Тема: Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции.

Пед. ф-т, 2006

ЗАНЯТИЕ 36

Тема: Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции.

Цель: на основе знаний особенностей биологии вируса иммунодефицита человека, особенностей его взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику лабораторной диагностики, профилактику ВИЧ-инфекции.

Знать:

1. Классификацию, морфобиологические особенности ВИЧ.

2. Источники инфекции, особенности патогенеза и иммунитета при ВИЧ-инфекции.

3. Материалы и методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции.

4. Профилактику и терапию ВИЧ-инфекции.

Уметь:

1. Учитывать и оценивать результаты ИФА на ВИЧ-инфекцию.

2. Учитывать и оценивать результаты иммунного блотинга на ВИЧ-инфекцию.

Контрольные вопросы:

1. Классификация вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).

2. Морфология, антигенное строение, культивирование, резистентность ВИЧ.

3. Источники инфекции, пути передачи, особенности патогенеза и иммунитета при ВИЧ-инфекции.

4. Материалы и методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции.

5. Особенности лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.

6. Профилактика и терапия ВИЧ-инфекции на современном этапе.

7. Профилактика передачи ВИЧ от матери ребенку.

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):

1. Провести диагностику ВИЧ-инфекции:

1.1. Учесть и оценить результаты ИФА на ВИЧ-инфекцию с сыворотками обследуемых.

Наметить план дальнейшего обследования.

1.2.Учесть и оценить результаты метода иммунного блотинга с сыворотками обследуемых, давших положительный результат в ИФА.

2. Провести диагностику ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей:

2.1. Учесть и оценить результаты метода иммунного блотинга с сыворотками обследуемых детей.

3. Ознакомиться с тест-системой ИФА для диагностики ВИЧ-инфекции.

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

I. Проведите диагностику ВИЧ-инфекции, для чего:

1.1. Учтите и оцените результаты ИФА на ВИЧ-инфекцию с сыворотками обследуемых:

- А, В, С – наркоманы, использующие внутривенное введение наркотиков;

- D – лицо, занимающееся коммерческим сексом;

- Е – беременная женщина;

- F – подросток, 13 лет;

- G, Н – контроли (К+, К-).

Наметьте план дальнейшего обследования.

ИФА применяется для скрининга донорской крови и в диагностических целях для выявления противовирусных антител к ВИЧ. В основе ИФА, используемого для серодиагностики ВИЧ-инфекции, лежит способность анти-ВИЧ взаимодействовать с вирусным антигеном, предварительно адсорбированным в лунках полистироловой панели. При этом образуется комплекс антиген-антитело, который на следующем этапе выявляется добавлением антивидовой противочеловеческой сыворотки, меченной пероксидазой. Образование желто-коричневого продукта при последующем добавлении субстрата (ортофенилендиамина-ОФД) свидетельствует о положительной реакции.

Контроли: ИФА с сывороткой, заведомо содержащей анти-ВИЧ (К+) и с сывороткой, заведомо не содержащей анти-ВИЧ (К-).

В случае положительного результата ИФА обязательным является повторное проведение ИФА с другой тест-системой.

1.2. Учтите и оцените результаты метода иммунного блотинга с сыворотками обследуемых, давших положительный результат в ИФА.

Для верификации положительных результатов ИФА используют метод иммунного блотинга, принцип которого заключается в выявлении антител к определенным белкам вируса. Для этого вирусные белки с помощью электрофореза разделяют по молекулярной массе и переносят на нитроцеллюлозную полоску, которую обрабатывают сывороткой обследуемого. Образующиеся иммунные комплексы выявляют с помощью ИФА. Специфичность полос на иммуноблоте оценивается в соответствии с результатами исследования контрольной положительной сыворотки, которое проводится параллельно с исследованием опытных проб.

По рекомендациям Российского научно-методического центра по профилактике и борьбе со СПИДом положительным считается результат при наличии антител к двум из белков gp41, gp120, gp160 (геном ENV) при наличии или отсутствии антител к другим специфическим белкам ВИЧ: р24, р40, р55; р17 (геном GAG); р32, р51, р66 (геном POL).

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ	ПРОФИЛЬ
Положительный	2 ENV ± GAG ± POL
Неопределенный	1 ENV ± GAG ± POL или GAG + POL или GAG или POL
Отрицательный	Нет специфических полос; Полосы вообще отсутствуют

Положительный результат иммунного блотинга при наличии соответствующих эпидемиологических и клинических данных свидетельствует о ВИЧ-инфекции. Сообщить пациенту диагноз имеет право только лечащий врач, желательно в присутствии психотерапевта.

На основании полученных результатов сделайте вывод, заполните бланк-направление и бланк-ответ из серологической лаборатории.

2. Проведите диагностику ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей:

2.1. Учтите и оцените результаты метода иммунного блотинга с сыворотками обследуемых детей.

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, имеет свои особенности. Материнские антитела класса IgG могут циркулировать в крови ребенка до 15 месяцев, а синтез собственных антител затягиваться до 9 и более месяцев, поэтому определение суммарных антител к ВИЧ у детей до года не является диагностически значимым. Выявление у ребенка IgМ и IgА к ВИЧ позволяет выявить инфицированность, но отрицательный результат не может свидетельствовать об отсутствии ВИЧ. В настоящее время используется также определение динамики уровня антител к определенным белкам ВИЧ с помощью иммунного блотинга.

С целью уменьшения времени верификации возможно использование ПЦР для определения РНК ВИЧ и ИФА для определения p24. Но в любом случае дети ВИЧ-инфицированных матерей подлежат лабораторно-диагностическому обследованию и наблюдению в течение 18 месяцев от рождения.