Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


Ёкологи€ микроорганизмов

ћикробиологическую оценку санитарно-гигиенического состо€ни€ объектов внешней среды провод€т в бактериологических лаборатори€х ÷√—ЁЌ с помощью методов санитарной микробиологии.

÷елью санитарно-микробиологических обследований объектов внешней среды €вл€етс€ установление их эпидемической безопасности. ƒл€ этого примен€ют методы определени€ общей микробной обсемененности, обнаружени€ санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов (таблица є 13).

ќ микробной обсемененности суд€т по общему количеству микробов в единице или площади (1 см3 воды, 1 г почвы и т.д.).

—анитарно-показательна€ флора - это представители облигатной флоры кишечника и органов дыхани€ организма человека и животных. ќни посто€нно выдел€ютс€ в процессе жизнеде€тельности человека и животных с фекали€ми или капельками слизи из воздушно-дыхательных путей. ќни способны длительно сохран€тьс€ на объектах внешней среды при неспособности интенсивного размножени€ вне организма хоз€ина.

“аблица є 13.

ќбъект ’арактер загр€знени€ —анитарно-показательные микроорганизмы
¬ода фекальное кишечна€ группа бактерий
ѕочва промышленно-бытовые отходы те же и клостридии
ѕищевые продукты фекальное, воздушно-капельное кишечна€ группа бактерий, S.aureus
ѕредметы обихода фекальное кишечна€ гр. бактерий, S.faecalis, S.aureus
¬оздух воздушно-капельное S.aureus, S. pyogenes.

 

ќ микробной обсемененности суд€т по общему количеству микробов в единице или площади (1 см3 воды, 1 г почвы и т.д.).

—анитарно-показательна€ флора - это представители облигатной флоры кишечника и органов дыхани€ организма человека и животных. ќни посто€нно выдел€ютс€ в процессе жизнеде€тельности человека и животных с фекали€ми или капельками слизи из воздушно-дыхательных путей. ќни способны длительно сохран€тьс€ на объектах внешней среды при неспособности интенсивного размножени€ вне организма хоз€ина.

Ќапример, обнаружение E.coli на объектах внешней среды следует считать достоверным показателем фекальных загр€знений. Ќаходки Closridium cвидетельствуют о возможно более давнем их фекальном загр€знении. Ќаходки S.pyogenes могут cвидетельствовать о воздушно-капельном загр€знении, например, воздуха.

ћикрофлора воды. ƒл€ отбора проб питьевой воды используют посуду или емкость, специально предназначенную одноразовую, приготовленную из материала не вли€ющего на жизнеспособность микробов. ѕосуда оснащена плотно закрывающимис€ пробкой и сверху защитным колпачком (фольга, плотна€ бумага).

ѕосуда открываетс€ непосредственно перед отбором воды, удал€€ пробку с колпачком. ќполаскивать посуду запрещено. ≈сли отбор идет из крана, то его вначале обжигают, затем его полностью открывают и выпускают воду 10 мин. ѕри отборе напор воды может быть уменьшен. ѕробу воды отбирают непосредственно из крана.

ѕри отборе воды при посто€нном ее изливе через кран, обжигание не делают, а забор ведут с помощью силиконовых или резиновых шлангов. ѕри наполнении емкость закрывают стерильной пробкой и колпачком. ƒоставл€ют воду в контейнерах-холодильниках при температуре 4-100 —. »сследовани€ провод€тс€ не позднее 6 ч от забора воды.

1. ‘ильтрационый метод исследовани€ воды. ¬ верхнюю часть подготовленного фильтровального аппарата наливают точно отмеренное количество воды (водопроводна€ вода - 3 фильтра по 100 мл или 300 мл сразу на один фильтр). ¬ нижней части этого прибора создают вакуум. ѕосле окончани€ фильтровани€ проб воронку снимают, фильтр осторожно приподнимают пинцетом за край и перенос€т не переворачива€ на питательную среду Ёндо в чашку ѕетри, избега€ возникновени€ пузырьков воздуха между двум€ поверхност€ми. Ќа дне чашки делают надписи. „ашки став€т в термостат дном вверх и инкубируют при 370 — в течение 24 ч.

–езультат считаетс€ отрицательным, если на фильтрах не выросли колонии. Ќаличие типичного роста указывает на положительный результат и подсчитывают число колоний темно-красных, красных с металлическим блеском, с красным центром и отдельно розовых (лактозоотрицательные) колоний. ќтбирают по 5 колоний каждого типа и пересевают на скошенный агар, инкубиру€ при 370 — в течение 18 ч. —тав€т с ними оксидазный тест. ѕри положительном результате такие колонии не учитывают. Ќетипичные лактозо (-) колонии пересевают с маннитом на 24 ч при 370 —. ѕоложительные по манниту культуры учитывают как общие колиформные бактерии.

–езультат анализа следует выражать числом колониеобразующих единиц ( ќ≈) общих колиформных бактерий, выросших на всех фильтрах и дел€т их на три.

