Самым надежным методом микробиологической диагностики сифилиса является обнаружение возбудителя в экссудате или тканевой жидкости из твердого шанкра.

Для этого готовят:

Препарат “раздавленная капля” и рассматривают в темном поле зрения, основной дифференциальный признак – это характер движения, при обнаружении трепонемы дают ответ (возбудитель обнаруживается в 100% случаев). Тушевый мазок сейчас не используют.

Иммунофлюоресцентный метод состоит в обработке мазка из тканевой жидкости или экссудата меченой флюоресцентом противотрепонемной сывороткой и микроскопии его в люминисцентном микроскопе. Выявляются

типичные спирохеты со светящейся оболочкой.

Микроскопия в темном поле и РИФ могут дать положительные результаты и в нелеченных случаях вторичного сифилиса.

Серологический метод позволяет поставить диагноз сифилиса, начиная со 2-4-й недели во все периоды болезни, в том числе в латентную фазу.

Для серодиагностики сифилиса применяют:

1. Реакция Вассермана - это качественная РСК, ее проводят с использованием обычной техники, но в одном разведении сыворотки 1:5, в общем объёме 2,5мл, но сразу с двумя Аг – неспецифическим кардиолипиновым Аг для РСК и специфическим трепонемным Аг. Обязателен контроль сыворотки (б ез Аг) и 3 контроля с заведомо положительной, заведомо слабоположительной и заведомо отрицательной сыворотками.

Результат опыта оценивают как отрицательный, слабоположительный, положительный (сравнивают с контролями сывороток).

Во 2-ом и 3-ем периодах сифилиса RW положительная в 75-90% (серопозитивный сифилис). У новорожденных и грудных детей, больных сифилисом, она отрицательная, у детей с врожденным сифилисом она становится положительной только через 2-3 месяца после рождения.

RW (в совокупности с клиническими данными и осадочными реакциями)

служит методом контроля за качеством лечения. После лечения больных с I и II сифилисом она становится отрицательной через 1,5-2 месяца. При III сифилисе она может длительно (1-1,5 года и более) оставаться положительной.

Реакция Вассермана может быть положительной (неспецифической) при беременности, начиная с 8-го месяца, и после родов, при малярии, туберкулезе, некоторых вирусных и протозойных заболеваниях, лепре, лептоспирозе, новообразованиях, при менструациях, после наркоза, употребления накануне взятия крови спиртных напитков, жирной пищи, лекарств, введении чужеродных сывороток.

Неспецифические положительные RW при повторных исследованиях, которые производят двукратно или троекратно через 10-15 дней, становятся отрицательными.

2. Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном для постановки реакции микропреципитации (методику ее постановки будем изучать на практическом занятии).

3. Количественная РСК – проводится по общей схеме постановки РСК.

4. Из реакций флокуляции (осадочных) ВОЗ рекомендует VDRL(ВДРЛ) – реакция, техника проведения которой заключается в следующем: к каплям цельной или разведенной 1:2, 1:4 и т.д. инактивированной сыворотки обследуемого на предметном стекле добавляют по капле диагностикума из 0,03% кардиолипина, 0,9% холестерина и 0,21% лецитина. Стекло покачивают при комнатной температуре 4-5 мин. Присутствие реагинов в сыворотке вызывает видимую простым глазом флокуляцию. Реакцию оценивают как стандартную и специфическую.

Из современных реакций с Аг из бледной трепонемы рекомендуют реакцию гемагглютинации с бледными трепонемами (ТРНА) и ее микровариант, РИФ – адсорбции со взвесью T.pallidum из яичка кроликов (FTA-ABS), реакцию гемадсорбции в твердой фазе (JgM-SPHA). Все эти реакции оценивают как высокоспецифичные, чувствительные и экономичные.

Реакцию иммобилизации трепонем (РИТ), несмотря на специфичность, в связи с трудоемкостью постановки к применению в широкой практике не рекомендуют (методику см. стр.568 учебника С.А.Павловича, 2005г.)

РИТ- (тест Вильсона - Майера) – принцип в том, что сыворотка больного сифилисом в присутствии комплемента угнетает движение бледных трепонем. Последние получают из яичка кролика, пораженного специфическим орхитом. Яичко размельчают в специальной среде, в которой трепонемы сохраняют свою подвижность. РИТ обладает высокой чувствительностью и остается положительной после выздоровления больного.