Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ћетоды Ёкспериментального »зучени€ опухолей




 

—уществует несколько методов изучени€ опухолевого роста в эксперименте: трансплантаци€, индукци€, а также использование линейных животных с повышенной частотой развити€ опухолей и генетически модифицированных животных.

“рансплантаци€ опухоли. ¬первые успешна€ трансплантаци€ опухоли от взрослой собаки щенку была произведена отечественным ученым Ќ.ћ. Ќовинским в 1876 году. ћетод трансплантации опухоли достаточно прост в воспроизведении, хот€ требует соблюдени€ определенных правил.

Ј ќпухоль практически не перевиваетс€ от одного вида животного к другому, слишком сильные видоспецифические антигены вызывают мощную иммунную реакцию и уничтожение опухолевых клеток.

Ј ∆ивотное, которому перевиваетс€ опухоль, должно иметь высокую степень реактивности, поскольку в канцерогенезе имеет значение не только вли€ние опухолевой клетки на окружающие ткани, но и реакци€ организма на эту клетку, наличие субстратов дл€ адгезии, роста опухолевой ткани. ќбычно этим требовани€м отвечают молодые животные.

Ј  оличество перевиваемой опухолевой ткани должно быть достаточно большим, т.к. одна или несколько опухолевых клеток будут уничтожены иммунной системой хоз€ина.

¬ последние годы в исследовани€х все чаще используют ксенотрансплантацию, т.е. перевивку опухолей человека на животных. ƒл€ предотвращени€ иммунной деструкции трансплантированных клеток дл€ ксенотрансплантации чаще всего используют мышей с выраженным иммунодефицитом, например, атимических безволосых мышей. ¬ыдел€ют два варианта ксенотрансплантации опухолевой ткани: 1) ортотопическую, при которой фрагмент опухоли человека помещают в тот же орган мыши-реципиента, из которого произошла опухоль пациента, и 2) гетеротопическую, при которой опухолевую ткань трансплантируют подкожно.

  преимуществам использовани€ модели ксенотрансплантации относ€тс€:

Ј ¬озможность анализа опухолевой ткани человека, характеризующейс€ высокой степенью генотипической и фенотипической гетерогенности;

Ј ¬озможность персонализированного подбора противоопухолевой терапии;

Ј –езультат относительно устойчивости опухолевых клеток к противоопухолевым препаратам может быть получен в течение всего нескольких недель от момента получени€ биопсийного материала у пациента.

ќтносительным недостатком классической модели ксенотрансплантации €вл€етс€ наличие глубокого дефекта иммунной системы реципиента. ƒл€ решени€ этой проблемы предложено использовать дл€ ксенотрансплантации атимических мышей, которым предварительно были введены гемопоэтические стволовые клетки человека. Ёта процедура, называема€ "гуманизацией", позвол€ет частично восстановить иммунный ответ у животного-реципиента.

“рансплантаци€ опухоли €вл€етс€ удобным методом дл€ оценки опухолевой прогрессии, изучени€ вли€ни€ опухоли на организм, и особенно исследовани€ методов лечени€ опухоли, подборе химиопрепаратов против конкретных видов опухолей.

»ндукци€ опухолей. ƒанный метод предполагает воздействие на организм животного различными канцерогенными факторами с целью возникновени€ опухолей. „аще используют вирусный и химический канцерогенез.

¬ 1908 году Ellermann и Bang первыми воспроизвели перевивку опухоли (лейкоза) в опытах на птицах с помощью бесклеточного фильтрата, что можно считать первой демонстрацией роли вирусов в канцерогенезе. «атем, аналогичные опыты в 1911 году были выполнены Rous, который путем введени€ бесклеточного фильтрата куриной саркомы индуцировал развитие этой же опухоли у здоровых птиц. ¬последствии была доказана вирусна€ природа этих опухолей. ¬ирус-индуцированные опухоли у лабораторных животных - €вление очень частое. —уществует множество вирусов, вызывающих опухоли различных локализаций у мышей, хом€чков, крыс и т.д. ќнкогенные вирусы представлены как ƒЌ -, так и –Ќ -содержащими вирусами. ” животных опухоли вызываютс€ преимущественно –Ќ -содержащими вирусами. —уществуют линии животных с опухол€ми, возникающими вследствие зараженности онкогенными вирусами (вирусом рака молочной железы, вирусом лейкоза мышей и т.д.). ’орошо известен так называемый фактор молока Ѕиттнера (онковирус), названный так в честь автора блест€щей работы (Bittner, 1936), доказавшего возможность передачи рака молочной железы от мышей высокораковой линии новорожденным мышатам низкораковой линии через материнское молоко.

