Качественные реакции. Около 1 г измельченного сырья (см. раздел "Количественное определение") кипятят в течение 5 мин с 20 мл 70% спирта и фильтруют через бумажный фильтр. К 5 мл фильтрата прибавляют 3 мл 2% спиртового раствора алюминия хлорида; появляется желто - зеленое окрашивание (флавоноиды).
Количественное определение. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавляют 30 мл 70% спирта, колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры под струей холодной воды и фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100мл. Экстракцию повторяют еще 2 раза указанным выше способом. Объединенные извлечения повторно фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу, фильтр промывают 70% спиртом и доводят объем фильтрата тем же спиртом до метки (раствор А). 4 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 2% раствора алюминия хлорида в 95% спирте и доводят объем раствора 95% спиртом до метки; через 20 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют следующий раствор: 4 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 каплю разведенной хлористоводородной кислоты и доводят объем раствора 95% спиртом до метки.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на авикулярин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора; 330 - удельный
показатель поглощения комплекса авикулярина с алюминия хлоридом при 410 нм; m - масса сырья в граммах; W - потеря в массе при
высушивании сырья в процентах.
Числовые показатели. Цельное сырье. Суммы флавоноидов в пересчете на авикулярин не менее 0,5%.
HERBA HYPERICI
ТРАВА ЗВЕРОБОЯ
Качественные реакции. К 1 мл извлечения, полученного согласно методике, описанной в разделе "Количественное определение", прибавляют 2 мл 2% раствора алюминия хлорида в 95% спирте и 7 мл 95% спирта; раствор окрашивается в зеленовато - желтый цвет (флавоноиды).
Количественное определение. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавляют 30 мл 50% спирта. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Горячее извлечение фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 100 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. Вату помещают в колбу для экстрагирования и прибавляют 30 мл 50% спирта. Экстракцию повторяют еще дважды в описанных выше условиях, фильтруя извлечение в ту же мерную колбу. После охлаждения объем извлечения доводят 50% спиртом до метки и перемешивают (раствор А).
В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл раствора алюминия хлорида в 95% спирте и доводят объем раствора 95% спиртом до метки. Через 40 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 415 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл извлечения, 1 капли разведенной уксусной кислоты и доведенный 95% спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Государственного стандартного образца (ГСО) рутина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора; D0 - оптическая
плот
ность раствора ГСО рутина; m - масса сырья в граммах; m0 -
масса ГСО рутина в граммах; W - потеря в массе при высушивании
сырья в процентах.
Примечание. Приготовление раствора Государственного стандартного образца (ГСО) рутина: около 0,05 г (точная навеска) ГСО рутина, предварительно высушенного при температуре 130-1350. С в течение 3 ч, растворяют в 85 мл 95% спирта в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают.
Числовые показатели. Цельное сырье. Суммы флавоноидов в пересчете на рутин не менее 1,5%.
FRUCTUS CRATAEGI
ПЛОДЫ БОЯРЫШНИКА
Качественные реакции. Измельченное сырье в количестве 0,5 г (см. раздел "Количественное определение") кипятят в течение 15 мин с 5 мл 95% спирта. После охлаждения извлечение декантируют и 0,01 мл раствора микропипеткой наносят на пластинку "Силуфол" (15Х15 см) в виде полосы длиной 1 см, рядом наносят в виде точки - 0,005 мл 0,1% раствора Государственного стандартного образца (ГСО) гиперозида. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 мин, затем помещают в камеру со смесью растворителей хлороформ - метиловый спирт (8:2) и хроматографируют восходящим способом (смесь растворителей заливают в камеру непосредственно перед хроматографированием). Когда фронт растворителей дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, высушивают в вытяжном шкафу в течение 2 мин и просматривают в УФ - свете при длине волны 360 нм. На уровне пятна ГСО гиперозида должна появиться полоса темно - коричневого цвета. Затем пластинку обрабатывают 5% спиртовым раствором алюминия хлорида и нагревают ее в течение 2-3 мин в сушильном шкафу при температуре 100-105 град. С. При этом пятно приобретает ярко - желтую окраску в видимом и яркую желто - зеленую флюоресценцию в УФ - свете (гиперозид).
Примечание. Приготовление 5% спиртового раствора алюминия хлорида: 5г алюминия хлорида (ГОСТ 3759-75) растворяют в 40 мл 95% спирта в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствора 95% спиртом до метки.
Количественное определение. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 95% спирта, взвешивают с погрешностью ±-0,01 г, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры колбу вновь взвешивают и доводят до первоначальной массы 95% спиртом.
