Применение этих схем обработки обеспечивает вызывание множественной овуляции у 75-78,5% животных и получение в среднем 3-3,5 жизнеспособных эмбриона на донора.
Для вызывания суперовуляции у коров используются также гипофизарные препараты. Основное физиологическое действие фолликулостимулирующих гормонов заключается в стимуляции роста и созревания фолликулов яичника, образования фолликулярных гормонов (эстрогенов), регулирующих процесс течки. Лютеинизирующий гормон совместно с фолликулостимулирующим вызывает овуляцию и стимулирует образование желтого тела. Желтое тело само выполняет функцию гормональной железы и вырабатывает гормон – прогестерон, который обеспечивает сохранение беременности. В практике используются гипофизарные препараты производства США (ФСГ-п), Литвы (фоллитропин), Чехии (фолликотропин) и др. (таблицы 3,4,5).
Таблица 3.
Схема обработки коров-доноров ФСГ-п.
День цикла
Препарат
Доза, мг
40
50
9 – 11–й
ФСГ-п
14
16
10 – 12–й
ФСГ-п
12
14
11 – 13–й
ФСГ-п+простагландин
клопростенол или суперфан
8
750 мкг
150 мкг
12
750 мкг
150 мкг
12 – 14–й
ФСГ-п
6
8
13 – 15-й Охота
0-й день цикла
Первое осеменение
1-й день цикла
Второе осеменение
7-й день цикла
Извлечение эмбрионов
В отличие от ГСЖК препараты ФСГ вводятся многократно, так как период полураспада ФСГ очень короткий (5-б) ч. Применение ФСГ в сочетании с простагландинами обеспечивает получение 5-5,5 жизнеспособных эмбриона и 9-10 овуляций на донора. Общая доза ФСГ-п 40-50 мг, интервал между инъекциями - 12 часов.
Таблица 4.
Схема обработки коров-доноров фоллитропином.
День цикла
Препарат
Доза, 1200 ЕД
9 – 11–й
Фоллитропин
360
10 – 12–й
Фоллитропин
300
11 – 13–й
Фоллитропин+простагландин
клопростенол
или суперфан
300
750 мкг
150 мкг
12 – 14–й
Фоллитропин
240
13 – 15-й Охота
0-й день цикла
Первое осеменение
1-й день цикла
Второе осеменение
7-й день цикла
Извлечение эмбрионов
Таблица 5.
Схема обработки коров-доноров фолликотропином.
День цикла
Препарат
Доза, 480 МЕ
9 – 11–й
Фолликотропин
160
10 – 12–й
Фолликотропин
160
11 – 13–й
Фолликотропин+простагландин
клопростенол
или суперфан
80
750 мкг
150 мкг
12 – 14–й
Фолликотропин
80
13 – 15-й Охота
0-й день цикла
Первое осеменение
1-й день цикла
Второе осеменение
7-й день цикла
Извлечение эмбрионов
Совершенствование схем индукции полиовуляции у коров-доноров требует изыскания новых подходов к решению этой проблемы, разработки эффективных препаратов, позволяющих получать хорошие результаты по выходу эмбриопродукции.
Изучена эффективность гонадотропина ФСГ-Б, полученного в лаборатории генетики БелНИИЖ и рекомендуется для практики следующая схема его применения (таблица 6).
Таблица 6.
Схема обработки коров-доноров ФСГ-Б.
День цикла
Препарат
Доза, 1500 ЕД
утро
вечер
Общая
9 – 11–й
ФСГ-Б
240
240
480
10 – 12–й
ФСГ-Б
210
210
420
11 – 13–й
ФСГ-Б+простагландин
суперфан
180
150 мкг
180
-
360
150 мкг
12 – 14–й
ФСГ-Б
120
120
240
13 – 15-й. Охота
0-й день цикла
Первое осеменение 1900ч
1-й день цикла
Второе осеменение 700ч
7-й день цикла
Извлечение эмбронов
Инъекция гонадотропина ФСГ-Б по предложенной схеме позволяет получать в среднем на донора 9-10 овуляций, 7,2-8,1 эмбрионов, втом числе 5,2-5,5 полноценных.
