Материалы и методы исследования

Проспективное исследование

Всемирный журнал гастроэнтерологии. Фев 14, 2015; 21(6): 1915-1926

Оnline публикация Фев 14, 2015. doi: 10.3748/wjg.v21.i6.1915

Инфекция Цитомегаловируса человека и вируса Эпштейн-Барра при воспалительных заболеваниях кишечника: необходимость измерения вирусной нагрузки слизистой оболочки

Rachele Ciccocioppo, Francesca Racca, Stefania Paolucci, Giulia Campanini, Lodovica Pozzi, Elena Betti, Roberta Riboni, Alessandro Vanoli, Fausto Baldanti, Gino Roberto Corazza

Rachele Ciccocioppo, Francesca Racca, Elena Betti, Gino Roberto Corazza, Centre for the Study and Cure of Inflammatory Bowel Disease, Clinica Medica I, IRCCS San Matteo Hospital Foundation, University of Pavia, 27100 Pavia, Italy

Stefania Paolucci, Giulia Campanini, Fausto Baldanti, SS Virologia Molecolare - SC Virologia e Microbiologia, Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, 27100 Pavia, Italy

Lodovica Pozzi, Servizio di Endoscopia Digestiva, Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, 27100 Pavia, Italy

Roberta Riboni, Alessandro Vanoli, Servizio di Anatomia Patologica; Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, 27100 Pavia, Italy

Авторы: Цикоциоппо Р. разработала данное исследование, была ответственной за диагностическое и терапевтическое ведение больных, провела анализ и интерпретацию данных, написала рукопись и получила средства на проведение исследования. Она одобрила конечную версию статьи. Ракка Ф. провела сбор и анализ данных. Она одобрила конечную версию. Паолуччи С. И Кампанини Г. провели анализ количественных ПЦР в режиме реального времени. Они одобрили конечную версию статьи. Поззи Л. проводила эндоскопические исследования с соответствующим забором биопсий. Она одобрила конечную версию статьи. Бетти И. была привлечена к сбору клинических данных и технической поддержки. Она одобрила конечную версию статьи. Рибони Р. проводила иммунные гистохимические анализы. Она одобрила конечную версию статьи. Ваноли А. проводил анализ результатов иммунного гистохимического анализа. Он одобрил конечную версию статьи. Балданти Ф. участвовал в ведении больных и написании рукописи статьи. Он одобрил конечную версию статьи. Горацца Г.Р. нес ответственность за ведение больных и проводил критический анализ интеллектуального содержания статьи. Он одобрил конечную версию статьи.

Финансовая поддержка (частично) Фонд НИЦ Поликлиники Сан Матео (Progetto di Ricerca Corrente) под названием: “Studio della espressione del recettore per i prodotti finali della glicosilazione avanzata (RAGE) nelle Malattie Infiammatorie Croniche Intestinali”, No. 08064409.

Доступность: Данная статья является доступным материалом, который был отобран штатным редактором и полностью оценена внештатными экспертами. Статья была разослана в соответствии с лицензией некоммерческой организации Creative Commons Attribution (CC BY-NC 4.0) позволяющей распространение, адаптацию, основанную на данном исследовании и лицензирование производных работ на разных условиях; данная оригинальная работа была размещена на сайте и не должна быть использована в коммерческих целях: http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Обращаться: Rachele Ciccocioppo, MD, Centre for the Study and Cure of Inflammatory Bowel Disease, Clinica Medica I, IRCCS San Matteo Hospital Foundation, University of Pavia, Piazzale Golgi 19, 27100 Pavia, [email protected]

Телефон: +39-382-502786 Факс: +39-382-502618

Статья получена: август 6, 2014

Начало экспертной оценки: август 6, 2014

Первое заключение: сентябрь 15, 2014

Редакция: октябрь 3, 2014

Одобрена: ноябрь 18, 2014

Статья сдана в прессу: ноябрь 19, 2014

Оnline публикация: февраль 14, 2015

Автореферат

ЦЕЛЬ: дать оценку лучшего диагностического метода и факторов риска заражения цитомегаловирусом человека (ЦМВЧ) и вирусом Эпштейн-Барра (ВЭБ) при воспалительных заболеваниях кишечника (ВЗК).

