Микробиологический диагноз заболеваний, вызываемых менингококками.

 

Микробиологическая диагностика: Материал для исследо­вания - кровь, спинномозговая жидкость, носогло­точные смывы.

Бактериоскопический метод – окраска мазков из ликвора и крови по Граму для определения лейкоцитарной формулы, выявления менингококков и их количества. Наблюдают полинуклеарные лейкоциты, эритроциты, нити фибрина, менингококки – грам «-», окружены капсулой.

Бактериологический метод – выделение чистой культуры. Носоглоточная слизь, кровь, ликвор. Посев на плотные, полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь. Культуры инкубируют в течение 20 ч. При 37С с повышенным содержанием СО₂.Оксидазаположительные колонии – принадлежат в данному виду. Наличие N.meningitidis подтверждают образованием уксусной кислоты при ферментации глк. и мальтозы. Принадлежность к серогруппам – в реакции агглютинации (РА).

Серологический метод – используют для обнаружения растворимых бактериальных АГ в ликворе, или АТ в сыворотке крови. Для обнаружения АГ применяют ИФА,РИА. У больных, перенесших менингококк – в сыворотке специфические АТ: бактерицидные, аггютинины, гемаггютинины.

8. Гонококки, характеристика морфологических, культуральных и биохимических свойств. Методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых го­нококками.

Гонорея — инфекционное заболевание человека, вызываемое гонококком и характеризующееся воспалительным пораже­нием преимущественно слизистых оболочек мочеполовых органов.

Возбудитель — Neisseria gonorrhoeae - кокк, имеющий сходство с кофейным зерном или почкой, располагается парами, вогнутые стороны клеток обращены друг к другу. Размеры 0,7—0,8, иногда 1,25—1,60 мкм. При электронно-микроскопическом исследовании вокруг гонококка обнаруживают слизистое капсулоподобное образование толщиной 0,35—0,40 мкм, благодаря ему кокки не соприка­саются между собой: между ними сохраняется щель. Гонококки грамотрицательны, они хорошо воспринимают основные анилиновые красители. Для окрашивания препаратов из гонорейного гноя чаще используют метиленовый синий, так как при этом лучше выявляется бобовидная форма гонококков, а для отличия от других сходных диплококков обязательна окраска по Граму. Гонококки не имеют жгутиков, капсул, спор и пигмента не образуют.

На мясо-пептонном агаре они растут плохо, лучше размножаются на средах, содержащих сыворотку, асцитическую жидкость или кровь. Гемолиза не вызывают. Для роста гонококков необходимо наличие в среде железа. Добавление к плотным питательным средам крахмала, холестерола, альбумина или частичек угля способствует росту, а добавление ионов Са⁺⁺ повышает жизнеспособность. Оптимальная температура для роста 35—36 С, оптимальная рН 7,2—7,6. Гонококки — строгие аэробы, но при первичных посевах лучше вырастают при некотором повы­шении содержания С0₂.

Вирулентные для человека гонококки, выде­ленные от больных острой гонореей, обладают пилями и образуют мелкие, в виде капель, блестящие колонии, обозначаемые как Т1 и Т2. Колонии больших размеров, плоские и тусклые (Т3 и Т4), образуют невирулентные и не содержащие пилей гоно­кокки.

Из углеводов гонококки ферментируют только глюкозу с образованием кис­лоты без газа.

 

Методы диагностики: бактериоскопический — материалом для исследования является гнойное отделяемое уретры, влагалища, шейки матки, предстательной железы и других органов, пораженных, гонококком, а также осадок и нити мочи. Как правило, мазки окрашивают по Граму и метиленовым синим. Гонококки обна­руживают по трем характерным для них признакам: грамотрицательная окраска, бобовидные диплококки, внутриклеточное расположение.

Для обна­ружения гонококков в мазке применяют также метод прямой и непрямой иммуно­флуоресценции.

