У собак не было отмечено специфичных беременности го-надотропинов, как это наблюдается у лошадей или людей, а плазменная концентрация прогестерона не будет сильно различаться у беременных и небеременных сук, поэтому
ее нельзя использовать для диагностики беременности.
В позднем проэструсе концентрация прогестерона меньше 1 нг/мл, своего пика — 15-80 нг/мл — она достигает примерно на 30-й день, а затем медленно падает до 4-5 нг/мл к 62-му дню с резким падением до 2 нг/мл за 24—48 часов до родов. Секреция прогестерона необходима для поддержания беременности весь период. У беременных сук концентрация прогестерона немного выше, чем у небеременных, но не настолько, чтобы иметь диагностическое значение.
Релаксин — единственный специфичный беременности гормон у собак. Сывороточная концентрация релаксина повышается во время беременности, у небеременных сук его концентрация неопределима. У беременных сывороточная концентрация релаксина становится определимой самое раннее на 28-30-й день беременности и достигает своего пика на 40-50-й день. После родов уровень релаксина в сыворотке резко падает, но может оставаться на определимом уровне еще 50 дней во время лактации. Есть предположение, что релаксин главным образом продуцирует плацента, и в меньших количествах — яичники {Steinetz et al, 1989). Для определения релаксина используют иммунные анализы, приспособленные для диагностики беременности. Однако определение релаксина не является широко распространенным тестом на беременность.
Белки плазмы
Распространенные в Северной Америке и Европе тесты на беременность основаны на анализе острофазной концентрации белков в плазме или сыворотке. Включают ли эти измерения фибриноген или С-реактивный белок (СРБ), неясно, хотя один из тестов {Serono Diagnostics, United Kingdom) основан на измерении фибриногена (Eckersall et al, 1993). Обычно концентрация фибриногена повышается на 25-30-й день, а имеет диагностическое значение на 30-50-й день беременности, а затем снижается до прежних значений {Сопсаппоп et.al, 1996; Gunzel-Apel et al., 1997). При гомологичном анализе СРБ у собак уровень этого белка также значительно повышается на 30-50-й день и достигает диагностических значений {Eckersall et al, 1993), но тест на человеческий СРБ имеет ограниченное значение для диагностики беременности у собак {Сопсаппоп et al, 1996). Процент ложнополо-жительных результатов, вероятно, будет выше при использовании тестов на острофазную концентрацию белков для диагностики беременности у собак, потому что концентрация этих белков может повышаться во время воспалений, таких как пиометра. Более того, их использование зависит от правильности определения физиологического дня беременности. Подъем концентрации этих белков, возможно, происходит из-за воспалительно-подобной реакции матки на процесс образования плаценты. Таким образом, пока не существует приемлемых тестов крови, которые могли бы способствовать диагностике беременности у собак, в будущем наиболее точным анализом будет определение концентрации релаксина, а
в настоящее время визуализация при помощи ультрасо-нографии сердцебиений плодов на 25-й день беременности остается единственным диагностическим мероприятием для подтверждения и мониторинга беременности.
Литература
Bondestam S, Alitalo I, Kurkkainen M: Real-time ultrasound pregnancy diagnosis in the bitch. J Small Anim Pract 24:145, 1983. Reports on the use of ultrasound for pregnancy diagnosis in eight bitches as a safe, rapid and easy method of investigation.
Concannon PW, Gimpel T, Newton L, et al: Postimplantation increase in plasma fibrinogen concentration with increase in relaxin concentration in pregnant dogs. Am J Vet Res 57:1382, 1996. Reports the nearly simultaneous increases in fibrinogen and relaxin beginning between days 26 and 30 in 24 Beagle dogs and the potential to use fibrinogen assay as a pregnancy test between days 30 and 50.
Concannon P, Rendano V: Radiographic diagnosis of canine pregnancy: Onset of fetal skeletal opacity in relation to times of breeding, preovu-latory luteinizing hormone release, and parturition. Am J Vet Res 44:1506, 1983. Reports on a radiographic study for pregnancy diagnosis in 6 pregnant Beagle bitches providing basic information for timing and evaluating radiographs during the last trimester of canine pregnancy.
Eckersall PD, Harvey MJA, Ferguson JM, et al: Acute phase proteins in canine pregnancy (Canis familiaris). J Reprod Fertil Suppl 47:159,1993. Reports on the development and use of an homologous canine C-reactive protein radioimmunoassay and its application to pregnancy testing in dogs, including large increases in 7 dogs during mid-gestation and again after parturition in 3 of the dogs.
