II Фаза метаболизма (реакции биосинтеза)

• Конъюгация с глюкуроновой кислотой: спирты, фенолы, карбоновые кислоты, тиолы, амины.

• Продукты взаимодействия - (0-, N -, S -) глюкурониды).

 

 

• Метилирование: амины. фенолы. тиолы подвергаются в организме метилированию, это тоже реакции конъюгации или биозинтеза. Образуются N-.O-.S-метильные конъюгаты.

• N - метилирование.

пример: метилирование норадреналина до адреналина (переносчиком метальных групп является кофермент 5-аденозилметионин).

• О - метилирование: пирогаллол метаболизирует до метилпирогаллола)

Ацетилирование (ароматические амины, сульфаниламиды) - это

присоединение ацетильной группы: анилин метаболизирует до ацетанилида

• Конъюгация с глицином: ароматические карбоновые кислоты с глицином образуют гиппуровые кислоты. Алифатические карбоновые кислоты с глицином не взаимодействуют.

 

• Конъюгация с сульфатами.

• Двойная конъюгации.

Если у метаболита имеются две и более функциональных групп. Например,

некоторые ЧС одновременно образуют конъюгаты с глюкуроновой кислотой и сульфатами.

Пример: фенолы и спирты.

План составления акта СХИ

Акт составляется по определенной форме. Он имеет заголовок «Акт №…судебно-химического исследования» и состоит из трех частей: введения, описательной части и заключения.

Во введении, согласно Правилам судебно-химического исследования и УПК РФ (ст.191), указывается:

1) время (начало и окончание) производства экспертизы;

2) номер и дата сопроводительного документа;

3) место производства экспертизы;

4) кем выполнена экспертиза (имя, отчество, фамилия, образование, специальность, степень, звание и квалификационная категория, занимаемая должность эксперта-химика);

5) какие вещественные доказательства и по какому делу подверглись экспертизе;

6) кто присутствовал при производстве экспертизы;

7) цель экспертизы или вопросы, поставленные на разрешение экспертизы;

8) под заголовком «Обстоятельства дела» кратко излагается содержание материалов дела.

В разделе «Наружный осмотр» подробно описываются вещественные доказательства: упаковка, надписи на банках, склянках, морфологический состав объектов, вес, цвет, запах, реакция на лакмус и другие индикаторы, консервирование.

В разделе «химическое исследование» дается подробное описание примененных методов, техники исследования ВД и результатов исследования.

При описании «Химического исследования» отмечается количество объекта, минерализата, дистиллята, извлечения и т.п., израсходованного на каждую операцию. Подробно описывается весь ход СХА: методы изолирования и обнаружения ядовитых и сильнодействующих веществ и наблюдавшиеся при этом явления (цвет, осадок, образование кристаллов и т.д.). Описывая результаты исследования, эксперт-химик не должен допускать выражений: «Получилась положительная реакция», «Результат реакции отрицательный», а также не должен ссылаться на автора того или иного метода, приводить формулы и уравнения реакций.

В заключении на основании описания СХИ сначала перечисляются найденные вещества с указанием их количеств, затем ненайденные вещества и, наконец, по пунктам приводятся ответы на вопросы (в пределах компетенции эксперта-химика), поставленные органами дознания, следствия, суда.

Акт судебно-химической экспертизы ВД подписывается экспертом-химиком, производившим экспертизу. Акт должен быть написан аккуратно, все исправления, вписанные и зачеркнутые места должны быть оговорены и скреплены подписью химика-эксперта.

Лабораторная работа №3

Тема: «Изолирование токсических веществ методом Стаса-Отто»

Цель: познакомиться с начальными этапами подготовки биологического объекта к химико-токсикологическому исследованию, приобрести практические навыки изолирования токсических веществ полярными растворителями (метод Стаса-Отто), научиться оформлять заключение эксперта (вводную и исследовательскую части).

Опыт №1

Установление целостности упаковки, определение консервирования, цвета, запаха, наличия инородных включений и массы (объема) биологического материала

Проводят осмотр упаковки биологического материала. Необходимо удостовериться в ее целостности. Изучают надписи на этикетке. Упаковку аккуратно вскрывают, не допуская попадания ее частей в биологический материал. Устанавливают наличие консервирования объекта. Отмечают запах: естественный (запах печени, мочи, почек и т.д.), специфические, посторонние запахи: (запах аммиака, сероводорода, уксусной кислоты, горького миндаля и т.д.). Определяют цвет биологического объекта. Устанавливают наличие инородных включений.

