Фенольные гликозиды в индивидуальном состоянии представляют собой белые кристаллические вещества, растворимые в воде, этиловом спирте, ацетоне, нерастворимые в этиловом эфире и хлороформе. Все фенольные гликозиды оптически активны в связи с присутствием в их молекуле углеводного компонента (как правило, глюкозы).
Фенольные гликозиды, как и все О-гликозиды, характеризуются способностью к гидролизу при нагревании с минеральными кислотами или при термостатировании с ферментами.
При гидролизе расщепление происходит до углеводного компонента и соответствующего агликона. Подобный гидролиз происходит и в живом организме под действием ферментов; при этом первичными продуктами метаболизма фенольных гликозидов являются агликон и сахар.
Методы выделения и идентификация фенологликозидов
Фенольные гликозиды извлекают из растительного материала этиловым и метиловым спиртами (96, 70 и 400). В дальнейшем очистку спиртовых извлечений ведут общепринятым для гликозидов методом.
Выделение индивидуальных соединений проводят, как правило, методом адсорбционной хроматографии на полиамиде, силикагеле, целлюлозе. В качестве элюирующих смесей используются вода и водный спирт, если адсорбентом служит полиамид или целлюлоза, либо различные смеси органических растворителей для всех перечисленных адсорбентов.
Фенольные гликозиды в лекарственном растительном сырье могут быть идентифицированы хроматографией в тонком слое сорбента или на бумаге.
Для хроматографирования в тонком слое сорбента используют системы растворителей: 1) н -бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5); 2) н -бутанол - уксусная кислота - вода - ксилол (6:2:3:4); 3) хлороформ – метиловый спирт (8:2).
При хроматографировании на бумаге используют 5, 10, 15%-ную уксусную кислоту.
Для индивидуальных веществ определяют температуру плавления, удельное вращение, снимают УФ и ИК спектры. Рассмотрим УФ и ИК спектры на примере арбутина. В связи с наличием в молекуле фенольных гликозидов ароматических С=С-связей фенольные гликозиды имеют максимум поглощения в УФ спектре при 270-300 нм. Максимум поглощения арбутина находится при 287 нм и может быть использован как для качественной характеристики, так и количественного определения арбутина в растительном материале.
В ИК спектре арбутина имеются характерные полосы при 3200-3400 см-1, обусловленные наличием спиртовых и фенольных гидроксильных групп; полоса 1515, 1460, 1440 см-1 типична для ароматических С=С-связей. Имеется ряд полос в области 800-1300 см-1 (область «отпечатка пальцев»). Совпадение спектров исследуемого гликозида со спектром достоверного образца указывает на идентичность соединений. Для идентификации фенольных гликозидов широко используются химические превращения (гидролиз, ацетилирование, метилирование и т. д.) и сравнение констант продуктов превращения с литературными данными для предполагаемого гликозида.
Качественный анализ сырья на содержание фенологликозидов
Фенольные гидроксиды, имеющие свободную гидроксильную группу, дают все реакции, характерные для фенолов, например, с железоаммниевыми квасцами, реакцию диазотирования и др.
В случае если фенольный гидроксил гликозилирован, как у салицина, реакции проводят после предварительного гидролиза гликозида кислотами либо ферментами. Эти же качественные реакции используют для обнаружения фенольных гликозидов на хроматограммах.
В случае хроматографирования в тонком слое силикагеля хроматограммы можно обработать кроме перечисленных реактивов еще и 4%-ной Н2SO4 в абсолютном этиловом спирте.
При этом фенольные гликозиды в зависимости от строения обнаруживаются в виде желтых, красных, оранжевых или голубых пятен.
При обработке хроматограмм раствором нитрата серебра и щелочью фенольные гликозиды обнаруживаются в виде коричневых пятен с различным оттенком. При обработке хроматограмм реактивом Паули фенольные гликозиды в зависимости от строения проявляются в виде желтых, оранжевых или красных пятен.
Методика обнаружения арбутина в листьях толокнянки и брусники.
1. 0,5 г измельченного сырья кипятят с 10 мл воды 2-3 мин и после охллаждения фильтруют. К 1 мл фильтрата прибавляют кристаллик сульфата закисного железа; жидкость окрашивается сначала в сиреневый, затем темно-фиолетовый цвет, и, наконец, образуется темно-фиолетовый осадок (арбутин).
2. К 1 мл фильтрата (в фарфоровой чашке) прибавляют 4 мл раствора аммиака и 1 мл 10%-ного раствора натрия фосфорно-молибденовокислого в 10%-ной HCl; появляется синее окрашивание (арбутин).
3. 0,5 г мелкоизмельченного растительного сырья заливают 5 мл этилового спирта и экстрагируют при периодическом встряхивании и слабом нагревании на водяной бане в течение 1 ч. Полученное извлечение с помощью капилляра наносят на бумагу (3-4 прикосновения капилляра) и хроматографируют восходящим способом в 5%-ной уксусной кислоте до прохождения фронта растворителя 15-17 см (хроматограмма проходит в течение 1 ч. при использовании бумаги FN-3). Хроматограмму вынимают, высушивают, обрабатывают раствором 10%-ной спиртовой щелочи и затем реактивом Паули. Арбутин имеет самое высокое значение Rf =0,75, отделяется от сопутствующих гликозидов и проявляется в виде ярко-красного пятна. Аналогичные результаты можно получить на пластинке «Силуфол» при хроматографировании в системе хлороформ-этиловый спирт (7:3) с последующей обработкой раствора щелочи и реактивом Паули.
Хроматограммы до и после обработки реактивами целесообразно просматривать в УФ свете с целью идентификации сырья по отдельным компонентам.
