Стом. ф-т, 2006
ЗАНЯТИЕ 26
Тема: Лабораторная диагностика гриппа.
Цель: на основе знаний биологии вирусов гриппа, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику лабораторной диагностики, профилактику и терапию, вызываемых ими заболеваний.
Знать:
1. Классификацию, морфобиологическую характеристику вирусов гриппа.
2. Экологию, особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при гриппе.
3. Материал и методы лабораторной диагностики гриппа.
4. Специфическую профилактику и терапию гриппа.
Уметь:
1. Вскрывать зараженный куриный эмбрион, проводить индикацию вируса.
2. Поставить, учитывать и оценивать РГА, РТГА с целью диагностики гриппа.
Контрольные вопросы:
1. Классификация, морфобиологическая характеристика и антигенное строение вируса гриппа.
2. Особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при гриппе.
3. Эволюция вируса гриппа на современном этапе.
4. Лабораторная диагностика гриппа (риноцитоскопия, вирусологический и серологический методы, экспресс-диагностика).
5. Специфическая профилактика и терапия гриппа.
Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):
1. Провести вирусологическое исследование с целью диагностики натуральной оспы:
1.1. Вскрыть куриный эмбрион, зараженный материалом от обследуемого с диагнозом «натуральная оспа»; провести индикацию вируса (макроскопически, микроскопически при импрегнации серебром). Сделать вывод.
2. Провести вирусологическое исследование с целью диагностики гриппа:
2.1. Поставить, учесть и оценить результаты РГА с амниотической жидкостью, полученной из куриных эмбрионов, зараженных носоглоточным смывом больного с диагнозом «ОРВИ, грипп?»
2.2. Поставить, учесть и оценить результаты РТГА с амниотической жидкостью и типовыми гриппозными сыворотками.
На основании полученных результатов сделать заключение, заполнить бланк-направление и бланк-ответ из вирусологической лаборатории.
3. Биопрепараты: типовые гриппозные сыворотки, гриппозные диагностикумы; живые, убитые, субъединичные, субвирионные гриппозные вакцины, противогриппозный иммуноглобулин, интерферон.
Методические указания к выполнению исследовательского задания:
I. Проведите вирусологическое исследование с целью диагностики натуральной оспы (начало исследования см. протокол занятия №25), для чего:
1.1. Вскройте куриный эмбрион, зараженный материалом от обследуемого с диагнозом «натуральная оспа»; проведите индикацию вируса (макроскопически, микроскопически при импрегнации серебром).
Перед вскрытием скорлупу над воздушной камерой обработайте дезинфектантом (70% спирт), стерильными ножницами срежьте ее на 2-3 мм выше границы воздушной камеры. Пинцетом снимите белковую оболочку и подрежьте ножницами ХАО на границе с воздушной камерой. Содержимое эмбриона аккуратно вылейте в стерильную чашку Петри, а ХАО извлеките пинцетом в отдельную стерильную чашку Петри с физ. раствором, промойте, перенесите в чашку Петри с новым физ. раствором, расправьте и изучите макроскопически.
Если в исследуемом материале (содержимом везикул) имелся вирус натуральной оспы, то на ХАО через 72 ч инкубирования эмбрионов обнаруживаются мелкие, диаметром около 1 мм, белые, плотные, резко ограниченные бляшки.
При отсутствии следов поражения результаты исследования считаются отрицательными.
Для микроскопического исследования содержимого бляшек приготовьте препарат. Для этого ножницами вырежьте кусочек ХАО, поместите на предметное стекло и разотрите с помощью второго предметного стекла. Препараты высушите на воздухе и окрасьте по Морозову.
Техника окраски по Морозову:
1. Налить реактив №1 – фиксатор (жидкость Руге) на 1-3 минуты, тщательно промыть водой.
2. Налить реактив №2 – раствор танина, нагреть до отхождения паров, остудить, тщательно промыть водой.
3. Налить реактив №3 – раствор нитрата серебра, нагреть до отхождения паров, остудить и тщательно промыть водой.
Высушить и микроскопировать с иммерсионной системой. В случае положительного результата в препарате выявляют тельца Пашена.
Для серологической идентификации полученной культуры вируса используют центрифугат суспензии ХАО и диагностическую сыворотку. Идентификацию проводят в реакции нейтрализации (РН), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и РПГА.
На основании полученных результатов сделайте заключение, заполните бланк-направление и бланк-ответ из вирусологической лаборатории.
II. Проведите вирусологическое исследование с целью диагностики гриппа, для чего:
2.1. Поставьте, учтите и оцените результаты РГА с амниотической жидкостью, полученной из куриных эмбрионов, зараженных носоглоточным смывом больного с диагнозом «ОРВИ, грипп?»
Материалом для выделения культуры вируса при вирусологическом методе служат смывы из носоглотки, которые обрабатывают антибиотиками и центрифугируют. Надосадочную жидкость используют для заражения куриных эмбрионов в амниотическую полость, которые инкубируют при температуре 36–37° С.
Для индикации вируса поставьте РГА с эритроцитами I (0) группы крови человека, которые чувствительны к гемагглютинирующему действию вируса гриппа (см. таблицу №1).
Таблица 1