Нередко при хронической гонорее в мазках обнаруживают гонококки типа Аша: клетки диплококка имеют неодинаковую величину и форму. В таких случаях используют бактериологичес­кий метод. С этой целью исследуемый материал засевают на специальные пита­тельные среды. Выделенную культуру идентифицируют с учетом характерных для гонококка признаков. Следует учитывать, что если в мазках из гнойного материала гонококки окрашивались по Граму положительно, то в мазках из вы­росшей культуры у них восстанавливается грамотрицательная окраска. Все гоно­кокки в 24-часовой культуре имеют почти одинаковую величину, форму дипло­кокков или кокков, но через 72—96 ч культура становится полиморфной и клетки окрашиваются по Граму неравномерно. При хронической гонорее для диагности­ки могут быть использованы РСК или аллергическая кожная проба со специаль­ным гонококковым аллергеном.

КИШЕЧНЫЕ ИНФЕКЦИИ

1. Острые диарейные заболевания. Их возбудители. Плазмиды, определяющие адге­зивные и токсигенные свойства диареегенных кишечных палочек. Программа ВОЗ по борьбе с острыми диарейными заболеваниями, основные принципы их терапии.

Острые бактериальные кишечные инфекции — диареи — относятся к числу наиболее распространенных болезней. Их возбудителями являются многие виды бактерий, но наиболее часто — представители семейства Enterobacteriaceae.

Семейство насчитывает более 30 родов и более 100 видов. Наиболее важными для человека являются роды: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Salmonella, Erwinia, Serratia, Edwardsiella, Shigella. Yersinia, Proteus, Morganella, Providencia.

Факторы адгезии и колонизации. Они необходимы для прикрепления к клет­кам ткани и их колонизации. Обнаружено три варианта фактора колонизации:

а) CFA/I-CFA/VI (англ. colonization factor) — они имеют фимбриальную структуру;

б) EAF (англ. enteropathogenic Е. coli adherence factor) — интимин — белок наружной мембраны.

в) Adhesion Henle-407 — фимбриальные структуры, выявляются по способности бактерий прикрепляться к клет­кам Henle-407. Все они кодируются плазмидными генами.

Факторы патогенности Е. coli контролируются не только хромо­сомными генами клетки-хозяина, но и генами, привносимыми плазмидами или уме­ренными конвертирующими фагами. Все это свидетельствует о возможности воз­никновения патогенных вариантов Е. coli в результате распространения среди них плазмид и умеренных фагов.

2. Микрофлора воды. Роль воды в распространении возбудителей инфекционных бо­лезней. Понятие о коли-титре и коли-индексе.

Микрофлора воды отражает микробный состав почвы, так как микроорганизмы, в основном, попадают в воду с ее частичками. В воде формируются определенные биоцено­зы с преобладанием микроорганизмов, адап­тировавшихся к условиям местонахождения, освещен­ности, степени растворимости кислорода и диоксида углерода, содержания органических и минеральных веществ.

В водах пресных водоемов обнаруживаются различные бактерии: палочковидные (псевдо­монады, аэромонады), кокковидные (мик­рококки) и извитые. Загрязнение воды органи­ческими веществами сопровождается увеличе­нием анаэробных и аэробных бактерий, а также грибов. Микрофлора воды выполняет роль активного фактора в процессе самоочищения ее от органических отходов, которые утилизируют­ся микроорганизмами. Вместе с сточными водами попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, цитробактер, энтеробактер, энтеро­кокки, клостридии) и возбудители кишечных инфекций (брюшного тифа, паратифов, дизен­терии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций). Таким образом, вода является фактором передачи возбудителей многих инфек­ционных заболеваний.

Коли-индекс - число особей кишечной палочки, обнаруживаемое в 1 л; определяется путем подсчета колоний кишечной палочки, выросших на плотной питательной среде при посеве определенного количества исследуемого материала, с последующим пересчетом на 1 л (кг).

Коли-титр - это наименьшее количество исследуемого материала, в котором обнаружена одна кишечная палочка. Для определения коли-титра раздельно засевают на жидкие среды десятикратно уменьшающиеся объемы исследуемого материала.

