Туберкулез - первично-хроническое гранулематозное заболевание, при котором поражаются легкие, кишечник, почки, твердая мозговая оболочка, кости, кожа и другие органы и системы. Чаще всего у людей наблюдается туберкулез легких.
При заражении (инкубационный период 3-8 недель) на месте внедрения возбудителя формируется первичный туберкулезный комплекс (воспалительная или воспалительно-некротическая реакция), который может распространиться и придать болезни различные формы - от легких до тяжелых септических, с поражением различных органов и систем.
Для туберкулезной инфекции характерна реакция ГЗТ, выявляемая внутрикожным введением туберкулина (реакция Манту).
Особенность туберкулеза последних лет - развитие заболевания на фоне хронических вирусных инфекций и вторичных иммунодефицитных состояний, повышение удельного веса остро текущих прогрессирующих форм и диссеминированного туберкулеза.
Главной опасностью указанных форм туберкулеза является рассеивание возбудителя по всему организму, приводящее к трудно диагностируемым, запущенным формам туберкулеза.
Иммунитет.
Устойчивость к туберкулезу у людей высокая и обусловлена многими факторами неспецифической резистентности.
Приобретенный противотуберкулезный иммунитет непрочен, нестерилен и сохраняется только при наличии в организме микобактерий.
Методы микробиологической диагностики туберкулеза.
Материал для исследования: мокрота, промывные воды бронхов и желудка, ликвор, моча, экссудат, отделяемое ран, гной, биопсийный и секционный материал.
Методы лабораторной диагностики:
1.Бактериологический - основной.
2.Микроскопический.
3.Биологический.
4.Кожно-аллергический.
5.Серологический.
6. ПЦР - диагностика
Наиболее надежным признаком диагностики заболевания туберкулезом является обнаружение Mycobacterium tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M.microti) в биологических жидкостях и в биоптатах тканей из очага поражения.
Микроскопический метод.
1.Бактериоскопия мазков, окрашенных по методу Циля-Нильсена, эффективна только при высокой концентрации микобактерий в исследуемом материале. Так, единичные палочки можно обнаружить в препарате, если их содержание не менее 105 в 1 мл мокроты. Поэтому при небольшом содержании БК в материале применяют методы обогащения - гомогенизации и осаждения, или флотации.
Метод гомогенизации и осаждения.
К суточной мокроте добавляют равный объем 1% раствора едкого натра (или антиформина) для гомогенизации, закрыв пробкой. встряхивают во флаконах со стеклянными бусами 10-15 минут. Центрифугируют, нейтрализуют кислотой и из осадка делают мазки.
Метод флотации.
Мокроту гомогенизируют и прогревают при 55°С 30 мин. на водяной бане. Добавляют 1-2 мл ксилола (или бензола, или бензина), дистиллированную воду, повторно встряхивают в течение 10 мин. и отстаивают 20 мин. при комнатной температуре. На поверхности образуется пена, которая состоит из всплывших капелек ксилола с адсорбированными микробами. Пипеткой или петлей из пенообразного слоя приготавливают мазок, несколько раз наслаивая материал на предметное стекло по мере его высыхания. Мазок обзжиривают эфиром, фиксируют и окрашивают по Цилю-Нильсену.
2.Применение люминесцентной микроскопии повышает число находок БК в материале. При этом пользуются объективом х 40 и окуляром х 10. При окраске аурамином БК светятся золотисто-зеленым светом, а при окраске акридином - оранжево-красным.
Примечание. Микроскопическое исследование является ориентировочным и позволяет судить лишь о наличии кислотоустойчивых бактерий в материале без определения видовой и типовой принадлежности.
Бактериологический метод.
Золотым стандартом современной лабораторной диагностики туберкулеза остается бактериологический метод. Внедрение бактериологический метода роста культуры на жидкой селективной среде позволяет получить положительный результат на 7-ой день, отрицательный результат - к 42-ому дню от начала анализа. При положительном результате необходимо выполнить бактериологическую идентификацию вида возбудителя на твердых ростовых средах. В связи с этим бактериологический анализ на микобактерии остается весьма продолжительным лабораторным исследованием.
Материал перед посевом подвергают кислотно-щелочной обработке для уничтожения банальной микрофлоры. Так, к мокроте приливают двойной объем 6% серной кислоты, встряхивают 10 мин. и центрифугируют, а к фекалиям на 3 часа добавляют 4% раствор гидроксида натрия и центрифугируют. Можно обрабатывать материал равным объемом трифосфата ацетилцистеина 20 мин. (пробирку в процессе обработки встряхивают) или 10% раствором тринатрийфосфата при 37°С 20-24 часа.
Полученные осадки нейтрализуют несколькими каплями 3% раствора натрия гидроксида (мокрота) и 8% серной кислоты (фекалии) и перед посевом тщательно отмывают изотоническим раствором натрия хлорида.
После нейтрализации материал засевают в 3-6 пробирок со средой Левенштнйна-Йенсена. Посевы инкубируют при 37°С в течение 4-6 недель (иногда 2-3 месяца). Контролируют каждые 5 дней. Во избежание высыхания ватные пробки пробирок после посева заливают парафином.
Если рост появляется до 5-го дня, дают отрицательный ответ на туберкулез (быстрорастущие микобактерии).
Если рост микобактерий отмечается после 5-7-го дня, проводят идентификацию культуры:
1.Изучают культуральные свойства выделенной культуры (характер роста, форму колоний, образование пигмента).
2.Делают мазок, окрашивают по Цилю-Нильсену, т. е. проверяют однородность культуры.
3.Проводят определение содержания ниацина (синтез никотиновой кислоты), т. е. ниациновый тест (он положительный только у человеческого типа микобактерий).
4.Определяют никотинамидазную активность.
5.Определяют нитратредуктазную активность (восстановление нитратов).
6. Определяют корд-фактор.
7.Ставят биопробу: определяют вирулентность выделенной культуры на морских свинках и кроликах (1-1,5 мл п/к в область паха).
8. Определяют чувствительность выделенной культуры к противотуберкулезным препаратам методом разведений (абсолютных концентраций) на плотных средах (среде Левенштейна-Йенсена).