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ: Анализ периферической крови и эндоскопический забор проб из слизистой толстого кишечника был проведен в группе из 40 больных с ВЗК (17 не поддающихся лечению) и 40 человек группы контроля. Наличие вирусной инфекции оценивалось с помощью количественной ПЦР в режиме реального времени и иммунного гистохимического анализа, были изучены корреляционные связи с клиническими и эндоскопическими индексами активности и факторы риска.

РЕЗУЛЬТАТЫ: Все больные, не поддающиеся лечению, имели определяемый уровень слизистой нагрузки ЦМВЧ и\или ВЭБ по сравнению с 13 из 23 (56,5%) у поддающихся лечению больных и 13 из 40 (32,5%) в контрольной группе. Средняя величина ДНК была значительно выше у невосприимчивых к лечению больных (ЦМВЧ 286 и ВЭБ 5,440 репликаций/10⁵ клеток), чем у поддающихся лечению (ЦМВЧ 0 и ВЭБ 6 репликаций/10⁵ клеток; P < 0,05 и < 0,001) с ВЗК и в группе контроля (ЦМВЧ и ВЭБ 0 репликаций/10⁵ клеток; P < 0,001). У больных, неподдающихся лечению, пиковые величины ДНК были ≥ 10³ репликаций/10⁵ клеток в инфицированной слизистой по сравнению с неинфецированной слизистой (P < 0,0121 для ЦМВЧ и < 0,0004 для ВЭБ), тогда как у больных, поддающихся лечению, и в группе контроля неизменно наблюдались величины ниже пороговых, что позволило нам дифференцировать вирусный колит от инфекции слизистой оболочки. Кроме того, вирусная нагрузка слизистой имела положительную корреляционную связь с величинами, обнаруженными в периферической крови, в то время как корреляционной связи с количеством положительных клеток при иммунном гистохимическом анализе обнаружено не было. Применение стероидов имело значительный риск в случае колита вызванного как ЦМВЧ (P = 0,018), так и ВЭБ(P = 0,002). В конечном счете, в группе больных с ЦМВ колитом эффективным был специфичный антивирусный курс лечения ацикловиром, тогда как у невосприимчивых к лечению больных с ВЭБ колитом улучшение не наблюдалось, несмотря на снижение доз стероидов и прекращение приема других препаратов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ: Считается, что вирусный колит усиливает повреждение слизистой у невосприимчивых к лечению больных с ВЗК, и его правильная диагностика и ведение требует проведения анализа образцов слизистой с помощью количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Ключевые слова: воспалительные заболевания кишечника, количественная полимеразная цепная реакции в режиме реального времени, стероидная терапия, неподдающийся лечению, вирусная инфекция

В данном исследовании проводилось изучение наличия инфекции цитомегаловируса человека и вируса Эпштейна-Бара (ВЭБ) у больных с восприимчивой и невосприимчивой к лечению формами воспалительного заболевания кишечника (ВЗК). Лучшим методом диагностики мы считаем проведение полимеразной цепной реакции для исследования образцов слизистой. Этот метод позволил нам отличить вирусный колит от инфекции путем определения критической величины. Все невосприимчивые к лечению больные с ВЗК имели высочайшую вирусную нагрузку слизистой, которая была связана с тяжестью повреждения слизистой и эндоскопической активностью. Превалировала инфекция ВЭБ. В конце концов, лечение стероидами рассматривалось в качестве фактора значительного риска при вирусном колите.