Содержимое колбы фильтруют через воронку диаметром 5 см с вложенным ватным тампоном толщиной не более 0,5 см, отбрасывая первые 15 мл фильтрата; 25 мл фильтрата переносят в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 50 мл и упаривают досуха под вакуумом на ротационном испарителе. Сухой остаток дважды обрабатывают 10 мл горячего 10% раствора натрия хлорида, каждый раз нагревая содержимое колбы на кипящей водяной бане в течение 2 мин. Раствор охлаждают, фильтруют через воронку с ватным тампоном, смоченным водой, на колонку с полиамидным сорбентом. Колонку промывают 30 мл воды, из них 10 мл используют для промывания фильтра, который после этого убирают. Когда над сорбентом останется слой жидкости толщиной 7-10 мм, водный элюат отбрасывают. Элюирование суммы флавоноидов проводят 25 мл 95% спирта, который добавляют в колонку постепенно, порциями по 5 мл. Первые порции элюата (бесцветные и прозрачные) собирают в градуированную пробирку вместимостью 10 мл, диаметром около 1 см. Когда элюат приобретет окраску и объем окрашенного элюата в пробирке достигнет 1 мл, мерную пробирку убирают (граница раздела бесцветного водного и окрашенного спиртового слоев элюата в пробирке хорошо различима визуально). Элюат из пробирки отбрасывают. Последующие порции элюата собирают в мерную колбу вместимостью 25 мл. Объем элюата в колбе доводят 95% спиртом до метки и перемешивают (раствор А).
В мерную колбу вместимостью 10 мл переносят 2 мл раствора А и доводят объем раствора 95% спиртом до метки (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре при длине волны 365 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм на фоне раствора сравнения. Параллельно измеряют оптическую плотность элюата раствора ГСО гиперозида: 2 мл 0,1% раствора ГСО гиперозида помещают в круглодонную колбу вместимостью 50 мл со шлифом и упаривают досуха под вакуумом. Содержимое колбы дважды обрабатывают 10 мл горячего 10% раствора натрия хлорида, каждый раз нагревая содержимое колбы на водяной бане в течение 2 мин, и сливают раствор на колонку с полиамидным сорбентом через воронку с ватным тампоном, смоченным водой. Элюат для измерения оптической плотности стандартного образца гиперозида получают аналогично элюату суммы флавоноидов. Содержимое суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность элюата испытуемого раствора; D0 -
оптическая плотность элюата раствора ГСО гиперозида; m0 - масса
ГСО гиперозида в граммах; m - масса сырья в граммах; W - потеря в
массе при высушивании сырья в процентах.
Примечания. 1. В ходе анализа используют 3 колонки с
полиамидным сорбентом: для получения испытуемого раствора, раствора сравнения и раствора ГСО гиперозида.
2. Приготовление колонки: 1 г полиамида для колоночной хроматографии (ТУ 6-09-10-822-73) помещают в стаканчик вместимостью 50 мл, приливают 30 мл воды, перемешивают и выливают через воронку в колонку диаметром 1,5 см и высотой 25 см. В нижнюю часть колонки предварительно помещают небольшой ватный тампон, смоченный водой. Колонку заполняют при открытом кране. Элюирование проводят со скоростью 4 мл/мин, не допуская обнажения поверхности сорбента. Толщина слоя жидкости над сорбентом должна быть не менее 4-5 мм. 3. Приготовление раствора сравнения: раствор сравнения получают аналогично элюату суммы флавоноидов путем пропускания 25 мл 95% спирта через колонку в мерную колбу вместимостью 25 мл, объем раствора доводят 95% спиртом до метки и перемешивают.
Числовые показатели. Гиперозида не менее 0,5%.
ЛИСТЬЯ БЕРЕЗЫ
FOLIA BETULAE
Качественные реакции. 0,03г измельченного сырья (см. раздел «Количественное определение») помещают в пробирку, прибавляют 5 мл 95% спирта и взбалтывают в течение 3 минут. Затем прибавляют 10 капель кислоты хлористоводородной концентрированной 0,015г магния металлического и нагревают на кипящей водяной бане в течение 3 минут. Через 5 минут появляется розовое окрашивание (флавоноиды).
Количественное определение. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1мм. Около 1г (точная навеска) измельченною сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 200 мл, приливают 100 мл 50% спирта и взвешивают. Колбу с содержимым присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры колбу взвешивают, доводят ее массу 50% спиртом до первоначальной, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр.
