Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ќсобенности постановки методов оценки хемотаксиса in vitro

’от€ метод довольно прост, необходимо остановитьс€ на некоторых технических особенност€х, способных существенным образом повли€ть на миграционную активность и количество клеток, помещаемых в камеру.

“ак как хемотаксис св€зан с высокой метаболической активностью клеток, необходимо соблюдать определенный температурный режим. ћаксимальный хемотаксис наблюдаетс€ при 37 ∞—. ¬ интервале тем-

пературы от 33 до 43 ∞— значительных различий результатов миграции не наблюдаетс€. ќднако при экспериментальной гипотермии у свинок при температуре 29 ∞— отмечено снижение миграционной активности моноцитов.

 

—остав среды, используемой при постановке метода, не требует каких-либо специальных добавок за исключением небольшого количества белка, облегчающего миграцию клеток. Ќаиболее оптимальный рЌ среды - 7,0, хот€ в некоторых случа€х предпочтение отдаетс€ некоторому смещению рЌ в кислую сторону, что обычно характерно дл€ воспалительной реакции in vivo.  ак указывалось выше, моноциты, проход€щие сквозь фильтры, могут попадать в раствор нижней камеры, и поэтому их не учитывают. ¬ажное значение имеет врем€ проведени€ реакции. ѕри использовании поликарбонатных фильтров оптимальные сроки инкубации клеток при 37 ∞— - 90 мин.

—ледует избегать добавлени€ в систему нативных сывороток. Ќапример, сыворотка человека порой содержит факторы как способствующие хемотаксу, так и его ингибирующие.

¬ажна также криоконсерваци€ выделенных моноцитов. ¬ отличие от всех других функций клеток хемотаксис у размороженных моноцитов снижен. ѕрисутствие лимфоцитов в клеточной суспензии, загружаемой в камеру, обычно не вли€ет на хемотаксис моноцитов.

ѕри соблюдении стандартных условий постановки реакции техническа€ вариабельность результатов составл€ет около 20%, что вполне допустимо. ¬оспроизводимость метода весьма высока€. –екомендуетс€ подсчитывать при микроскопии как минимум 10 случайных полей миграции на 2 идентичных фильтрах. ≈сли перед помещением на фильтры камеры моноциты были хорошо суспендированы, разбросы подсчета клеток в отдельных пол€х зрени€ под микроскопом невелики и св€заны обычно только с ошибками при самом подсчете.

¬ следующем разделе мы удел€ем внимание р€ду методических приемов оценки активности фагоцитарных клеток в генерации многочисленных медиаторных молекул (в первую очередь цитокинов и активных форм кислорода и азота). ¬се эти факторы врожденного иммунитета крайне важны дл€ нормального функционировани€ иммунной системы, а особенно - дл€ вы€влени€ патологических состо€ний, характеризующихс€ сниженной или повышенной выработкой подобных медиаторов.

 


<== предыдуща€ лекци€ | следующа€ лекци€ ==>
ћетод оценки хемотаксиса нейтрофилов с использованием камеры Ѕойдена | ќпределение выработки активных форм кислорода и оксида азота
ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-02-12; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 309 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

“ак просто быть добрым - нужно только представить себ€ на месте другого человека прежде, чем начать его судить. © ћарлен ƒитрих
==> читать все изречени€...

498 - | 395 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.012 с.