Пед. ф-т, 2006
ЗАНЯТИЕ 36
Тема: Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции.
Цель: на основе знаний особенностей биологии вируса иммунодефицита человека, особенностей его взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику лабораторной диагностики, профилактику ВИЧ-инфекции.
Знать:
1. Классификацию, морфобиологические особенности ВИЧ.
2. Источники инфекции, особенности патогенеза и иммунитета при ВИЧ-инфекции.
3. Материалы и методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции.
4. Профилактику и терапию ВИЧ-инфекции.
Уметь:
1. Учитывать и оценивать результаты ИФА на ВИЧ-инфекцию.
2. Учитывать и оценивать результаты иммунного блотинга на ВИЧ-инфекцию.
Контрольные вопросы:
1. Классификация вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).
2. Морфология, антигенное строение, культивирование, резистентность ВИЧ.
3. Источники инфекции, пути передачи, особенности патогенеза и иммунитета при ВИЧ-инфекции.
4. Материалы и методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции.
5. Особенности лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.
6. Профилактика и терапия ВИЧ-инфекции на современном этапе.
7. Профилактика передачи ВИЧ от матери ребенку.
Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):
1. Провести диагностику ВИЧ-инфекции:
1.1. Учесть и оценить результаты ИФА на ВИЧ-инфекцию с сыворотками обследуемых.
Наметить план дальнейшего обследования.
1.2.Учесть и оценить результаты метода иммунного блотинга с сыворотками обследуемых, давших положительный результат в ИФА.
2. Провести диагностику ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей:
2.1. Учесть и оценить результаты метода иммунного блотинга с сыворотками обследуемых детей.
3. Ознакомиться с тест-системой ИФА для диагностики ВИЧ-инфекции.
Методические указания к выполнению исследовательского задания:
I. Проведите диагностику ВИЧ-инфекции, для чего:
1.1. Учтите и оцените результаты ИФА на ВИЧ-инфекцию с сыворотками обследуемых:
- А, В, С – наркоманы, использующие внутривенное введение наркотиков;
- D – лицо, занимающееся коммерческим сексом;
- Е – беременная женщина;
- F – подросток, 13 лет;
- G, Н – контроли (К+, К-).
Наметьте план дальнейшего обследования.
ИФА применяется для скрининга донорской крови и в диагностических целях для выявления противовирусных антител к ВИЧ. В основе ИФА, используемого для серодиагностики ВИЧ-инфекции, лежит способность анти-ВИЧ взаимодействовать с вирусным антигеном, предварительно адсорбированным в лунках полистироловой панели. При этом образуется комплекс антиген-антитело, который на следующем этапе выявляется добавлением антивидовой противочеловеческой сыворотки, меченной пероксидазой. Образование желто-коричневого продукта при последующем добавлении субстрата (ортофенилендиамина-ОФД) свидетельствует о положительной реакции.
Контроли: ИФА с сывороткой, заведомо содержащей анти-ВИЧ (К+) и с сывороткой, заведомо не содержащей анти-ВИЧ (К-).
В случае положительного результата ИФА обязательным является повторное проведение ИФА с другой тест-системой.
1.2. Учтите и оцените результаты метода иммунного блотинга с сыворотками обследуемых, давших положительный результат в ИФА.
Для верификации положительных результатов ИФА используют метод иммунного блотинга, принцип которого заключается в выявлении антител к определенным белкам вируса. Для этого вирусные белки с помощью электрофореза разделяют по молекулярной массе и переносят на нитроцеллюлозную полоску, которую обрабатывают сывороткой обследуемого. Образующиеся иммунные комплексы выявляют с помощью ИФА. Специфичность полос на иммуноблоте оценивается в соответствии с результатами исследования контрольной положительной сыворотки, которое проводится параллельно с исследованием опытных проб.
По рекомендациям Российского научно-методического центра по профилактике и борьбе со СПИДом положительным считается результат при наличии антител к двум из белков gp41, gp120, gp160 (геном ENV) при наличии или отсутствии антител к другим специфическим белкам ВИЧ: р24, р40, р55; р17 (геном GAG); р32, р51, р66 (геном POL).
| ИНТЕРПРЕТАЦИЯ | ПРОФИЛЬ |
| Положительный | 2 ENV ± GAG ± POL |
| Неопределенный | 1 ENV ± GAG ± POL или GAG + POL или GAG или POL |
| Отрицательный | Нет специфических полос; Полосы вообще отсутствуют |
Положительный результат иммунного блотинга при наличии соответствующих эпидемиологических и клинических данных свидетельствует о ВИЧ-инфекции. Сообщить пациенту диагноз имеет право только лечащий врач, желательно в присутствии психотерапевта.
На основании полученных результатов сделайте вывод, заполните бланк-направление и бланк-ответ из серологической лаборатории.
2. Проведите диагностику ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей:
2.1. Учтите и оцените результаты метода иммунного блотинга с сыворотками обследуемых детей.
Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, имеет свои особенности. Материнские антитела класса IgG могут циркулировать в крови ребенка до 15 месяцев, а синтез собственных антител затягиваться до 9 и более месяцев, поэтому определение суммарных антител к ВИЧ у детей до года не является диагностически значимым. Выявление у ребенка IgМ и IgА к ВИЧ позволяет выявить инфицированность, но отрицательный результат не может свидетельствовать об отсутствии ВИЧ. В настоящее время используется также определение динамики уровня антител к определенным белкам ВИЧ с помощью иммунного блотинга.
С целью уменьшения времени верификации возможно использование ПЦР для определения РНК ВИЧ и ИФА для определения p24. Но в любом случае дети ВИЧ-инфицированных матерей подлежат лабораторно-диагностическому обследованию и наблюдению в течение 18 месяцев от рождения.
На основании полученных результатов сделайте вывод, заполните бланк-направление и бланк-ответ из серологической лаборатории.
