Дополнительно к планшетам ММТ-Е1 и Е2 необходимы стерильная дистиллированная вода, реактивы для тестов: фенилаланин, индол, нитраты, стерильное вазелиновое масло и отечественный стандарт мутности на 10 единиц.
Выделение культуры и приготовление бактериальной
суспензии. Используют чистую культуру грамотрицательных палочек со среды Эндо или кровяного агара. Ставят тест на ферментацию глюкозы (О/F-тест) на среде Хью-Лейфсона для установления принадлежности выделенной культуры к группе ферментирующих микроорганизмов и тест на оксидазу для дифференциации энтеробактерий от вибрионов и других оксидазоположительных культур. Готовят суспензию в стерильной свежеприготовленной дистиллированной воде (при хранении рН воды снижается, что может повлиять на результаты биохимических реакций). Конечная мутность суспензии должна соответствовать указанному выше стандарту.
Инокуляция планшетов и их инкубация
Приготовленную суспензию инокулируют по 0,15 мл в каждую лунку соответствующих горизонтальных рядов планшетов. После инокуляции в лунки №1,3, 4, 5, 7 (тесты: сероводород, лизин, индол, орнитин, уреаза соответственно) планшета ММТ-Е1 и в лунку № 1 (аргинин) планшета ММТ-Е2 добавляют по две капли вазелинового масла. Планшеты инкубируют в течение 18-24 часов при температуре 35-37 °С.
Учет результатов и идентификация
По окончании инкубации добавляют реактивы в следующие лунки: ММТ-Е1 - № 4 - две капли реактива на индол, № 10 - одну каплю реактива на фенилаланин; ММТ-Е2 - № 12 - реактивы на нитраты: одну каплю раствора соляной кислоты и затем одну каплю раствора риванола.
Учитывают результаты планшетных тестов визуально с помощью таблицы «Интерпретация реакций» и заносят их в бланки (учет результатов теста на бета-галактозидазу проводят дважды: через 3-5 часов и через 18-24 часа, так как у некоторых штаммов желтое окрашивание к конечному сроку инкубации исчезает).
Таблица 1 - Интерпретация реакций
| № п/п | Тест | Код | Результат (цветовая реакция) | |||
|
| Положительный | Отрицательный | ||||
| ММТ-Е1 | ||||||
| 1 | Образование сероводорода | Н2S | Черная, темно-серая | Бесцветная, светло-серая | ||
| 2 | Утилизация маннитола | МАН | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| 3 | Наличие лизиндекарбоксилазы | ЛИЗ | Синяя, сине-зеленая | Желтая, зеленая | ||
| 4 | Образование индола | ИНД | Розовая, розовато-коричневая | Бесцветная | ||
| 5 | Наличие орнитин-декарбоксилазы | ОРН | Синяя, сине-зеленая | Желтая, зеленая | ||
| 6 | Утилизация цитрата натрия | ЦИТ | Синяя, сине-зеленая | Желтая, зеленая | ||
| 7 | Наличие уреазы | УРЕ | Малиновая, розовая | Желтая | ||
| 8 | Утилизация мало-ната натрия | МАЛ | Синяя, сине-зеленая | Желтая, зеленая | ||
| 9 | Утилизация сахарозы | САХ | Желтая, оранжевая | Красная | ||
|
|
| |||||
| Тест п/п | Результат (цветовая реакция) | |||||
|
| Код | Положительный | Отрицательный | |||
| 10 | Наличие дезаминазы фенилаланина | ФЕН | Зеленая, темно-зеленая | Желтая | ||
| 11 | Утилизация лактозы | ЛАК | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| 12 | Утилизация сорбитола | СОР | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| ММТ-Е2 | ||||||
| 1 | Наличие аргининдегидролазы | АРГ | Синяя, сине-зеленая | Желтая, зеленая | ||
| 2 | Наличие бета-галактозидазы | ГАЛ | Желтая | Бесцветная | ||
| 3 | Утилизация инозитола | ИНО | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| 4 | Утилизация дульцитола | ДУЛ | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| 5 | Утилизация арабинозы | АРА | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| 6 | Утилизация рамнозы | РАМ | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| 7 | Утилизация мальтозы | МАТ | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| 8 | Утилизация адонитола | АДО | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| 9 | Утилизация раффинозы | РАФ | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| 10 | Утилизация салицина | САЛ | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| 11 | Утилизация глюкозы | ГЛЮ | Желтая, оранжевая | Красная | ||
| 12 | Наличие нитратредуктазы | НИТ | Темно-бордовая, бордовая | Желтая, оранжевая | ||
Идентификацию проводят с помощью таблиц «Биохимическая характеристика энтеробактерий» с учетом данных микроскопии, характера роста, О/F-теста, оксидазной активности, подвижности, наличию пигмента, источника изоляции и др.
Применение микротест-систем ЭНТЕРОтест 24
ЭНТЕРОтест 24 предназначен для определения биохимической активности и идентификации наиболее важных для патологии человека и животных микроорганизмов семейства энтеробактерий и дифференциации их от некоторых представителей семейства вибрионов в течение 18-24 часов. Система представляет собой стриппированный планшет, содержащий четыре трехрядных вертикальных стрипа для определения 24 биохимических тестов: индол, сероводород, лизин, орнитин, уреаза, аргинин, цитрат Симмонса, малонат натрия, фе-нилаланин, бета-галактозидаза, инозитол, адонитол, целлобиоза, сахароза, трегалоза, маннитол, ацетоин (реакция Фогеса-Проскауэ-ра), эскулин, рамноза, сорбитол, мелибиоза, раффиноза, дульцитол, глюкоза. Набор ЭНТЕРОтест 24 содержит 10 пластинок и позволяет провести идентификацию 40 культур.