В то же время использование вышеперечисленных гонадотропинов при индукции полиовуляции не исключает образования на яичниках нео-вулировавших фолликулов, наличие которых может привести к нарушениям гормонального статуса доноров. С целью исключения длительной стимуляции роста фолликулов и наступления равномерной овуляции рекомендуются синтетические аналоги гонадотропин рилизинг-гормона (Гн-РГ). Инъекция донору Гн-РГ в день охоты способствует выделению лютеинизирующего гормона и овуляции в фиксированное время (таблица 7).
Таблица 7.
Схема индукции полиовуляции с использованием Гн-РГ диригестрана и сурфагона.
День эстрального цикла
Время введения препарата, ч
Препараты, доза
ФСГ-п, 40 мг
ФСГ-Б,
1500 ЕД
Фоллитропин, 1200 ЕД
1
2
3
4
5
9-11-й
800
2000
7
7
240
240
180
180
10-12-й
800
2000
6
6
210
210
150
150
11-12-й
800
2000
4+150 мкг суперфана
4
180+150 мкг суперфана
180
150+150 мкг суперфана
150
1
2
3
4
5
12-13-й
800
2000
3
3
120
120
120
120
13-15-й Охота
800 сурфагон
или диригестран
25 мкг
200 мкг
25 мкг
200 мкг
25 мкг
200 мкг
0-й день цикла
1900
Первое осеменение
1-й день цикла
700
Второе осеменение
7-й день цикла
Извлечение эмбрионов
Многолетний опыт нашей работы показал, что инъекция Гн-РГ (25 мкг сурфагона или 200 мкг диригестрана) в 2-3 раза снижает число не овулировавших фолликулов, повышает на 6-9% количество овуляций и на 11-19% число эмбрионов, пригодных к пересадке в расчете на одного донора.
СИНХРОНИЗАЦИЯ ПОЛОВЫХ ЦИКЛОВ ДОНОРОВ И РЕЦИПИЕНТОВ.
Синхронность проявления эструса между донором и реципиентом – важнейшее условие высокой приживляемости эмбрионов. Для синхронизации охоты используют простагландин ПГФ2-альфа или его синтетические аналоги (эстрофан, ремофан, клопростенол, клатрапростин, суперфан, эстуфалан и др.).
По технологии трансплантации на каждого донора следует подготавливать не менее 5 реципиентов, причем день охоты реципиента должен совпадать с днем первого осеменения суперовулирующего донора. В случае использования в технологии трансплантации постоянных доноров (проверенных на гормональную обработку и имевших стабильный выход качественных эмбрионов) число реципиентов можно увеличить до 10.
Перед гормональной обработкой животных исследуют ректально (определяют размеры и форму яичников, наличие и выраженность желтого тела). Лютеиновая фаза цикла соответствует оптимальному времени для инъекции препаратов. Простагландины вводят внутримышечно, в дозах, указанных в наставлениях по их применению. Как правило, животные приходят в охоту через 48-72 часа после инъекции препарата. Не пришедших в охоту животных обрабатывают повторно через 10 дней с момента первого введения ПГФ2-альфа. Двукратное введение препарата (в любую фазу полового цикла) с 10-ти дневным интервалом эффективно использовать на большом поголовье доноров и реципиентов, так как это способствует увеличению числа животных, проявивших признаки половой охоты и снижает трудоемкость операций обслуживающего персонала.
Эффективен способ синхронизации эструса путем комплексного применения аналогов простагландина Ф2-альфа с гонадотропными гормонами. В этом случае синхронизации подвергают самок, на яичниках которых имеется желтое тело. Гонадотропины ФСГ-Б (БелНИИЖ) инъецируют в дозе 500 ЕД для коров и 400 ЕД для телок; ФСГ-п (США) – 7 и 5мг соответственно, а также сывороточный гонадотропин (Чехия) в дозе 700 и 500 ИЕ внутримышечно, за 24-48 часов до инъецирования синтетических простагландинов. Охота у животных проявляется на 2-3 сутки после введения простагландина.
