Медицинская экология микроорганизмов. Санитарно - бактериологическая оценка объектов окружающей среды, пищевых продуктов.

 

План занятий:

1. Идентификация выделенной чистой культуры побиохимическим свойствам, учет чувствительности к антибиотикам.

2. Природные микробиоценозы. Экологические среды микробов.

3. Санитарно-показательные бактерии, их характеристика.

4. Определение микробного числа воздуха по методу Коха и с помощью аппарата Кротова.

5. Методы санитарно-бактериологической оценки воды: определение коли-титра, коли-индекса бродильным методом и с помощью мембранных фильтров. Определение микробного числа и коли-фагов.

6. Определение микробной обсемененности кожи рук и предметов обихода методом смывов.

 

ВВОДНЫЕ ЗАМЕЧАНИЯ

Микроорганизмы распространены повсюду. Большинство их в естественных условиях находятся в определенных взаимоотношениях друге другом. В окружающую среду патогенные бактерии попадают от больных, бактерионосителей и находятся там в течение определенного времени. В связи с этим санитарно-бактериологические исследования направлены на изучение и оценку различных объектов в целях определения их эпидемиологической безопасности. Методы проведения санитарно-микробиологических исследований предусматривают определение общей микробной обсемененности (ОМЧ), определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов, выявление в исследуемых объектах патогенных микробов и их метаболитов.

Непосредственное обнаружение патогенных микроорганизмов, как правило, затруднено из-за их малого количества, в связи с чем используются косвенные методы выявления микробной обсемененности постоянно сопутствующих патогенным бактериям санитарно-показательных микробов. ОМЧ расценивается как показатель интенсивности загрязнения окружающей среды органическими веществами.

Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов в окружающей среде. Облигатные микробы кишечника и дыхательных путей являются санитарно-показательными; обнаружение на объектах окружающей среды E.coli. E.faecalis свидетельствует об их фекальном загрязнении. Выделение S.aureus из воздуха свидетельствует о его дыхательно-капельном загрязнении. Содержание санитарно-показательных бактерий оценивается по титру и индексу.

Цель занятия:

1. Изучить методы и показатели, необходимые для санитарно-бактериологической оценки объектов окружающей среды.

Учебно-целевые задачи:

Знать:

1. Природные микробиоценозы. Экологические связи в микробиоценозах.

2. Экологические среды микробов: микрофлора почвы, воды, воздуха, пищевых продуктов, бытовых и производственных объектов и ее роль в распространении инфекционных болезней.

3. Принципы санитарно-микробиологических исследований. Индикация патогенных микробов в объектах окружающей среды, косвенные методы: определение ОМЧ и санитарно-показательных микроорганизмов: бактерий группы кишечной палочки (БГКП), клостридий, стрептококков, стафилококков.

 

Уметь:

1. Проводить оценку санитарно-бактериологического состояния воздуха, воды, почвы, пищевых продуктов и смывов по микробиологическим тестам.

 

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Санитарно-бактериологическая оценка объектов окружающей среды (ООС).

Санитарно-микробиологическое состояние почвы оценивается на основании сопоставления количества термофильных бактерий и бактерий – показателей фекального загрязнения. Почвы с преобладанием санитарно-показательных бактерий расцениваются как санитарно-неблагополучные, загрязненные фекалиями человека и животных. Присутствие в почве E.coli и E.faecalis указывает на свежее, а Clostridium perfringens – на давнее фекальное загрязнение. Более точная оценка проводится с помощью определения коли-индекса – количество БГКП, или т.н.колиформных бактерий,обнаруженных в 1 г почвы; перфрингенс-титра – масса почвы (в граммах), в которой обнаружена 1 микробная клетка Clostridium perfringens; общей численности сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий в 1 г почвы.

Санитарно-микробиологическое состояние воды оценивается по: 1). микробному числу – количеству мезофильных хемоорганотрофных бактерий в 1 мл воды; 2). коли-титру – наименьшему объему воды (мл), в котором обнаруживаются БГКП; 3). коли-индексу - количеству БГКП в 1 л воды; 4). Наличию спор сульфитредуцирующих бактерий и цист лямблий.

Санитарно-микробиологическое состояние воздуха закрытых помещений оценивают по: 1). микробному числу – количесву колонеобразующих единиц (КОЕ), обнаруживаемых в 1 м³ воздуха; 2).наличию санитарно-показательных бактерий – представителей микрофлоры дыхательных путей (золотистый стафилококк, гемолитический стрептококк).

