Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ѕрактическа€ работа. 1. »зучение риккетсии ѕровачека, окрашенные фуксином с подогреванием (зарисовать)




1. »зучение риккетсии ѕровачека, окрашенные фуксином с подогреванием (зарисовать)

–иккетсии, в отличие от бактерий, плохо окрашиваютс€ обычными анилиновыми красител€ми, поэтому дл€ их окраски используют методы, основанные на протравливании или метод –омановского-√имзы. ¬ нашей стране чаще всего пользуютс€ окраской по «дродовскому, который, в св€зи с наличием в клетке риккетсий большого количества липидов, рекомендует окрашивать препарат карболовым фуксином, с последующим обесцвечиванием слабым раствором органической кислоты и докрашиванием водным раствором метиленовой синей. ѕри этом риккетсии окрашиваютс€ в рубиново-красный, протоплазма клеток Ц в голубой, а €дра ̶ в синий цвет.

ћетод «дродовского удобен дл€ окрашивани€ риккетсий, наход€щихс€ внутриклеточно. „истую культуру можно окрасить карболовым фуксином с последующим прогреванием окрашиваемого препарата на огне. –иккетсии при этом окрашиваютс€ в красный цвет.

2. »зучение риккетсии ÷уцугамуши, окрашенные по –омановскому-√имзе (зарисовать)

 раска –омановского-√имзы состоит из метиленового синего, эозина и азура. ÷итоплазма риккетсий окрашиваетс€ в голубой цвет с различными оттенками, €дерна€ субстанци€ Ц в красный, но ввиду малых размеров риккетсий эти цвета сливаютс€ и воспринимаютс€ как сиреневый.

3. »зучение морфологии вирусов (по электронным микрофотографи€м)

—туденты изучают строение некоторых вирусов, обращают внимание на структуру и тип симметрии нуклеокапсида строение капсомеров, знаком€тс€ с морфологией сложноустроенных вирусов. ћикрофотографии зарисовывают в тетради.

4. “ельца ѕашена (зарисовать)

¬ирус оспы был вы€влен в обычном световом микроскопе ѕашеном. ќбнаружение вируса в содержимом везикул €вл€етс€ быстрым методом диагностики, примен€етс€ в раннем периоде болезни.

ƒл€ обнаружени€ вирусов оспы используют специальные методы окраски. Ќаиболее эффективным из них €вл€етс€ метод серебрени€ по ћорозову. Ётот метод, основанный на протравливании и дополнительной импрегнации серебром, позвол€ет искусственно увеличивать вирус до размеров 0,2 мкм. ¬ирус оспы окрашиваетс€ в черный цвет. „астицы вируса имеют вид округлых образований, располагающихс€ по одиночке или небольшими скоплени€ми на светло-коричневом фоне детрита.

5. “ельца √варниери (зарисовать)

“ельца √варниери обнаруживаютс€ в пораженных эпителиальных клетках при оспе. ќни имеют шаровидную или серповидную форму, размер от 1Ц4 до 10 мкм. ѕри окраске по –омановскому-√имзе тельца √варниери имеют сиреневато-розовый или €рко-красный цвет, плотную или зернистую консистенцию и окружены светлым реактивным ободком, располагаютс€ в цитоплазме.

6. “ельца Ѕабеша-Ќегри (зарисовать)

—пецифические внутриклеточные включени€ Ѕабеша-Ќегри обнаруживаютс€ при бешенстве в нейронах аммонова рога, а также в клетках мозжечка, продолговатого мозга. ƒл€ окраски готов€т гистологические срезы, мазки-отпечатки и обычные мазки, окрашивают по методу “уревича, ћуромцева, –омановского-√имзы. “ельца Ѕабеша-Ќегри представл€ют собой круглые или выт€нутые образовани€, размером 0,25Ц0,28 мкм, уплотненные в центре с зернистой периферической частью. ¬ одной клетке их может быть несколько. ѕо ћуромцеву цитоплазма окрашиваетс€ в бледно-голубой цвет, €дра клеток Ц в синий, а тельца Ѕабеша-Ќегри Ц в бледно-фиолетовый.

7. «аражение куриных эмбрионов (знакомство по схеме). —оставить схему. ќформить протокол

ƒл€ вирусологических исследований используют оплодотворенные €йца 7Ц12-дневного возраста. ќтбирают крупные, чистые (но немытые) оплодотворенные €йца, предпочтительно белых кур, хранившиес€ не более 10 дней при 5Ц10∞—. ќплодотворенные €йца распознают по наличию зародышевого диска, который при просвечивании с помощью овоскопа имеет вид темного п€тна. ѕри работе с вирусами могут быть использованы различные методы заражени€ куриного эмбриона. ѕеред заражением определ€ют на овоскопе жизнеспособность эмбриона. ∆ивые эмбрионы подвижны, видна пульсаци€ сосудов. ѕростым карандашом отмечают границы воздушной полости и место расположени€ эмбриона. «аражение провод€т в асептических услови€х, инструментами, простерилизованными кип€чением.

ѕодготовка €иц. Ќа скорлупе €иц с живыми эмбрионами, которые различают по красному цвету кровеносных сосудов и движению эмбриона (при овоскопии), карандашом отмечают место заражени€. —корлупу перед заражением обрабатывают 70% спиртом, обжигают на пламени, а затем дезинфицируют 2% раствором йода.