Если на исследование поступил твердый биологический материал, необходимо измерить его массу на технических весах. Если поступил жидкий биологический объект, устанавливают его объем мерным цилиндром.

 

Опыт №2

Определение рН биологического объекта

Определение рН среды имеет большое значение для предварительного решения вопроса о веществах, которые могли вызвать отравление.

Для определения рН среды небольшое количество объекта измельчают, вносят в пробирку, добавляют дистиллированную воду и хорошо взбалтывают, фильтруют. Определяют рН среды водной вытяжки: стеклянной палочкой наносят каплю вытяжки на красную и синюю лакмусовые бумажки или универсальный индикатор. Параллельно ставят контрольный опыт с дистиллированной водой. Покраснение синей лакмусовой бумажки свидетельствует о кислой реакции среды. При кислой реакции среды необходимо провести исследование с красной бумажкой Конго. Посинение бумажки Конго свидетельствует о наличии минеральных или органических кислот, введенных извне. Для уточнения характера кислоты водную вытяжку разбавляют в 5-10 раз и вновь исследуют с помощью красной бумажки Конго. При отравлении минеральными кислотами бумажка Конго синеет, а в случае органических кислот – не меняет своей окраски. Следует помнить, что слабокислую реакцию среды объекты могут иметь за счет кислотного брожения, а также объекты, содержащие малые количества органических кислот.

Посинение красной лакмусовой бумажки свидетельствует о щелочной реакции среды. Щелочная среда водных вытяжек может быть обусловлена наличием в объекте едких щелочей, карбонатов щелочных металлов, аммиака и других соединений. Для решения вопроса о наличии едкой или карбонатной щелочи в объекте проводят дополнительные исследования: при добавлении к 1мл водного извлечения капли спиртового раствора фенолфталеина наблюдается розовое или красное окрашивание. К окрашенной жидкости при взбалтывании добавляют 3-5 капель 10%-ного раствора хлорида бария. При наличии в водном извлечении едкой щелочи окраска фенолфталеина не исчезает, а в случае наличия карбонатов щелочных металлов – окраска исчезает, и появляется белый осадок карбоната бария.

Для определения аммиака часть водной вытяжки после обработки ее избытком раствора хлорида бария наносят на красную лакмусовую бумажку. Если посиневшая бумажка через некоторое время (20-30 минут) на воздухе принимает первоначальную окраску (розовеет), делают заключение об отравлении аммиаком. Испытание на аммиак проводят только при отсутствии едкой или карбонатной щелочи.

Опыт №3

Определение свежести биоматериала

Часть объекта помещают в коническую колбу (объемом 50мл), отверстие колбы закрывают пробкой, под которую прикрепляют 3 бумажки: смоченную водой красную лакмусовую бумажку; бумажку, смоченную раствором ацетата свинца; бумажку, смоченную раствором сульфата меди. Если в исследуемом объекте содержится аммиак, то лакмусовая бумажка и бумажка, смоченная сульфатом меди, синеют, последняя – за счет образования аммиаката меди. Если в исследуемом объекте присутствует сероводород, бумажка, смоченная щелочным раствором ацетата свинца, чернеет.

Наличие в исследуемом объекте аммиака и сероводорода свидетельствует о процессах гниения и поэтому сделать заключение, что аммиак поступил извне, нельзя.

Опыт №4

Изолирования токсических веществ методом настаивания биологического объекта с подкисленным спиртом (метод Стаса – Отто)

От биологического объекта отрезается кусочек, массой примерно 100г. Определяется точная масса на технических весах. Биологический объект измельчается ножом (скальпель) на специально подготовленной доске. Измельченный БО помещают в стеклянную банку, заливают спиртом, уровень которого должен на 4-5 см превышать уровень БО. Проводят подкисление 20% раствором щавелевой кислоты до рН 2,5 – 3. Определение рН проводят путем нанесения капельки изолирующего агента стеклянной палочкой на лакмусовую бумажку. Банку закрывают крышкой. Наклеивают этикетку с указанием номера группы (фамилий студентов), проводящей исследование. Объект оставляют настаиваться до следующего практического занятия.

При исследовании биологических жидкостей, стадия настаивания объекта со спиртом отсутствует. После подкисления БО щавелевой кислотой сразу проводится экстракция.

Все манипуляции с БО, а также полученные результаты студент оформляет в виде заключения судебно-химического эксперта по плану, предложенному преподавателем.