Санитарно-микробиологическая оценка пищевых продуктов включает определение 1). микробного числа и 2).санитарно-показательных микроорганизмов (БГКП); 3). патогенных возбудителей.

Микрофлора воздуха. Нормативы.

Чистый воздух зимой: ОМЧ не более 4500, гемолитических стрептококков – до 35;

Грязный воздух зимой: ОМЧ более 7000, гемолитических стрептококков – более 70.

Нормативные показатели микробной обсемененности воздуха в помещениях больницы

Операционные	ОМЧ	Золотистый стафилококк (в 250 л)
до начала работы	не более 500	не допускается
во время работы	не более 1000	не допускается
родильные комнаты	не более 1000	не допускается
палаты для недоношенных детей	не более 750	не допускается

 

Санитарно-бактериологическое исследование воздуха проводится седиментационным и аспирационным методами. Седиментационный метод по Коху заключается в том, что чашки Петри со средой оставляют открытыми на 5-10 минут на общую обсемененность и не менее 40 минут на обсемененность патогенной кокковой микрофлорой. Засеянные чашки инкубируют 24 часа в термостате и столько же при комнатной температуре. Количество выросших колоний соответствует степени загрязненности воздуха. На площадь 100 кв.см в течение 5 минет оседает столько бактерий, сколько их содержится в 10 л воздуха.

Аспирационный метод - более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью аппарата Кротова или других современных аспираторов. Аспиратор устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.

Микрофлора воды.

Микробиологические и паразитологические показатели для питьевой воды

Показатели	Единицы измерения	Нормативы
Термотолерантные колиформные бактерии (440С)	Число бактерий в 100 мл	Отсутствие
Общие колиформные бактерии (370С)	Число бактерий в 100 мл	Отсутствие
Общее микробное число	Число образующих колонии бактерий в 1 мл	Не более 50
Коли-фаги	Число бляшкообразующих единиц (БОЕ)	Отсутствие
Споры сульфитредуцирующих клостридий	В 100 мл число спор в 20 мл	Отсутствие
Цисты лямблий	Число цист в 50 мл	Отсутствие

 

Метод мембранных фильтров.

Мембранный фильтр помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Воду фильтруют в объеме 300 мл. Затем фильтры помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри и после инкубации при 37⁰С в течение суток подсчитывают количесиво выросших колоний, типичных для БГКП.

Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде. Для этого фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-п-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет. 2-3 колонии, не изменившие первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5% раствором глюкозы. Посевы инкубируют в течение суток при 37⁰С. При наличии газообразования подсчитывают число красных колоний на фильтре и определяют коли-индекс.

 

Метод бродильной пробы.

1-й день. Воду в объеме 100 мл берут 3 пробы, 10 мл (3 пробы) засевают соответственно на 10 мл и 1 мл концентрированной среды ГПС (глюкозопептонная среда) или ЛПС (лактозопептонная среда). 1 мл воды (3 пробы) засевают на 10 мл разведенной среды ГПС с «поплавками». Посевы инкубируют при 37⁰С 24 часа.

2-й день. Из всех объемов воды, независимо от результатов (кислота – газ), делают пересев на две чашки со средой Эндо (одна – с добавлением раствора основного фуксина или раствора разоловой кислоты, другая – с добавлением молока или желатина – для обнаружения протеолиза. Посевы инкубируют при 37⁰ С.

3-й день. С чашек из каждого засеянного объема отбирают 2-3 лактозоположительные, протеолизоотрицательные, оксидазоотрицательные, грам-отрицательные палочки и отвивают на полужидкий агар с глюкозой и индикатором Андреде или бромтимоловым синим (укол в столбик). Посевы инкубируют 20 часов при 37⁰С.

4-й день. Производят учет результатов. Определяют, какой объем воды на полужидком агаре с глюкозой дает образование кислоты и газа, и делают расчет коли-титра и индекса по таблице ГОСТа 48963-73.

Микробное число определяют при посеве 1мл исследуемой воды. Оксидаз ный тест позволяет отбросить оксидазоположительные колонии (псевдомонады, аэромонады, вибрионы и др.). Микроскопия мазков из колоний позволяет исключить грамположительиую споровую флору и шаровидные бактерии. Окисление глюкозы, лактозы до кислоты и газа при 37°С подтверждает принадлежность бактерий к кишечной группе.