«аражение в хорионаллантоисную полость. —пециальным стилетом прокалывают скорлупу сбоку и над воздушной камерой, после чего шприцем ввод€т 0,1Ц0,2 мл вируссодержащего материала на глубину 2Ц3 мм ниже границы воздушной камеры. ќба прокола в скорлупе заливают расплавленным стерильным парафином. ¬ зависимости от типа вируса куриные эмбрионы инкубируют 48Ц72час.

«аражение в хорионаллантоисную оболочку. »зогнутыми ножницами удал€ют продезинфицированную скорлупу выше границы воздушной полости. ѕинцетом удал€ют часть подскорлупной оболочки, обнажа€ хорионаллантоисную оболочку, инфекционный материал нанос€т в объеме 0,1Ц0,2 мл (в материал дл€ подавлени€ бактериальной флоры добавл€ют 400 ед. пенициллина и 0,4 мг стрептомицина на 1 мл). ÷елостность скорлупы восстанавливают путем наложени€ стекл€нного стерильного колпачка. «араженные эмбрионы помещают в термостат и инкубируют в зависимости от типа вируса 48Ц72 час.

«аражение в полость амниона. —корлупу €йца над воздушной камерой разрезают ножницами и через образовавшеес€ окно радиусом 1Ц1,5 см осторожно отслаивают глазным пинцетом подскорлупную оболочку. „ерез обнажившийс€ участок хорион-аллантоисной оболочки делают прокол глазным пинцетом и продвигают его к эмбриону. «атем пинцетом захватывают амниотическую оболочку и осторожно выт€гивают часть наружу через образовавшеес€ отверстие в хорион-аллантоисной оболочке. »звлеченный эмбрион перехватывают широким пинцетом, который держат в левой руке. «атем шприцем с иглой ввод€т в выт€нутый амниотический мешок 0,1Ц0,2 мл исследуемого материала. ѕосле заражени€ пинцет разжимают, и амнион погружаетс€ в аллантоисную полость. ќкно в скорлупе закрывают стекл€нным колпачком, кра€ которого заливают стерильным парафином. яйцо помещают в штатив тупым концом вверх.

«аражение в желточный мешок. —корлупу прокалывают по центру воздушной камеры и через образовавшеес€ отверстие при помощи туберкулинового шприца с иглой є 21 длиной 3,8 см ввод€т 0,2Ц0,5 мл испытуемого материала в желточный мешок. ƒл€ этого иглу ввод€т вертикально до упора, затем ее быстро вынимают и отверстие заливают парафином. яйца в вертикальном положении инкубируют 48 ч при 37˚—.

¬скрытие куриных эмбрионов. ¬скрытие производ€т в боксе с соблюдением правил асептики. ѕеред вскрытием скорлупу дезинфицируют таким же способом, как и при заражении. —терильными ножницами срезают скорлупу по границе прикреплени€ хорионаллантоисной оболочки. ѕинцетом снимают подскорлупную оболочку, пастеровской пипеткой прорывают хорионаллантоисную оболочку в месте, лишенном крупных кровеносных сосудов (прорывать осторожно, не поврежда€ сосудов, в случае кровоизли€ни€ вирус адсорбируетс€ на эритроцитах и биологическа€ активность аллантоисной жидкости снижаетс€). ќт одного зараженного эмбриона можно собрать 6Ц10 мл аллантоисной жидкости. —обранную жидкость контролируют на стерильность путем посева 0,1Ц0,2 мл в сахарный бульон, провер€ют на наличие вируса в реакции гемагглютинации.

8. ѕостановка ориентировочной реакцией гемагглютинации (–√ј) (знакомство по схеме). «арисовать схему постановки ориентировочной –√ј. ќформить протокол

–еакци€ гемагглютинации широко примен€етс€ в вирусологии дл€ обнаружени€ вирусов и их титра в исследуемом материале. ќриентировочна€ –√ј ставитс€ капельным методом на стекле. Ќа чистое обезжиренное стекло нанос€т каплю 5% взвеси эритроцитов курицы и каплю испытуемого материала, тщательно перемешивают пастеровской пипеткой. ѕри положительном результате через 1-2 минуты наблюдаетс€ по€вление агглютинации эритроцитов.

9. ѕостановка реакции гемагглютинации (знакомство по схеме). «арисовать схему постановки развернутой –√ј. ќпределить по схеме (таблица 1) количество вируса. ќформить протокол

–азвернута€ –√ј осуществл€етс€ на плексигласовых пластинах с лунками, в которых готов€т двукратные разведени€ вируссодержащего материала. «атем добавл€ют взвесь эритроцитов и инкубируют 30 мин при комнатной температуре.

ѕри гемагглютинации осадок имеет форму зонтика и занимает все дно лунки. ѕри отсутствии феномена эритроциты оседают в центре лунки в виде компактного диска.

 

“аблица 1





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-05-07; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 1181 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

—ложнее всего начать действовать, все остальное зависит только от упорства. © јмели€ Ёрхарт
==> читать все изречени€...

1827 - | 1727 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.008 с.