Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ќпределение общего числа бактерий




—огласно √ќ—“у 18963-73 общее число бактерий - это то количество микроорганизмов, которое содержитс€ в 1 мл исследуемой воды, способных в течение суток при температуре 37∞ — образовывать колонии, видимые невооруженным глазом (или при увеличении с помощью лупы).

ѕервый день исследовани€

ѕри исследовании водопроводной воды засевают 2 чашки. ¬ одну из них внос€т 1 мл неразведенной воды, в другую 1 мл воды, разведенной в 10 раз (т. е. 0,1 мл исходной пробы).

ѕри исследовании более загр€зненной воды засевают 1 мл воды, разведенной в 100 раз. Ёто соответствует 0,01 и 1 мл.воды, разведенной в 1000 раз (0,001 мл) и т. д. ƒл€ получени€ таких объемов готов€т последовательно дес€тикратные разведени€, по 1 мл каждого разведени€ внос€т в чашку и заливают тонким слоем (12-15 мл) растопленного и остуженного до 45∞ — питательного агара. ƒл€ равномерного распределени€ исследуемой воды залитые агаром чашки перемешивают путем вращени€ их. ѕосле застывани€ агара посевы став€т в термостат и инкубируют при температуре 37∞ — 24 ч.

¬торой день исследовани€

„ашки с посевами вынимают из термостата и подсчитывают число выросших колоний. ”читывают только те чашки, где число колоний находитс€ в пределах 30-300. ≈сли колоний немного, их подсчитывают невооруженным глазом или при помощи лупы.

≈сли колоний много, то подсчет можно вести с помощью специального прибора дл€ счета микробных колоний (рис. 54).


–ис. 54. ѕрибор дл€ счета колоний микроорганизмов. 1 - столик дл€ чашки ѕетри; 2 - игла с пружинным устройством; 3 - показатель счетчика; 4 - тумблер дл€ включени€ импульсного счетчика; 5 - тумблер дл€ включени€ лампы освещени€ счетчика

ѕодсчитанное количество колоний умножают на разведение и узнают число микробов в 1 мл исследуемой воды.

ќпределение Ѕ√ ѕ

Ќаличие Ѕ√ ѕ (бактерий группы кишечной палочки) €вл€етс€ показателем фекального загр€знени€, интенсивность которого характеризуют:

 оли-индекс - количество кишечных палочек, обнаруженных в 1 л воды.

 оли-титр - наименьшее количество воды, в котором обнаруживают присутствие кишечной палочки*.

* ( оли-титр и коли-индекс - это один показатель, различно выраженный.)

ƒл€ вы€влени€ в воде Ѕ√ ѕ можно пользоватьс€ двум€ методами: титрационным (бродильным) и методом мембранных фильтров.

“итрационный метод

ƒл€ исследовани€ воды используют среду накоплени€ глюкозопептонную (√ѕ—) среду Ёйкмана с индикатором и бродильными трубками. —реда готовитс€ концентрированной (в 10 раз) и нормальной концентрации - дл€ посева 1 мл воды.

ѕервый день исследовани€

»сследуемую воду засевают по 100 мл в 3 колбы, по 10 мл в 3 пробирки (с концентрированной средой) и по 1 мл в 3 пробирки (со средой нормальной концентрации) - всего 333 мл. ѕосевы инкубируют в термостате при 37∞ — 24 ч.

¬торой день исследовани€

¬ынимают посевы из термостата и просматривают их.

ѕри наличии помутнени€ в колбах или пробирках из них производ€т посев петлей на сектора среды Ёндо в чашках ѕетри. ѕосевы инкубируют в термостате при 37∞ —.

“ретий день исследовани€

¬ынимают чашки из термостата. »з подозрительных колоний делают мазки. ѕри наличии грамотрицательных палочек став€т пробу на оксидазную активность. ѕоложительна€ проба на оксидазу дает право дать отрицательный ответ.

ѕроба на оксидазу. 1-й способ: со среды Ёндо снимают петлей 2-3 колонии каждого типа и нанос€т на поверхность фильтровальной бумаги, смоченной диметилпарафенилендиамином. ѕоложительна€ реакци€ характеризуетс€ посинением штрихов, сделанных из колоний.

2-й способ: реактив можно нанести на изолированную колонию на среде Ёндо (красна€ колони€ - синеет) (рис. 55).


–ис. 55. ќпределение коли-индекса воды титрационным методом

ќтрицательна€ проба на оксидазу свидетельствует о наличии в воде Ѕ√ ѕ. ¬ этом случае вычисл€ют коли-индекс и коли-титр с помощью стандартных (эмпирических) таблиц √ќ—“а 16963-73 (см. табл. 54).

Ёти таблицы предусматривают любую возможную комбинацию объемов посева, из которых выделена кишечна€ палочка.

ћетод мембранных фильтров

ƒл€ фильтрации воды можно использовать воронку √ольдмана вместимостью 700-800 мл.

ѕервый день исследовани€

¬ воронку смонтированного и простерилизованного фильтровального прибора «ейтца наливают отмеренный объем исследуемой воды. — помощью насоса создают вакуум в приемном сосуде (обычно воду фильтруют через фильтры є 2 и 3). ѕо окончании фильтрации стерильным или обожженным в огне пинцетом снимают фильтр и накладывают его на среду Ёндо в чашке ѕетри так, чтобы поверхность с осевшими на ней микробами была обращена вверх (на одну чашку можно помещать 3-4 мембранных фильтра).

ѕосевы инкубируют в термостате при температуре 37∞ — 18-24 ч.

¬торой день исследовани€

„ашки с посевами (фильтрами) вынимают из термостата. ќтсутствие подозрительных колоний дает право дать отрицательный ответ.

”чету подлежат все красные и розовые колонии с металлическим блеском или без него. »з выросших колоний делают мазки, окрашивают по √раму (рис. 56).


–ис. 56. ќпределение коли-индекса воды методом мембранных фильтров

ѕри наличии грамотрицательных палочек став€т пробу на оксидазу. ѕоложительна€ оксидазна€ проба дает право дать отрицательный ответ. ѕри отрицательной оксидазной пробе производ€т посев на полужидкую среду с глюкозой и индикатором или на среду √ѕ— с бродильными трубками - дл€ вы€влени€ ферментации углевода до кислоты и газа. ѕри наличии кислоты и газа вычисл€ют коли-индекс. Ќапример, на всех фильтрах, наход€щихс€ на среде Ёндо, выросло 3 колонии, пропущено через фильтр было 300 мл воды.

–асчет. 300 мл - 3 колонии 1000 мл - х х = 10; коли-индекс 10

ѕримечание. “итрационный метод более точный и может быть использован при наличии в воде примесей. ћетод мембранных фильтров экономичнее и дает возможность дать ответ на 2-й день.





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2016-11-22; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 1126 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

—ложнее всего начать действовать, все остальное зависит только от упорства. © јмели€ Ёрхарт
==> читать все изречени€...

540 - | 459 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.015 с.