Для перевода коли-титра в коли-индекс следует 1000 разделить на число, выражающее коли-титр; для перевода коли-индекса в коли-титр 1000 разделить на число, выражающее коли-индекс.

Предельно допустимые величины, напр., для питьевой воды составляют: коли-индекс не более 3 бактерий в 1 л; коли-титр не менее 300 мл.

3. Семейство кишечных бактерий. Общая характеристика семейства, состав, прин­ципы классификации. Использование тест-систем для ускоренной идентификации возбудителей кишечных инфекций.

Острые бактериальные кишечные инфекции — диареи — относятся к числу наиболее распространенных болезней. Их возбудителями являются многие виды бактерий, но наиболее часто — представители семейства Enterobacteriaceae.

1) единство морфологии — короткие, не образующие спор палочки с закруглен­ными концами, подвижные (перитрихи) или неподвижные, не образующие или об­разующие капсулы;

2) отрицательная окраска по Граму;

3) ферментация глюкозы (и ряда других углеводов) с образованием кислоты и газа или только кислоты;

4) отсут­ствие, как правило, протеолитических свойств;

5) факультативные анаэробы или аэробы;

6) хорошо растут на обычных питательных средах;

7) место обитания — ки­шечный тракт и дыхательные пути;

8) фекально-оральный (в некоторых случаях - воздушно-капельный) путь заражения;

9) отсутствие цитохромоксидазы;

10) каталазопозитивны;

11) восстанавливают нитраты в нитриты;

12) хемоорганотрофы;

 

Семейство насчитывает более 30 родов и более 100 видов. Наиболее важными для человека являются роды: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Salmonella, Erwinia, Serratia, Edwardsiella, Shigella. Yersinia, Proteus, Morganella, Providencia.

 

Для дифференциации родов используют в основном биохимические признаки. Каждый род представляет собой компактную группу бактерий со сходны­ми биохимическими свойствами. В свою очередь деление на виды внутри родов так­же производят по биохимическим признакам и с учетом степени гомологии ДНК между представителями данного вида и у бактерий, представляющих разные виды.

В общей сложности для дифференциации родов и видов семейства используют бо­лее 40 различных признаков, в том числе: ферментация глюкозы, маннита, лактозы, сахарозы, рамнозы, образование H₂S, индола, рост на голодной среде с цитратом на­трия, гидролиз мочевины, декарбоксилирование орнитина, дегидрирование аргини­на, дезаминирование фенилаланина, подвижность, образование ацетоина при фер­ментации глюкозы (реакция Фогеса—Проскауэра), проба с метиловым красным (MR) и др.

Большое значение для классификации внутри родов и видов имеет изучение ан­тигенного строения.

В основу серологической классификации энтеробактерий поло­жено изучение их О-, Н- и К-антигенов.

 

Лучше всего для идентификации и дифференциации возбудителей ОКЗ (всех категорий) использовать тест-системы ПЦР (Полимеразная цепная реакция)

ПЦР имитирует естественный процесс репликации (размножения) ДНК, в результате чего, в течение нескольких часов из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 50 млрд. идентичных молекул. Таким образом, можно изучить генетический материал, присутствующий в крошечных количествах.

4. Кишечная палочка, ее характеристика. Антигенное строение. Заболевания, вы­зываемые кишечной палочкой. Санитарное значение кишечной палочки.

Основной представитель рода Escherichia — Е. coli - перитрихи (или неподвижные), ферментируют лак­тозу с образованием кислоты и газа (или лактозонегативны), на голодной среде с цитратом не растут, реакция Фогеса—Проскауэра отрицательна, проба с MR поло­жительна, не имеют фенилаланиндезаминазы, не растут на среде с KCN.

