Отбор проб: аптечную посуду в количестве 3 штук одного объема отбирают в момент приготовления лекарственных форм. Ее доставляют в лабораторию в укупоренном виде, используя пробки и прокладки для отпуска лекарственных средств. Вспомогательный материал (пробки, прокладки и др., по 5 штук) отбирают фламбированным пинцетом в отдельные стерильные флаконы. Флаконы закрывают ватно-марлевыми пробками и бумажными колпачками.
Методика исследования: 1. Определение общего микробного числа – количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных бактерий в 10 см3 (10 мл) смывной жидкости. Три одинаковых флакона последовательно ополаскивают 10 мл стерильной водопроводной воды. Воду из флакона во флакон переливают над пламенем горелки, тщательно ополаскивая каждый флакон. Во флаконы с вспомогательным материалом также наливают по 10 мл стерильной водопроводной воды и тщательно ополаскивают. По 1 мл смывной жидкости вносят в две стерильные чашки Петри и заливают расплавленным и остуженным питательным агаром (метод глубинного посева). Инкубируют при +37°С 24 ч и еще 24 ч при комнатной температуре. Определяют среднее число колоний, выросших на поверхности и в глубине питательного агара и умножают на 10, что соответствует содержанию бактерий на поверхности трех одноименных флаконов или пяти предметах вспомогательного материала.
2. Определение колиформных бактерий. Оставшиеся 8 мл смывной жидкости засевают в 1 мл концентрированной глюкозо-пептонной среды и инкубируют при +37°С 24 часа. Дальнейший ход исследования описан в разделе «Санитарно-микробиологическое исследование дистиллированной воды».
Требования к микробиологической чистоте лабораторной посуды: общее микробное число не должно превышать 150 колонеобразующих единиц (КОЕ) в смыве с 3-х флаконов, с 5-ти пробок, с 5-ти прокладок; присутствие колиформных бактерий не допускаются.
Методика исследования: 1. Общее микробное число и присутствие колиформных бактерий определяют у инъекционных растворов и глазных капель до стерилизации (см. санитарно-микробиологическое исследование воды).
2. Исследование на стерильность. Для контроля стерильности инъекционных растворов, глазных капель и др. лекарственных средств используют метод прямого посева или метод мембранной фильтрации. Материал засевают в асептическом боксе. Перед исследованием флаконы проверяют визуально на целостность укупорки и обрабатывают 3% раствором перекиси водорода или 70% спирта. В предбоксе сотрудники лаборатории тщательно моют руки с мылом, вытирают стерильным полотенцем, надевают стерильные халаты, шапочки, четырехслойные марлевые маски и бахилы. Перед началом работы в боксе руки обрабатывают 70% спиртом. Для работы используют стерильные инструменты. Перед посевом содержимое флаконов встряхивают, а горлышки флаконов обжигают над пламенем горелки.
Метод прямого посева: исследуемый материал засевают по 1 мл в 2 пробирки с 20 мл тиогликолевой среды и 1 пробирку с жидкой средой Сабуро. Тиогликолевую среду инкубируют при +30-35°С, среду Сабуро – при +20-25°С в течение 14 суток. При отсутствии помутнения питательной среды (обычно через 3-7 суток) делают пересев на те же питательные среды. Посевы просматривают в рассеянном свете ежедневно и по окончании периода инкубации. Наличие роста микроорганизмов в питательных средах оценивают визуально по появлению мутности, пленки, осадка и другим признакам. Выявленный рост подтверждают микроскопией мазков, окрашенных по Граму. Испытуемый препарат считают стерильным при отсутствии роста микроорганизмов.
Метод мембранной фильтрации используют для определения стерильности лекарственных средств, обладающих антимикробным действием и лекарственных средств, разлитых объемом более 100 мл. Испытуемый раствор пропускают через один или несколько мембранных фильтров. Фильтр извлекают из установки, разрезают стерильными ножницами пополам, одну половинку помещают во флакон с тиогликолевой средой, другую – со средой Сабуро и инкубируют, как после прямого посева.
Требования к микробиологической чистоте инъекционных растворов и глазных капель: общее микробное число инъекционных растворов до стерилизации должно быть менее 30 КОЕ, глазных капель до 5-7 КОЕ, присутствие колиформных бактерий не допускается. Инъекционные растворы и глазные капли после стерилизации, а также глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильной основе, должны быть стерильными.