Ввиду слабовыраженности охоты и течки у мясных животных, а также частой встречаемостью коров с гипофункцией яичников, рекомендуется комплексное применение аналогов простагландина Ф2-альфа с фолликулостимулирующими гормонами ФСГ-п (США) в дозе 10 мг для коров и 7 мг для телок, а также с сывороточным гонадотропином (Чехия) в дозе 1000 ИЕ для коров и 700 ИЕ для телок, их внутримышечное введение осуществляется за 24-48 часов до инъецирования простагландина Ф2-альфа соответственно. В отдельных случаях для точного установления охоты у мясных коров необходимо ректальное обследование.
ОСЕМЕНЕНИЕ КОРОВ-ДОНОРОВ.
Эффективность искусственного осеменения коров-доноров в супер-овулирующую охоту во многом зависит от правильности выбора оптимального времени для осеменения коров с учетом таких особенностей эструса, как проявление течки, ее интенсивности и длительности, общей реакции возбуждения, охоты и овуляции, качества используемой спермы быков-производителей, а также строгого соблюдения ветеринарно-санитарных требований при выполнении работ.
Течка у коров характеризуется набуханием и покраснением слизистых преддверия влагалища и шейки матки, из половых органов выделяется слизь. Ее длительность составляет от 2 до 6 суток. Через 24-36 часов после начала течки наступает общее возбуждение, животное теряет аппетит, снижает удой, становится беспокойным, прыгает на других животных. Через 6-12 часов, после того как у коровы появились признаки возбуждения, наступает охота, которая продолжается 12-18 часов.
У мясного скота продолжительность течки колеблется в пределах от 21 до 44 часов, охота длится от 7 до 12 часов, овуляция наступает через 20-25 часов от начала и 10-15 часов после окончания охоты.
Выявление в охоте проводят не реже трех раз в день при активных прогулкахили пастьбе. Обычно, в условиях отвечающих физиологическим нормам 60-70% коров приходит в охоту утром, 10% - в полдень и 20-30% вечером. Продолжительность каждого наблюдения составляет 1-2 часа. Охоту считают установленной, если корова не менее двух раз подряд проявила рефлекс неподвижности.
При осеменении необходимо учитывать тот факт, что овуляция наступает через 10-15 часов после окончания охоты, а яйцеклетки при выходе из фолликулов в рог матки способны сохранять жизнеспособность только в течение нескольких часов, поэтому осеменять коров следует перед овуляцией, как можно ближе к ее началу.
Сроки осеменения коров можно определить и ректально. За 6-12 часов до овуляции в яичнике присутствует зрелый фолликул, представляющий собой пузырек размером 1,5-2 см, при осторожном надавливании на который наблюдается зыбление.
Осеменение доноров осуществляют ректоцервикальным способом, позволяющим контролировать состояние половых органов самки, дважды в день, двойной дозой спермы в тело матки с применением стерильных инструментов одноразового пользования. В каждой дозе должно быть не менее 30 млн. подвижных спермиев. Первое осеменение проводят после установления охоты, второе – через 10-12 часов. При необходимости (длительная охота) осеменение повторяют 3-4 раза. Сперма используется только с высокой оплодотворяющей способностью и хорошего качества. Иногда для повышения результативности осеменения используется семя от двух быков. Достоверно не известны причины этого. Однако, существует мнение, что происходит отбор наиболее жизнеспособных мужских гамет, обладающих высокой оплодотворяющей способностью.
При введении инструмента в цервикальный канал сперму следует впрыскивать медленным нажатием на поршень катетера, распределяя ее равномерно на протяжении всего канала шейки матки. Допускается легкий массаж шейки и рогов матки. Для большинства животных мясного скота характерен легковозбудимый тип нервной деятельности, Поэтому при искусственном осеменении следует создавать спокойную обстановку с целью снятия стрессового воздействия на животное. В случае, если донор ведет себя неспокойно, проводят внутримышечную инъекцию 2%-го аминазина из расчета 0,05 г на 100 кг живой массы. При осеменении коров-доноров необходимо выдерживать в стойле до прекращения признаков охоты.