England GCW, Allen WE, Porter DJ, et al: Studies on canine pregnancy using B-mode ultrasound: Development of the conceptus and determination of gestational age. J Small Anim Pract 31:324, 1990. Reports on events of pregnancy development (biparietal diameter and trunk diameter) to characterize growth of the concep tus and gestational age in 50 Labrador retrievers, Golden Retrievers and their crosses.
Giinzel-Apel A-R, Hayer M, Mischke R, et al: Dynamics of haemosta-sis during the oestrous cycle and pregnancy in bitches. J Reprod Fertil Suppl 51:185, 1997. Reports on increases in fibrinogen, fibrinogen degradation products, and platelet number at days 30 and 60 of pregnancy in dogs.
Okkens AC, Dieleman SJ, Kooistra HS, et al: Plasma concentrations of prolactin in overtly pseudopregnant Afghan hounds and the
effect of metergoline. J Reprod Fertil Suppl 51:295,1997. Reports on the high plasma concentrations of prolactin and its association with the development and maintenance of pseudopregnancy and the use of metergoline, a serotonin antagonist, to decrease the clinical signs of pseudopregnancy.
Steinetz BG, Goldsmith LT, Harvey HJ, et al: Serum relaxin and progesterone concentrations in pregnant, pseudopregnant, and ovariecto-mized, progestin treated pregnant bitches: Detection of relaxin as a marker of pregnancy. Am J Vet Res 50:68,1989. In this report it is proposed that in bitches both the ovary and placenta secrete relaxin during pregnancy based on hormone sampling of 18 Labrador retrievers.
Thatcher M-J, Shille VM, Buhi WC, et al: Canine conceptus appearance and de novo protein synthesis in relation to the time of implantation. Theriogenology 41:1679, 1994. Report on secretory proteins: canine protein 1 (cPl), cP2, cP4, and cP6 synthesized by the endometrium and de novo by the conceptus. Canine conceptus protein 7 was found to be secreted prior to implantation, only by the blastocyst.
Verstegen JP, Silva LDM, Onclin K, et al: Echocardiographic study of heart rate in dog and cat fetuses in utero. J Reprod Fertil 47:175, 1993. Reports on the heart rates of dog fetuses in utero in 15 bitches monitored from day 19 using real-time B- and M-mode ultra-sonography.
Whitney LF: The diagnosis of pregnancy in the bitch by palpation. Vet Med 31:216, 1936. Descriptive and diagrammatic report of cumulative data on palpation findings from about 20 days after fertilization in different breeds of dogs.
Yeager AE, Concannon PW: Association between the preovulatory luteinizing hormone surge and the early ultrasonographic detection of pregnancy and fetal heart beats in Beagle dogs. Theriogenology 34:655, 1990. Report on the size of the gesta tional sac and embryonic mass, and the embryonic heart beat examined by ultrasound from day 16 to 25 of pregnancy in 15 Beagle bitches.
Yeager AE, Mohammed HO, Meyers-Wallen V, et al: Ultrasonographic appearance of the uterus, placenta, fetus, and fetal membranes throughout accurately timed pregnancy in Beagles. Am J Vet Res 53:342, 1992. Reports on the serial ultrasonographic examinations performed on 8 Beagle bitches from 20 to 60 days pregnant to determine time of first detection, appearance and sizes of selected features (gestational sac, uterine wall, embryo position, fetal membranes, embryo and fetal characteristics, and relative size and relationships) of pregnancy.
Использование релаксина сыворотки крови для диагностики беременности у сук
Бернард Г. Стейнец
Лора Т. Голдсмит
Майкл К. Браун
Джордж Ласт
Пока не существует недорогостоящих и удобных способов ранней диагностики беременности у сук после вязки или искусственного осеменения. Схема секреции половых гормонов, эстрогена, прогестерона и гипофизарного гона-дотропина одинакова при истинной и ложной беременности. У сук не продуцируется плацентарный гонадотропин (хорионный гонадотропин - хГТ), наподобие того, что используется для диагностики беременности у людей. Следовательно, владельцы племенных сук должны выбирать дорогостоящие процедуры, такие как УЗИ, для определения беременности суки после планового осеменения либо в случае нежелательной вязки. С другой стороны, им приходится ждать, пока плоды не вырастут настолько, чтобы обнаружить их при пальпации матки. Благодаря этим методам можно диагностировать беременность на 4-5-й и 9-й неделе беременности соответственно.