1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, приливают 1 мл 2% раствора алюминия хлорида в 95% спирте и доводят объем 95% спиртом до метки. Через 40 минут измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 412 нм в кювете с толщиной слоя 10мм.
В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл извлечения, 1 капли кислоты уксусной разведенной и доведенный 95% спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл. Раствор выдерживают в течение 40 минут. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Государственного стандартного образца (ГСО) рутина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.
Содержание суммы фенольных соединений в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора; D0 - оптическая плотность раствора ГСО рутина; m - масса сырья в граммах; m0 - масса ГСО рутина в граммах; W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.
Примечание. Приготовление раствора Государственного стандартного образца (ГСО) рутина. Около 0,05г (точная навеска) ГСО рутина предварительно высушенного при температуре 130-135°С в течение 3 час, растворяют в 85 мл 95% спирта в колбе вместимостью 100 мл при нагревании па водяной бане, охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок годности раствора I мес.
Числовые показатели. Суммы фенольных соединений в пересчете на рутин не менее 2,0%.
ТРАВА ОВСА ПОСЕВНОГО
HERBA AVENAE SATIVAE
Качественные реакции. 2г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2мм, помещают в колбу со шлифом вместимостью 50 мл и прибавляют 20 мл 70% спирта. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей бане в течение 30 минут с момента закипания спирта в колбе. После охлаждения полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр. Далее извлечение упаривают до объема 1 мл, прибавляют 1 мл 95% спирта этилового, тщательно перемешивают и делят на две части. К 1 мл извлечения прибавляют 0,1г порошка магния или цинковой пыли и 1 мл кислоты хлористоводородной концентрированной. Наблюдается появление розового окрашивания (флавоноиды). Вторую часть извлечения в количестве 0,015 мл наносят на линию старта (2см от края) пластинки «Силуфол» размером 8x15 см в виде полоски длиной 1см. Одновременно на линию старта в 2см от последнего наносят 0,005 мл 0,1% спиртового раствора Государственного стандартного образца (ГСО) лютеолина. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 минут, затем помещают в камеру (предварительное насыщение не менее 1 часа) со смесью растворителей хлороформ: метанол: вода (52:28:7) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 14см, её вынимают из камеры, высушивают в вытяжном шкафу в течение 10 минут и просматривают в УФ-свете при длине волны 360 нм. На пластинке над местом нанесения извлечения должны появиться 3 основных темно-коричневых пятна, которые по отношению к ГСО лютеолина имеют Rс 0.44: 0,57: и 1,09. Хроматограмму проявляют 5% спиртовым раствором алюминия хлорида и нагревают в сушильном шкафу при температуре 100-105°С в течение 2-3 минут. При этом пятна приобретают желтую окраску в видимом свете. В УФ-свете пятна с Rс 0,44 (2»-0-арабинозид изоориентина) и Rc 0,57 (2»-0-арабинозид изовитексина) имеют ярко-желтую окраску, а верхнее пятно с Rc 1,09 (трицин) - ярко желто-зеленую.
Количественное определение. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2мм. Около 1г (точная навеска) измельченного сырья помещают в патрон из фильтровальной бумаги и затем в экстрактор Сокслета объемом около 100 мл. В колбу-приемник заливают 150 мл хлороформа и ведут форэкстракцию на кипящей бане до получения бесцветных хлороформных сливов.
Бумажный патрон вынимают, сушат при комнатной температуре 18-20°С в вытяжном шкафу до удаления запаха растворителя. Патрон надрезают, помещают в коническую колбу вместимостью 200 мл, со шлифом, и прибавляют 100 мл 70% спирта этилового. Колбу закрывают пробкой, взвешивают с погрешностью ± 0,01г, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают при умеренном кипении растворителя на водяной бане 1,5 часа. Затем колбу с содержимым охлаждают до комнатой температуры, взвешивают и доводят массу до первоначальной 70% спиртом этиловым. Извлечение филируют через бумажный фильтр.
2 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора 70% спиртом этиловым до метки и перемешивают.
Оптическую плотность раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 338 нм в кювете с толщиной слоя 10мм. В качестве раствора сравнения используют 70% этанол.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на 2-О-арабинозид изовитексина и абсолютно-сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора; 353 -удельный показатель поглощения 2-0-арабинозид изовитексина при 338 им; m – масса сырья в граммах; W – потеря в массе при высушивании сырья в процентах; 25-100 – разведения испытуемого раствора.
Числовые показатели. Цельное сырье. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на 2-О-арабинозид изовитексина не менее 1,3%.
