Методика проведения исследования

ЭНТЕРОтест 24 - на каждую исследуемую культуру один трехрядный стрип, рамка для ЭНТЕРОтест 24, стерильный физиологический раствор (рН 6,5-7,2), диагностические полоски ОКСИ-тест, реактивы для тестов индол, фенилаланин, ацетоин, оксидаза, парафиновое масло и стандарт мутности первой степени по шкале МсFarland.

Выделение культуры и приготовление бактериальной суспензии. Используют чистую культуру грамотрицательных бактерий со среды Эндо, агара МасСоnkеу или кровяного агара. Ставят тест на ферментацию глюкозы (О/F-тест) на среде Хью-Лейфсона для установления принадлежности выделенной культуры к группе ферментирующих микроорганизмов и тест на оксидазу для дифференциации энтеробактерий от вибрионов и других оксидазоположительных культур. Готовят суспензию в физиологическом растворе мутностью, соответствующей стандарту, указанному выше.

Инокуляция и инкубация

Приготовленную суспензию инокулируют по 0,1 мл во все 24 лунки соответствующего стрипа. После инокуляции в лунки Н, G, F, Е, D и С первого ряда стрипа (тесты: индол, сероводород, лизин, орнитин, уреаза, аргинин соответственно) добавляют по две капли парафинового масла. Инкубируют инокулированную пластинку в термостате в течение 18-24 часов при температуре 35-37 °С.

Учет результатов и идентификация

По окончании инкубации добавляют реактивы в следующие лунки: ряд 1-й, лунка Н (тест индол) - две капли реактива на индол; ряд 3-й, лунка Н (тест ацетоин) - по одной капле реактива ВПТ 1 и ВПТ 2. Пластинку дополнительно инкубируют 30 минут при температуре 35-37 °С. Через 30 минут в лунку Н второго ряда стрипа (тест фенилаланин) добавляют одну каплю реактива на фенилаланин и немедленно учитывают результат этого теста, так как цвет положительной реакции может исчезнуть через 2 минуты. Учитывают результаты всех тестов и заносят их в бланк.

При оценке ЭНТЕРОтест 24 ориентируются по таблице «Интерпретация реакций», цветной шкале и/или по цветным реакциям контрольных штаммов.

Таблица 2 - Интерпретация реакций

Колонка	Тест	Код	Результат (цветовая реакция)
			Положительный	Отрицательный
Ряд 1-й
Н	Индол	IND	Красная, розовая	Желтоватая
G	Сероводород	Н₂S	Черная, темно-серая	Бесцветная, светло-серая
F	Лизин	LYS	Синяя, сине-зеленая	Зеленая, желто-зеленая
Е	Орнитин	ORN	Синяя, сине-зеленая	Зеленая, желто-зеленая
D	Уреаза	URЕ	Красная, оранжево-красная	Желтая, бледно-оранжевая

Колонка	Тест		Код	Результат (цветовая реакция)
				Положительный	Отрицательный
С	Аргинин		АRG	Синяя, сине-фиолетовая	Зеленая, зелено-синяя
В	Цитрат Симмонса		SСI	Синяя, сине-зеленая	Желтая, желто-зеленая
А	Малонат		МАL	Синяя, сине-зеленая	Желтая, желто-зеленая
Ряд 2-й
Н	Фенил ала-нил		РНЕ	Темно-зеленая, зеленая	Желтая, желто-коричневая
G	Бета-галак-тозидаза		ONP	Желтая, бледно-желтая	Бесцветная
F	Инозитол		INО	Желтая, желто-зеленая	Зеленая
Е	Адонитол		АDО	Желтая, желто-зеленая	Зеленая
D	Целлобиоза		СЕL	Желтая, желто-зеленая	Зеленая
С	Сахароза		SUC	Желтая, желто-зеленая	Зеленая
B	Трегалоза		ТRЕ	Желтая, желто-зеленая	Зеленая
А	Маннитол		МАN	Желтая, желто-зеленая	Зеленая
Ряд 3-й
Н	Ацетоин		VРТ	Красная, розовая	Бесцветная, бледно-розовая
G	Эскулин		ЕSL	Черная, темно-коричневая	Бесцветная, светло-коричневая
F	Сорбитол		SOR	Желтая, желто-зеленая	Зеленая
Е	Рамноза		RНА	Желтая, желто-зеленая	Зеленая
D	Мелибиоза		МLВ	Желтая, желто-зеленая	Зеленая
Колонка		Тест	Код	Результат (цветовая реакция)
				Положительный	Отрицательный
С		Раффиноза	RАF	Желтая, желто-зеленая	Зеленая
В		Дульцит	DUL	Желтая, желто-зеленая	Зеленая
Л		Глюкоза	GLU	Желтая, желто-зеленая	Зеленая

Идентификацию проводят с помощью идентификационной таблицы или книги кодов для ЭНТЕРОтест 24. При окончательной идентификации учитывают всю дополнительную информацию: микроскопию, О/F-тест, оксидазную активность, характер колоний, наличие пигмента, подвижность, источник выделения и т. д.