Мы нашли, что 6-kD полипептидный гормон релаксин является специфическим маркером беременности у сук (Steinetz et al., 1987; 1989). Благодаря радиоиммунно-му анализу (РИА) или иммуно-ферментному анализу (ИФА) релаксин можно обнаружить в крови после имплантации оплодотворенных яйцеклеток, что происходит на 19-21-й день после вязки {Hoist and Premister, 1971). Это совпадает с нашими предположениями, что релаксин секретируется плацентой {Steinetz et al, 1990). Он никогда не появляется в крови у сук с ложной беременностью, что позволяет точно дифференцировать истинную и ложную беременность {Steinetz et al., 1987; 1989).
Пока не существует коммерческих наборов для иммунного анализа релаксина у собак, однако мы описываем наши методики анализа релаксина для диагностики беременности. Примененные материалы и методы описаны в различных источниках {Bullesbach and Schwab, 1991; Rodbard, 1974; Sherwood, 1994; Steinetz et al., 1996).
Недавно РИА и ИФА начали применять для определения релаксина в исследовательских лабораториях. Для быстрого и удобного использования ИФА в целях определения релаксина нужны новые исследования, так что это вопрос ближайшего будущего. Для установления самого раннего срока беременности, когда концентрация релаксина в крови становится определимой, были исследованы семь сук трех различных пород, у которых было точно зафиксировано время вязки. У сук брали серийные образцы крови (1-2 мл) через день, начиная с проэструса и в течение всей беременности до родов. После образования кровяного сгустка и центрифугирования сыворотку собирали и замораживали до проведения анализа. Показатели овуляции: пик концентрации лютеинизирующего гормона (ЛГ) оценивали специфическим ИФА (набором IGG Status-LG или количественным IGG LG EIA), а рост концентрации прогестерона — специфическим РИА {International Canine Genetics Biomedicals). Сук искусственно осеменяли в момент роста концентрации прогестерона. Данные по изменению концентрации релаксина фиксировали с момента пика ЛГ до родов. При обычных тестах на беременность образцы крови (1-2 мл) берут через 25 дней после зафиксированной копуляции или предполагаемой вязки. На момент вязки пик ЛГ и рост концентрации прогестерона оценивали при помощи РИА или ИФА, а определение релаксина проводили на 23-26-й день после пика ЛГ. Обычно для тестов на беременность мы брали сыворотку, но можно использовать и плазму крови.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Сывороточную концентрацию релаксина определяли при помощи РИА в последовательной серии образцов крови, которые брали у семи сук, начиная с проэструса и в течение всей беременности (рис. 1). По данным был построен график по шкале десятичных логарифмов, который демонстрирует самое раннее определение релаксина за 42-38 дней до родов. При помощи РИА у всех сук появление релаксина было зафиксировано на 22-27-й день после выброса Л Г, при помощи ИФА определение релаксина у трех сук было произведено на 1-2 дня раньше (таблица 1).
Таблица 1. Время от выброса лютеинизирующего гормона (ЛГ) до появления в сыворотке релаксина после вязки
| Собаки (имена) | Дни от выброса ЛГ до первого появ ления релаксина, определенного РИА * | Дни от выброса ЛГ до родов |
| С948 | 26 | 67 |
| Поли | 27 | 67 |
| АЗЗ | 24 | 64 |
| А53 | 24-27 | 63-65 |
| А14 | 23-25 | 66 |
| В62 | 22-25 | 65 |
| Анубис | 24-26 | 66 |
"Поскольку невозможно было ежедневное взятие образцов крови в момент выброса ЛГ и появления релаксина, то цифры даны в пределах. У Поли, АЗЗ и А53 релаксин был выявлен на один день раньше при помощи ИФА, и в один день — остальных сук при помощи РИА.
Метод оказался чувствительным и специфичным с хорошим совпадением результатов при анализе более чем 300 образцов крови, взятых у собак различных пород без ложноположителышх результатов даже при использовании больших объемов крови (300—400 мкл). Релаксин никогда не находили в крови кобелей или сук с ложной беременностью. Релаксин присутствовал в крови и молоке в период лактации (Goldsmith et ей,., 1994) различные промежутки времени, но это физиологическое состояние в корне отличалось от ранней беременности. Неожиданное отсутствие релаксина в сыворотке также является показателем вероятности спонтанного выкидыша (Steinetz et al., 1996).
Тесты на релаксин для ранней диагностики беременности являются недорогостоящим и удобным методом, который позволяет быстро определить результат желательной или нежелательной вязки, поэтому скоро он станет надежным диагностическим инструментом в руках ветеринарных врачей.
Литература
Bullesbach ЕЕ, Schwabe С: Total synthesis of human relaxin and human relaxin derivatives by solid-phase peptide synthesis and site-directed chain combination. J Biol Chem 266:10754, 1991. First practical synthesis of relaxin molecule.
