Педиатрия
ЗАНЯТИЕ 23
Тема: Микробиологическая диагностика бруцеллеза.
Цель: На основе знаний биологии бруцелл, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновывать тактику микробиологической диагностики, специфическую профилактику и терапию бруцеллеза.
Знать:
1. Правила работы с возбудителями особо опасных инфекций.
2. Классификацию, морфо-биологические особенности возбудителей бруцеллеза.
3. Особенности экологии, эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при бруцеллезе.
4. Материал и методы микробиологической диагностики бруцеллеза.
5. Специфическую профилактику и терапию бруцеллеза.
Уметь:
1. Провести экспресс-диагностику бруцеллеза (РИФ).
2. Провести серо-аллергическую диагностику бруцеллеза.
Контрольные вопросы:
1. Критерии принадлежности бруцеллеза к группе особо опасных инфекций. Правила ТБ при работе с бруцеллами, как возбудителями ООИ.
2. Классификация и морфо-биологические особенности возбудителей бруцеллеза.
3. Особенности экологии, эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при бруцеллезе.
4. Материал и методы микробиологической диагностики бруцеллеза.
5. Специфическая профилактика и терапия бруцеллеза.
Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):
1. Учесть и оценить результаты РИФ с синовиальной жидкостью обследуемого с подозрением на бруцеллез и люминесцирующей бруцеллезной сывороткой. Сделать заключение.
2. Провести серо-аллергическую диагностику бруцеллеза:
2.1.Поставить, учесть и оценить результаты реакции Хеддлсона с сыворотками обследуемых.
2.2.Учесть и оценить результаты реакции Райта с сыворотками тех же обследуемых.
2.3.Учесть и оценить результаты кожно-аллергической пробы Бюрне (см. муляж).
3. Изучить и описать биопрепараты: живая бруцеллезная вакцина, лечебная бруцеллезная вакцина, бруцеллин, люминесцирующая бруцеллезная сыворотка, бруцеллезный диагностикум.
4. Контрольная работа: зоонозные инфекции (чума, туляремия, бруцеллез, сибирская язва).
Методические указания к выполнению исследовательского задания:
I. Учтите и оцените результаты РИФ с синовиальной жидкостью обследуемого с подозрением на бруцеллез и люминесцирующей бруцеллезной сывороткой.
Бруцеллез характеризуется многообразием клинических проявлений. Среди поражений доминируют нарушения опорно-двигательного аппарата, нервной и половой систем.
С целью экспресс-диагностики заболевания из исследуемого материала (синовиальной жидкости, пунктата костного мозга, СМЖ и др.) готовят препараты, которые изучают с помощью РИФ. Обнаружение в исследуемом материале светящихся мелких палочек или коккобактерий является основанием для предварительного диагноза «бруцеллез».
Бруцеллез относится к группе ООИ, поэтому исследование, предусматривающее работу с возбудителем, проводится только в специальных лабораториях.
II. Проведите серо-аллергическую диагностику бруцеллеза:
В обычной бактериологической лаборатории основой микробиологической диагностики бруцеллеза являются серологический и аллергический методы.
Серологический метод при бруцеллезе включает комплекс серологических реакций: РА, РНГА, РСК, РИФн, р. Кумбса, ОФР. Из вышеперечисленных реакций широко используется РА в 2-х модификациях: РА на стекле (р. Хеддлсона) и РА в развернутом ряду (р. Райта).
РА Хеддлсона используется при массовых обследованиях. Преимущества этой реакции заключаются в простоте ее постановки, быстроте получения результата, высокой чувствительности и специфичности. Чувствительность реакции обусловлена тем, что ее ставят с неразведенной сывороткой и концентрируемым диагностикумом. Это дает возможность выявлять специфические антитела, находящиеся в сыворотке в низких титрах. Для определения титра антител и динамики их накопления реакцию агглютинации проводят объемным методом в пробирках.
Аллергизация организма при заболевании бруцеллезом позволяет использовать аллергический метод (в/к проба Бюрне).
При этом разная степень информативности этих методов при острых и хронических формах, в разные периоды заболевания определяет большую диагностическую ценность комплексной серо-аллергической диагностики.
2.1. Поставьте, учтите и оцените результаты реакции Хеддлсона с сыворотками обследуемых.
Методика постановки: обезжиренное предметное стекло размером 9х12 см расчерчивают на 6 квадратов. В первом квадрате записывают номер сыворотки; в последующие квадраты вносят ингредиенты согласно таблице 1.
Таблица 1.
Схема постановки РА Хеддлсона
| № пп | Ингредиент, мл | К в а д р а т | ||||
| 4 (КС) | 5 (КА) | |||||
| 1. | Физ. раствор | - | - | - | 0,03 | 0,03 |
| 2. | Сыворотка | 0,04 | 0,02 | 0,01 | 0,02 | - |
| 3. | Диагностикум | 0,03 | 0,03 | 0,03 | - | 0,03 |
Примечание: физ. раствор, а затем сыворотка вносятся микропипеткой, диагностикум – пастеровской пипеткой.