Культуральные свойства. Е. coli — факультативный анаэроб, хорошо растет на обычных питательных средах — колонии на агаре круглые, выпуклые, полупрозрач­ные. Рост на бульоне в виде диффузного помутнения. Температурный оптимум для роста 37 С, растет в диапазоне от 10 до 45 °С, оптимальная рН 7,2—7,5. На всех дифференциально-диагностических средах колонии Е. coli. разлагающей лактозу, окрашены в цвет индикатора (на среде Эндо - темно-малиновые с металлическим блеском).

Биохимические свойства. Кишечная палочка способна ферментировать следующие углеводы с образованием кислоты и газа: глюкозу, лак­тозу, маннит, арабинозу, галактозу, иногда сахарозу и некоторые другие углеводы; образует индол; как правило, не образует H2S; восстанавливает нитраты в нитриты, не разжижает желатин, не растет на голодной среде с цитратом, дает положительную реакцию с MR и отрицательную — Фогеса-Проскауэра.

 

Антигенное строение.

Существует 164 группы по О-антигену и 55 серовариантов по Н-антигену.

Антигенная характеристика диареегенных E.coli включает в себя номера О- и Н-антигенов, на­пример, 055:116; 0157:Н7; О-антиген означает принадлежность к определенной серо- группе, а Н-антиген — ее серовариант. Всего в список диареегенных Е. coli включено 43 О-серогруппы и 57 ОН-серовариантов.

 

Е. coli используется в международных стандартах как показатель степени фекального загрязнения воды, особенно питьевой, и пищевых продуктов.

 

Диареегенные серотипы кишечной палочки, их категории (группы). Особенности антигенного строения. Факторы патогенности, их генетический контроль. Бактериологическая диагностики заболеваний, вызываемых диареегенными серотипами кишечной палочки.

Антигенное строение.

Существует 164 группы по О-антигену и 55 серовариантов по Н-антигену.

Антигенная характеристика диареегенных E.coli включает в себя номера О- и Н-антигенов, на­пример, 055:116; 0157:Н7; О-антиген означает принадлежность к определенной серогруппе, а Н-антиген — ее серовариант. Всего в список диареегенных Е. coli включено 43 О-серогруппы и 57 ОН-серовариантов.

 

Факторы патогенности Е. coli. Способность Е. coli вызывать различные заболе­вания обусловлена наличием у нее следующих факторов патогенности:

1) Факторы адгезии и колонизации. Они необходимы для прикрепления к клет­кам ткани и их колонизации.

Все они кодируются плазмидными генами.

2) Экзотоксины. У патогенных Е. coli обнаружены экзотоксины, повреждающие мембраны (гемолизин), угнетающие синтез белка (токсин Шига).

а) Гемолизин — порообразующий токсин.

б) Токсин Шига (STX) Синтез цитотоксинов STX-1 и STX-2 контролируется у Е. coli генами умеренных конвертирующих профагов.

Эндотоксины-липополисахариды. Они определяют антигенную специфич­ность бактерий (которая детерминируется повторяющейся боковой цепочкой сахаров) и форму колоний (утрата боковых цепочек приводит к превращению S-колоний в R-колонии).

Таким образом, факторы патогенности Е. coli контролируются не только хромо­сомными генами клетки-хозяина, но и генами, привносимыми плазмидами или уме­ренными конвертирующими фагами. Все это свидетельствует о возможности воз­никновения патогенных вариантов Е. coli в результате распространения среди них плазмид и умеренных фагов.

 

ЕТЕС включает 17 серогрупп.

EIEC включает 9 серогрупп,

ЕРЕС. Группа включает 9 серогрупп класса 1 и четыре серогруппы класса 2.

ЕНЕС.

Микробиологическая диагностика. Основной метод — бак­териологический. Определяют вид чистой культуры (грамотрицательные палочки, оксидазоотрицательные, ферментирующие глю­козу и лактозу до кислоты и газа, образующие индол, не образую­щие сероводород) и принадлежность к серогруппе, что позволяет, отличить условно-патогенные кишечные палочки от диареегенных. Внутривидовая идентификация, имеющая эпидемиологичес­кое значение, заключается в определении серовара с помощью диагностических адсорбированных иммунных сывороток.