Goldsmith LT, Lust G, Steinetz BG: Transmission of relaxin from lac-tating bitches to their offspring via suckling. Biol Reprod 50:258, 1994. Shows presence of relaxin in serum and milk of lactating bitches and transmission of relaxin to suckling pups.
Hoist PA, Phemister RD: The prenatal development of the dog: Preimplantation events. Biol Reprod 5:194, 1971. Establishes the time of implantation of fertilized eggs in bitches.
Rodbard D: Statistical quality control and routine data processing for radioimmunoassays and immunoradiometric assays. Clin Chem 20:1255,1974. Classic paper on data analysis for radioimmunoassays.
Sherwood OD: Relaxin. In: Knobil E, Neill JD, eds: The Physiology of Reproduction, 2nd ed. New York: Raven Press, 1994, p 861. Contains excellent review of methods for extraction and purification of relaxin, including yields to be expected.
Steinetz BG, Btillesbach ЕЕ, Goldsmith LT, et al: Use of synthetic canine relaxin to develop a rapid homologous radioimmunoassay. Biol Reprod 54:1252,1996. Describes and validates the homologous canine relaxin radioimmunoassay.
Steinetz BG, Goldsmith LT, Harvey HJ, et al: Serum relaxin and progesterone concentrations in pregnant, pseudopregnant, and ovariectomized, progestin-treated pregnant bitches: Detection of relaxin as a marker of pregnancy. Am J Vet Res 50:68, 1989. Establishes sources of secretion of relaxin in pregnant bitches.
Steinetz BG, Goldsmith L, Hasan S, et al: Diurnal variation of serum progesterone, but not relaxin, prolactin, or estradiol-17p in the pregnant bitch. Endocrinology 127:1057,1990. Shows that the pla centa is the primary source of relaxin during pregnancy in bitches.
Steinetz BG, Goldsmith LT, Lust G: Plasma relaxin levels in pregnant and lactating dogs. Biol Reprod 37:719,1987. Relaxin is present in the serum of pregnant, but not pseudopregnant, bitches.
Бесплодие у сук
Дженис Л. Кейн
Репродуктивный анамнез сук подразделяют по следующим категориям: (1) персистирующий анэструс, (2) патология астрального цикла, (3) неудача естественной вязки и (4) явное нарушение оплодотворения. В данной статье, представленной вашему вниманию, даны рекомендации по оценке сук в любой момент астрального цикла. Мероприятия по оценке бесплодия практически те же, что применяются для получения оптимальной плодовитости. После первоначальной оценки во все последующие фазы астрального цикла нужно проводить определенные мероприятия, чтобы помочь владельцу получить желаемый приплод от его собаки.
АНЭСТРУС У СУК
В идеале суку с бесплодием или трудным зачатием в анамнезе нужно обследовать в момент анэструса. Это дает время на выполнение всех диагностических процедур и планирование вязки. Также рекомендуется осмотр ранее не вязанной суки перед вязкой. Если вязка была неудачной, то суку вновь обследуют во время анэструса (проводят все те же диагностические процедуры и планируют вязку).
Обследование суки
Для оценки состояния здоровья суки необходимы полный анамнез и тщательный общий осмотр. Любые заболевания могут вызывать репродуктивные нарушения. Нужно точно определить интервал между течками. Аномальным считается интервал меньше 4,5 месяцев и больше 10 месяцев. Короткий интервал практически не оставляет времени на инволюцию эндометрия после трофического действия прогестерона во время диэструса. Длинные интервалы наблюдаются у сук со скрытыми заболеваниями, хотя некоторые суки с длинными и неустойчивыми интервалами были плодовитыми. Во время анэструса также можно пересмотреть все ситуации до вязки и подготовиться к ней. Плодовитость племенных кобелей должна быть оценена соответственно.
Обследование влагалища
Пальпация влагалища у суки и оценка анатомических структур являются составной частью общего осмотра и сущностью заключения о репродуктивном статусе суки. Частыми нарушениями являются вульварный или пред-дверно-влагалищный стеноз и влагалищная перегородка. Их устраняют хирургическим путем во время анэструса (Wykes and Soderberg, 1983). Даже без седации суки спокойно переносят вагиноскопию, которая нужна для проверки правильности анатомического строения половых путей. При вагиноскопии также можно заметить новообразования влагалища и вагинит. Для сук всех пород, кроме декоративных, используют жесткий проктоскоп с инсуффляцией, а для сук весом меньше 5-8 кг - отоскоп.
