶ в теплом растворе хлорида натрия 0,5% с 0,01% желатина (для предупреждения осмотического шока бактерий)

5.Высев 0,1 мл материала из разведений на чашки Петри с питательной средой газоном (на три чаш­ки из каждого разведения). В стандартный набор питательных сред желательно включить желточно-солевой агар (для стафилококков), среду Эндо или эозинметиловый агар (для энтеробактерий), кровя­ной агар (для стрептококков и ряда других требова­тельных к питательным средам видов), среду Сабуро (для грибов), среду для контроля стерильности или другие среды для анаэробов. В случаях, когда имеют­ся указания на вероятный возбудитель (клиническая
симптоматика, вид патологического материала, ре­зультаты микроскопии), должны быть использованы более селективные среды.

2-й день

1.Определение характера роста на питательных средах.

2.Подсчет количества колоний каждого типа на чашках с посевом разведений патологического мате­риала и расчет бактериальной обсемененности мате­риала по формуле:

X КОЕ = N х ПД х СР,

где N — число колоний; ПД — посевная доза; СР — степень разведения. Микроскопия мазков по Граму из всех выросших типов колоний.

3.Отсев на среду накопления с колоний различных типов. Для повышения достоверности исследования желательно отсевать 2—3 колонии одного типа. Эта мера вызвана гетерогенностью популяции: она удо­рожает исследование, но зато резко повышает его достоверность.

4.Ускоренная идентификация (при наличии мето­дов и возможностей).

3-й день

1.Установление «чистоты» культуры на средах на­копления путем просмотра характера роста под бино­кулярной лупой и микроскопией мазка.

2.Идентификация чистых культур. Тесты иденти­фикации зависят от предполагаемого вида или рода выделенной культуры. Она проводится с помощью об­щепринятых методик или автоматизированных систем.

3.Определение чувствительности выделенных культур к антибиотикам и, в необходимых случаях, к антисептикам.

4—5-й день

1.Учет результатов тестов, использованных для идентификации.

2.Оформление заключения (семейство, род, вид выделенных культур; обсемененность материала КОЕ/мл или КОЕ/г; антибиотикограмма; этиологи­ческая значимость выделенных культур и состав их
популяций).

3.По клиническим и эпидемиологическим показате­лям определяют факторы патогенности и эпидемиоло­гические маркеры (фаго-, серо-, резистенс-, бактерио-, циновары и др.) у этиологически значимых культур.