Определение биодоступности in vitro для мягких ЛС на примере метода диффузии в агаровый гель.

Агаровый гель готовится 2% концентрации в предварительно тарированном стеклянном или эмалированном сосуде, плотно закрытом крышкой. Изрезанный агар заливается очищенной водой и оставляется на 30 минут для набухания. Набухший агар нагревается до кипения, доводится до необходимой массы и к теплому гелю добавляется 5% реактива Эрлиха состава: п-диметиламинобензальдегида 0,5г, кислоты хлористоводородной концентрированной и этанола 95% по 15мл и н-бутанола - 90мл.

Приготовленный таким образом агаровый гель разливается в чашки Петри с горизонтальной поверхностью дна (d=98-100мм, h=20мм), которые выставляются на столе, предварительно выверенном по горизонтальному уровню с помощью ватерпаса. Агар разливается в чашки двумя порциями по 10 и 15мл. После застывания агара (первой порции) на ее поверхность, в каждую чашку помещаются три металлических цилиндра (из нержавеющей стали или стекла с наружным диаметром 8мм и высотой до 10мм), и заливается второй слой агара. После застывания агара цилиндрики осторожно вынимаются. И в образовавшиеся углубления (колодцы) помещаются исследуемые образцы мази.

Определение скорости высвобождения лекарственных веществ из мази

Мази, содержащие лекарственное вещество с различной степенью дисперсности, помещают в лунки двух чашек с агаром. Чашки нумеруют или указывают степень измельчения. Мазь в лунки переносят с помощью стеклянной палочки, осуществляя контроль за тем, чтобы был хороший контакт с агаром. Мази с плотной или вязкой консистенцией перед использованием следует тщательно растирать или выдержать 30 минут при температуре 30ºС. Чашки помещают в термостат с температурой 37ºС.

Лекарственное вещество высвобождается из мази, диффундирует в агаровый гель, образуя с реактивом окрашенную зону. Через 1-2-3 часа, с помощью линейки (лучше - штангенциркуля) измеряют диаметр окрашенной зоны. В случае необходимости (при образовании эллипса) измеряют больший и меньший диаметр, и определяют среднее значение диаметра окрашенной зоны. Полученные результаты записывают в дневник и подвергают математико-статистической обработке.

Определение биодоступности in vitro для мягких ЛС на примере метода диализа через полупроницаемую мембрану

Часто определяют в приборе Л.Крувчинского. В термостатируемые стаканы (ёмкостью 100-500 мл) помещают 30 мл воды очищенной (в качестве сред используют воду очищенную, изотонический раствор натрия хлорида и др.), температура которой 37±0,5°С.

Исследуемое количество мази (0,5г) наносят равномерным слоем на внутреннюю поверхность пленки тубуса прибора (диализной трубки, длиной 15 см с площадью сечения 10 см². С одного конца трубка закрыта диализной мембраной. В качестве полупроницаемой перегородки чаще всего используют не лакированную целлофановую плёнку, а также яичную оболочку, слепую кишку ягнѐнка, брюшину рогатого скота и т. д.. Наружная поверхность целлофана контактирует с жидкой средой, а на внутреннюю поверхность наносится навеска исследуемой мази). Тубус погружают на 1мм в среду растворителя, подготовленный прибор помещают в термобаню (37°С). Отбор проб диализата по 1 мл производят с помощью пипетки через равные промежутки времени (15 мин.) в трех повторностях на протяжении 60мин с немедленным восполнением взятого количества в термостатируемые стаканы. Определяем содержание действующего вещества по следующей методике: аликвоту 5 мл фильтруем через двойной бумажный фильтр и измеряем оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при определенной длине волны в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве контрольного раствора применяем воду очищенную. Параллельно проводим измерение оптической плотности раствора стандартного образца.