»ндукци€ опухоли с помощью химических канцерогенов достаточно сложна в исполнении и нередко требует проведени€ длительного эксперимента. “ак, первый удачный опыт по индукции опухоли химическим веществом был выполнен в 1915 году, когда €понские исследователи ямагива и »шикава сумели вызвать развитие опухоли кожи на ухе кролика после 6-мес€чного втирани€ в нее каменноугольной смолы. ¬ экспериментах на животных подтверждаетс€ пр€мой канцерогенный эффект некоторых веществ. ќднократна€ подкожна€ инъекци€ бензпирена и других ѕј” в зависимости от дозы после длительного латентного периода (3-4 мес€ца) приводит к развитию саркомы преимущественно в месте введени€. ћногократное введение ѕј” приводит к развитию лейкозов, а также опухолей различной локализации с меньшим латентным периодом. ¬ыраженным канцерогенным действием в экспериментальной практике обладают производные нитрозомочевины, вызыва€ у грызунов (крысы, мыши, морские свинки) опухоли печени, пищевода, желудка, поджелудочной железы.

¬ насто€щее врем€ любые химические вещества, с которыми контактирует человек, а особенно фармакологические препараты, должны испытыватьс€ на животных дл€ оценки степени их канцерогенности.

Ћинейные животные с повышенной частотой развити€ опухолей. Ѕольшое значение в экспериментальной онкологииимеют линейные (инбредные) животные, полученные путем близкородственного скрещивани€ на прот€жении многих поколений. ќпределенные линии таких животных имеют высокую частоту развити€ опухолей определенных локализаций, что обычно определ€етс€ полигенным наследованием. ¬ качестве примера можно привести самок крыс линии BDII, у которых в 100% случаев развиваютс€ аденокарциномы матки, или самцов линии Lobund-Wistar, c такой же частотой подверженных раку предстательной железы. ” самцов мышей линии —¬ј с высокой частотой развиваютс€ гепатокарциномы, тогда как у самок они вы€вл€ютс€ в единичных случа€х.

ћодели опухолевого роста у генетически модифицированных животных. ¬ последнее врем€ широкое распространение во всем мире получили модели опухолевого роста с использованием генетически модифицированных мышей. ѕервое поколение таких моделей включало два варианта генетической модификации животных: 1) перманентное удаление (нокаутирование) одного или нескольких антионкогенов (например, Rb, Brca1, PTEN, p53 и др.) и 2) введение в геном дополнительных копий онкогенов (трансгенез, например, c-Myc). ќднако, такие модели имели р€д недостатков:

Ј ¬ысока€ летальность животных на стадии эмбриона, существенные дефекты развити€ и стерильность взрослых особей;

Ј ”силение экспрессии (или удаление) гена во всех клетках организма не отражает реальной ситуации, когда измененные клетки окружены здоровыми клетками;

Ј ¬ случае трансгенеза затруднен контроль над локализацией введенного гена и количеством его копий;

Ј Ќаличие выраженных компенсаторных изменений, вли€ющих на итоговый фенотип.

¬ св€зи с этим в последние годы разработаны усовершенствованные генетические модели опухолей у мышей. “ак, например, технологи€ Cre-Lox позвол€ет обеспечить высокоспецифическое Ђвыключениеї антионкогена в определенном органе или ткани в результате воздействи€ определенного внешнего физического фактора (например, излучени€ определенной длины волны). “акие животные получили название кондиционных нокаутов. ¬ыключение функции гена при этом осуществл€етс€ необратимо в результате активизации внешним фактором рекомбиназы Cre, обеспечивающей исключение из генома гена-мишени, с двух сторон "промаркированного" loxP последовательност€ми. ¬ то же врем€, конечной целью моделировани€ опухолей у генетически измененных животных €вл€етс€ возможность обратимого Ђвключени€/выключени€ї любых генов, задействованных в развитии опухоли, в любой ткани и на любой стадии онтогенеза. „астично данную проблему решают тетрациклин-чувствительные генетические конструкции, позвол€ющие осуществл€ть обратимое ингибирование экспрессии определенного гена.

 

–екомендуема€ литература

 

1. јнисимов ¬.Ќ. —овременные подходы к изучению канцерогенной безопасности, противоопухолевой, антиканцерогенной и геропротекторной активности фармакологических препаратов / ¬.Ќ. јнисимов и соавт. // ¬опросы онкологии. - 2012. - “. 58, є1. - —. 7-18.

2. јничков Ќ.ћ. Ѕиологи€ опухолевого роста (молекул€рно-медицинские аспекты) / Ќ.ћ. јничков, ».ћ.  ветной, —.—.  оновалов. - ћ.: ќлма-ѕресс, 2004. - 216 с.

3. »м€нитов ≈.Ќ. ћолекул€рные механизмы опухолевого роста / ≈.Ќ. »м€нитов // ¬опросы онкологии. - 2010. - “. 56, є 2. - —. 117-128.

4. Pecorino L. Molecular biology of cancer. Mechanisms, targets, and therapeutics / L. Pecorino. - 3rd edition. - Oxford Press, 2012. - 360 p.

5. Weinberg R.A. The biology of cancer / R.A. Weinberg. - 2nd edition. - Garland Science, 2013. - 960 p.





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2016-11-23; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 852 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

¬ моем словаре нет слова Ђневозможної. © Ќаполеон Ѕонапарт
==> читать все изречени€...

526 - | 478 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.009 с.