Ссылки: Ciccocioppo R, Racca F, Paolucci S, Campanini G, Pozzi L, Betti E, Riboni R, Vanoli A, Baldanti F, Corazza GR. Инфекции цитомегаловируса человека и вируса Эпштейн-Барра при воспалительных заболеваниях кишечника: необходимость измерения вирусной нагрузки слизистой. World J Gastroenterol

ВВЕДЕНИЕ

Увеличение числа доказательств подчеркивает роль раннего лечения воспалительных заболеваний кишечника (ВЗК) с помощью более агрессивной терапии для достижения заживления слизистой и предотвращения прогрессирования заболевания [1]. Как следствие, большое количество больных принимают иммуносупррессивные и\или биологические препараты, которые в свою очередь ведут к увеличению риска оппортунистических инфекций [2,3]. Среди них широко распространенный цитомегаловирус человека (ЦМВЧ) и вирус Эпштейн-Барра (ВЭБ) способны сохранять латентные формы в клетках-мишенях и реактивироваться в случае снижения иммунитета[4], вызывая как системное, так и органное заболевание, которое также может локализоваться в желудочно-кишечном тракте [5,6]. Кроме того, недавно у больных с ВЗК, принимающих иммуносуппресоры и\или иммуномодулирующие препараты, было обнаружено увеличение риска развития лимфомы, особенно у молодых людей принимающих тиопурины, где предполагалась роль первичной инфекции ВЭБ [7], как в случаях пост-трансплантационных лимфопролиферативных заболеваний [8]. Дальнейшим условием, возможно связанным как с ЦМВЧ, так и ВЭБ, являлся гемофагоцитарный лимфогистоцитоз [9].

В настоящее время в доступной информации о частоте, роли и факторах риска ЦМВЧ и ВЭБ при обострении ВЗК и диагностических и терапевтических подходах к ним имеют место расхождения [10,11]. Причины данных расхождений лежат в различиях среди обследованных больных, применяемых методах диагностики и ретроспективной модели большинства исследований. Далее мы провели проспективную оценку наличия ЦМВЧ и ВЭБ инфекции в группе больных с ВЗК по сравнению с контрольной группой, с помощью иммунного гистохимического анализа и полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с целью изучения влияния данных оппортунистических вирусных инфекций на активность заболевания и факторы риска реактивации.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Участники исследования

С сентября 2011года по февраль 2013 года были проспективно обследованы больные страдающие болезнью Крона (БК) и язвенным колитом (ЯК), как восприимчивые, так и невосприимчивые к традиционному лечению и диагностированные на основании широко принятых критериев [12,13]. В отношении группы больных неподдающихся лечению невосприимчивость к стероидам рассматривалась как персистирование активной формы заболевания, несмотря на прием преднизалона или его эквивалентов в дозе до 0,75 мг/кг в день в течение четырех недель [12,13]; первичная и вторичная невосприимчивость к препаратам противоопухолевого фактора некроза-α, таких как инфликсимаб и адалимумаб, рассматривалась как недостаток клинического улучшения, вызванного вводной терапией или рецидив заболевания во время поддерживающей терапии, несмотря на правильное увеличение доз и интервалы между приемом с исключением сопутствующих условий, соответственно [14]; резистентность к иммуносуппрессивной терапии, т.е. Азатиоприну, после коррекции дозы, проводимой на основании уровня эритроцитов активного метаболита нуклеотида 6-тиогуанина [15]. В конечном счете, у больных, получающих комбинированное лечение, невосприимчивость определялась как персистирование активного заболевания, несмотря на лечение в течение не менее четырех недель. Все больные прошли нижнюю эндоскопию как часть диагностического обследования при рецидиве заболевания или во время наблюдения. Оценка больных проводилась в соответствии с Монреальской классификацией [16], и включала: клиническое обследование, вычисление индекса массы тела, оценку привычки курить, рутинные лабораторные анализы и оценку как клинического (индекс активности болезни Крона: ИАБК[17] и индекс активности колита: ИАК[18]), так и эндоскопического (SES-БК[19] и Baron[20]) индексов активности. В контрольную группу были привлечены индивиды соответствующего пола и возраста, прошедшие нижнюю эндоскопию при синдроме раздраженного кишечника или скрининг полипов, не принимавшие никакие препараты. Наличие сопутствующих аутоиммунных заболеваний, первичного иммунодефицита, рака или органной недостаточности рассматривалось в качестве критерия исключения.