Ходе реакции происходит сопряженное окисление арахидоновой кислоты

Кислородом и донором электронов в виде НАДН, триптофана, ферроциа-

Нида. Следует отметить, что исходный субстрат для этих реакций, арахи-

Доновая кислота, может быть получена из масел с использованием специ-

Фических фосфолипаз.

Интересным направлением являются разрабатываемые процессы пре-

Вращения достаточно доступных субстратов (фумарата аммония, фенола,

Индола, пирувата аммония) в редкие аминокислоты (тирозин, фенилала-

Нин, триптофан, 5-окситриптофан) с участием лиаз, процессы получения

Органических кислот из фумаровой, ферментативная модификация нук-

Леиновых кислот, синтез олиго- и полипетидов. Ферментативный органи-

Ческий синтез, находящийся в настоящее время на стадии становления и

Развития, имеет огромные перспективы для существенного расширения

Сферы применения в ближайшем будущем.

ФЕРМЕНТЫ В МИКРОАНАЛИЗЕ

Высокая каталитическая активность и уникальная специфичность дейст-

Вия ферментов являются основой применения их для аналитических целей.

Ферментные методы анализа характеризуются высокой чувствительностью,

Специфичностью, точностью, быстродействием, а также возможностью при-

Менения в сложных многокомпонентных средах. В аналитической энзимо-

Логии применяется широкий спектр ферментов, относящихся ко всем клас-

Сам (оксидоредуктазы, трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы, лигазы).

При этом наряду с моноферментными системами, широко используются

Полиферментные системы. В настоящее время созданы, наряду с классиче-

Скими фотометрическими методами регистрации, принципиально новые

методы – электрохимические, био- и хемолюминесцентные.

Ферментный анализ относится к кинетическим методам анализа, при

Котором искомое вещество определяют по скорости реакции, пропорцио-

Нальной концентрации определяемого вещества. Например, при превра-

щении вещества А в продукт Р: А → P, концентрация последнего будет

нарастать во времени, при этом начальная скорость реакции v о пропор-

циональна концентрации А: v о = k [А], где k – константа скорости реакции.

Чем выше исходная концентрация определяемого вещества, тем больше

Начальная скорость реакции. Предварительно построенный калибровоч-

ный график зависимости v о от [А] позволяет определять неизвестные кон-

Центрации веществ в анализируемой смеси.

Ферментный электрод – это комбинация датчика, основой которого яв-

Ляется ионоселективный электрод с иммобилизованным ферментом. Поня-

Тие ферментного электрода ввели Кларк и Лайон в 1962 г.; в то время ис-

Пользовали растворимые ферменты. В 1969 г. Гильбо и Монталво впервые

Описали потенциометрический ферментный электрод для определения мо-

Чевины, позволявший измерять разность потенциалов, возникающую в сис-

Теме при отсутствии внешнего напряжения. Иммобилизованный фермент в

Конструкции электрода первыми применили Апдайк и Хикс в 1971 г., укре-

Пив иммобилизованную в геле глюкозооксидазу на поверхности полярогра-

Фического кислородного датчика (датчик вольтометрического или ампер-

Метрического типа позволяет измерять ток при наложении постоянного на-

Пряжения). С тех пор разработано свыше 100 различных конструкций фер-

ментных электродов, некоторые из них представлены в табл. 3.7.

В ферментном электроде фермент используют обычно в иммобилизо-

ванном виде. Для этого применяют два метода: химическую модифика-

Цию молекул фермента путем введения групп, обеспечивающих нераство-

Римость, и физическое включение фермента в инертный носитель (крах-

мал, ПААГ) (рис. 3.4). Ферментный электрод используют как обычный

Ионоселективный электрод. Потенциометрические датчики (электроды

Для определения мочевины, пенициллина, аминокислот) непосредственно

Подключают к цифровому вольтметру; строят график зависимости потен-