Содержимое квадратов перемешивают, аккуратно покачивая стекло. Затем стекло равномерно подогревают над пламенем спиртовки до 37° около 2 мин. Стекло необходимо держать высоко над пламенем, чтобы капли не высыхали.
Критерии учета: в случае положительной реакции в первые же минуты появляются хлопья голубого или фиолетового цвета, т. к. бруцеллезный диагностикум окрашен метиленовой синькой или генцианвиолетом. Степень выраженности реакции должна быть не менее ++. Максимальный срок наблюдения 8 мин.
Критерии достоверности: в КС и КА должна отсутствовать спонтанная агглютинация.
Критерии оценки:
- отсутствие агглютинации со всеми дозами сыворотки – результат отрицательный;
- положительная агглютинация с дозой сыворотки 0,04 мл – результат сомнительный;
- положительная агглютинация с дозами сыворотки 0,02-0,01 мл – результат положительный;
- положительная агглютинация на 4 креста со всеми дозами сыворотки – результат резко положительный.
Для диагностики бруцеллеза имеет значение только положительный и резко положительный результаты. В этом случае РА ставится в развернутом ряду (р. Райта).
2.2. Учтите и оцените результаты реакции Райта с сыворотками тех же обследуемых.
Реакция Райта ставится с разведениями сыворотки обследуемого и бруцеллезным диагностикумом, разведенным 1:10. Пробирки термостатируют при 37°С в течение 24 ч. Учет осуществляют по обычной схеме (см. занятие № 10). Диагностический титр реакции равен 1:200. При отрицательном или сомнительном результатах рекомендуется через 7-10 дней повторить реакцию.
Реакция Райта может быть положительной не только у больных, но у вакцинированных и переболевших, поэтому для определения инфекционной природы антител проводится исследование парных сывороток. Нарастание титра антител в 2 и более раз является достоверным серологическим подтверждением заболевания бруцеллезом.
2.3. Учтите и оцените результаты кожно-аллергической пробы Бюрне (см. муляж).
Обследуемому в / к вводят в область предплечья 0,1 мл бруцеллина. Учет реакции проводят через 24 и 48 ч, отмечая при этом размер папулы в см (длина и ширина), наличие гиперемии и болезненности по следующей схеме:
- папула отсутствует – отрицательная реакция;
- папула не больше 1х1 см – сомнительная реакция;
- папула размером 1х1-2,5х2,5 см – слабо положительная реакция;
- папула размером 3х3-4х4 см – положительная реакция;
- папула размером 6х6 см – резко положительная реакция.
При оценке результатов необходимо учитывать, что она может быть положительной не только у больных, но у переболевших и вакцинированных.
На основании полученных результатов реакций Хеддлсона, Райта и пробы Бюрне с учетом клинических и эпидемиологических данных сделайте вывод и заполните бланк-направление и бланк-ответ из лаборатории.
III. Ознакомьтесь и опишите в протоколе биопрепараты, указав, что они содержат, для чего и как применяются.
IV. При подготовке к контрольной работе по теме «Зоонозные инфекции (чума, туляремия, бруцеллез, сибирская язва)» рекомендуется придерживаться следующего плана:
1. Таксономия возбудителя: для бактерий - семейство, род, вид.
2. Характеристика бактериального возбудителя: морфологические, тинкториальные, культуральные, биохимические, антигенные свойства, факторы патогенности, резистентность к различным факторам.
3. Вызываемые заболевания: экология, краткая эпидемиологическая характеристика (источники инфекции, механизм, пути и факторы передачи, восприимчивый коллектив), патогенез, основные клинические проявления, особенности иммунитета.
4. Микробиологическая диагностика: исследуемый материал, применяемые методы диагностики; их обоснование.
5. Специфическая профилактика и терапия (вакцины, сыворотки).
Вопросы для самоконтроля:
1. Назовите основные виды бруцелл, вызывающие бруцеллез. Какой из них является наиболее вирулентным для человека.
2. Назовите и обоснуйте меры предосторожности при работе с возбудителями бруцеллеза или / и материалом от больных бруцеллезом.
3. Обоснуйте необходимость проведения противоэпидемических мероприятий в случае контакта с больными бруцеллезом.
4. Назовите методы микробиологической диагностики, которые можно использовать в обычной лаборатории. В чем их суть?
5. Назовите особенности выделения гемокультуры при бруцеллезе.
6. Тактика проведения неспецифической и специфической профилактики при бруцеллезе для лиц, проживающих в городской местности.
7. Тактика проведения неспецифической и специфической профилактики при бруцеллезе для лиц, проживающих в сельской местности.
Литература:
Учебники:
1. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. – М.: ООО «МИА», 2002. – С. 423-426, 427.
2. Медицинская микробиология / Гл. ред. В. И. Покровский, О. К. Поздеев. – М.: ГЭОТАР Медицина, 1998. – С. 323-329.
3. Поздеев О. К. Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В. И. Покровского. - М.: ГЭОТАР Медицина, 2001. – С. 394-396.
Лекции по микробиологии.
Тесты.
