Практика по микре
Приготовление мазка
1.чистка стекла
2.нанесение материала
3.размазывание материала на предметном стекле(мазок)
4.высушивание
5.фиксация
6.окрашивание
7.микроскопирование.
2.Микроскопирование -способ исследования микрообъектов.
· Для изучения неокрашенных объектов используется фазово-контрастное устройство, с помощью которого можно получить четкое контрастное изображение прозрачных, не имеющих окраски микроорганизмов.
· При изучении внутриклеточных структур микроорганизмов, используется люминесцентная микроскопия, основанная на способности некоторых объектов при специальном окрашивании флюорохромами светиться в коротковолновых лучах света (ультрафиолетовых, синих и др.).
· Наиболее совершенными приборами, дающими возможность получать полезное увеличение объекта в 200-500 тыс. и более раз, являются электронные микроскопы, в которых вместо световых лучей используется поток электронов. С помощью электронных микроскопов удается рассмотреть белковые молекулы.
ПРАВИЛА ИММЕРСИОННОЙ МИКРОСКОПИИ
1. Микроскоп устанавливают в рабочее положение – увеличение объективов
2. Устанавливают освещение, включая лампу или направляя свет на зеркало микроскопа. Конденсор должен быть поднят до упора, диафрагма открыта (рис. №3)
3. На препарат наносят каплю иммерсионного масла
4. Препарат помещают на предметный столик и фиксируют его клеммами
5. Наблюдая сбоку, опускают тубус с объективом 90х, 100х макровинтами в масло почти до соприкосновения с препаратом
6. Затем, глядя в окуляр (7х, 10х), макровинтом очень медленно поднимают объектив до появления изображения и с помощью микровинта производят окончательную фокусировку четкого изображения
7. При микроскопии определяют взаимное расположение микроорганизмов, их размеры, форму, структуру, окраску
8. После просмотра препарата револьвер переводят на малое увеличение 8х и только после этого препарат снимают со столика
9. Фронтальную линзу объектива протирают марлей, смоченной чистым бензином или эфиром для удаления остатков иммерсионного масла
10. Затем опускают предметный столик (или конденсор в микроскопах с неподвижным столиком) и накрывают микроскоп чехлом.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ ВИСЯЧЕЙ КАПЛИ
1. Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло, вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина
2. На покровное стекло наносят каплю культуры и осторожно накрывают покровное стекло стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре
3. Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере и сохраняется долгое время
МЕТОД РАЗДАВЛЕННОЙ КАПЛИ
1. На предметное стекло наносят пипеткой или петлей каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом.! Чтобы не образовалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его
2. Для предохранения от высыхания препарат помещают во влажную камеру
3. Микроскопируют в темном поле при увеличении объектива 40Х
Препарат можно поместить во влажную камеру для предохранения от высыхания
СПОСОБ ГРАМА
1. На фиксированный мазок нанести генцианвиолет (бумага по Синеву) на 1-2 мин
2. Краску слить и нанести раствор Люголя на 1 мин
3. Раствор Люголя слить и на мазок нанести 96% спирт на 15-20 мин в зависимости от толщины мазка
4. Спирт смыть дистиллированной водой
5. Мазок дополнительно окрасить разведенным фуксином Пфейффера на 2-3 мин
6. Краситель смыть водой, препарат высушить, промикроскопировать с иммерсией
7. Микроскопия с иммерсией.
Грамположительные (Гр+) бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Грамотрицательные (Гр-) бактерии окрашиваются в красный цвет.
6. Нейссера метод окраски используют для выявления зерен волютина у возбудителей дифтерии и др. коринебактерий.
1.Фиксированный мазок 2 - 3 мин красят уксуснокислым синим
2.10 - 30 с обрабатывают р-ром Люголя, слегка промывают водой и докрашивают в течение 30 с р-ром везувина
3.высушивают и микроскопируют.
Бактерии окрашиваются в желтый цвет, волютин -в темно-синий.