ѕример, при посеве 3 фильтров по 100 мл, выросло 2 колонии на 100 мл, а на остальных фильтрах роста не было. „исло общих колиформных бактерий будет соответствовать 2: 3 = 0,7  ќ≈ в 100 мл.   общим колиформным бактери€м относ€т √рам (-), не образующие спор палочки, не обладающие оксидазной активностью, ферментирующие лактозу или маннит с образованием кислоты и газа при 370 — в течение 24-48 ч.

2. “итрационный метод. ћетод выполн€ют при анализе воды с большим содержанием взвешенных частиц, в случае преобладани€ в воде посторонней микрофлоры, котора€ может преп€тствовать получению изолированных колоний на фильтре.

ћетод основан на накоплении бактерий после их посева в определенном объеме воды в жидкую питательную среду с лактозой и идентификации колоний по их свойствам.

ѕри исследовании питьевой воды засевают 3 объема по 100 мл (качественный анализ). ѕри засеве 3-х объемов по 100 мл, 3-х объемов по 10 мл и 3-х объемов по 1 мл, выполн€етс€ количественный анализ.  аждый объем воды засевают в лактозо-пептонную среду. ѕосевы инкубируют при 370 — в течение 18-24 ч. ѕри наличие роста и газообразовани€ в емкост€х, производ€т высев на сектора среды Ёндо петлей дл€ получени€ изолированных колоний.

ѕосевы в емкост€х без роста после 48 ч считают отрицательными. ѕосевы на среде Ёндо инкубируют при 370 — в течение 18-20 ч. –езультаты указаны в таблице є 14.

“аблица є 14.

–асчет наиболее веро€тного числа (Ќ„¬) бактерий в 100 мл питьевой воды

(приведена часть искомой таблицы)

„исло положительных результатов в трех объемах воды Ќ¬„ бакте- рий в 100 мл 95 % доверительный интервал
0 0 1 0,3 0 1,4
0 0 2 0,6 0,1 2,8
0 0 3 0,9 0,2 4,2
0 1 0 0,3 0,1 1,1
0 1 1 0,6 1,1 2,8
0 1 2 0,9 1,2 4,3
0 1 3 1,2 0,3 5,7
0 2 0 0,6 0,1 2,8
0 2 1 0,9 0,2 4,3
0 2 2 1,2 0,3 5,8
0 2 3 1,5 0,4 6,3
0 3 0 0,9 0,2 4,4
0 3 1 1,3 0,3 5,9
0 3 2 1,6 0,3 7,4
0 3 3 1,9 0,4 8,9
1 0 0 0,4 0,1 1,7

 

ƒальнейшему исследованию подлежат сектора, где выросли лактозо (+) и (-) колонии. — выросшими культурами выполн€ют оксидазный тест.

ѕри исследовании воды открытых водоемов засевают воду в объемах 1,0 мл, 0,1 мл, 0,01 мл.  оли-титр воды измер€етс€ минимальным количеством воды в мл, в котором могут быть обнаружены бактерии кишечной группы.  оли-индекс - количество бактерий кишечной группы, содержащихс€ в 1л воды.

Ёти показатели определ€ют указанными методами.

ќпределение микрофлоры воздуха

 оличественные методы определени€ микроорганизмов в воздухе основаны на методах седиментации (осаждении) и аспирации (фильтрование).

1. јспирационный метод.

Ёто более точный метод. ѕосев микробов воздуха осуществл€етс€ с помощью приборов: аппарата  ротова, ƒь€кова, –ечменского,  иктенко, ѕјЅ-1 и ѕќ¬1 и др.

јппарат  ротова позвол€ет с заданной скоростью просасывать воздух через узкую щель плексиглазовой пластины, закрывающей чашку ѕетри с питательной средой. ѕри этом, все бактериальные частицы, наход€щиес€ в воздухе, равномерно фиксируютс€ на поверхности среды, что достигаетс€ вращением чашки под входным отверстием. ѕросасывать следует определенное количество воздуха, после чего чашку инкубируют при 370 — 18-20 ч.

ѕосле инкубации подсчитывают микробное число по формуле: х - (ј . 1000): v, где ј- количество выросших колоний, v- объем пропущенного воздуха в дм3, а 1000- искомый объем воздуха в дм3.

ћикробное число операционных до работы не должно превышать 500, в родильных комнатах - 1000, в палатах дл€ недоношенных детей - 750. Ќаличие S.aureus не допускаетс€.

ƒл€ определени€ микробного числа примен€ют питательный агар, дл€ обнаружени€ S. aureus - кров€ной агар и желточно-молочно-солевой агар.

ќпределение микрофлоры почвы. ѕочву берут на глубине 10-15 см стерильным ножом, не менее 10 проб. ѕомещают их в стерильные банки. »з проб готов€т навески в 30 г, внос€т их в колбу с 270 мл воды и встр€хивают. »з суспензии готов€т разведени€ 10-3,10-4,10-5. »з двух последних разведений берут по 0,1 мл и смешивают с 40 мл 0,7 % расплавленного и остуженного до 450 — питательного агара и выливают в чашки ѕетри вторым слоем, которые уже содержали 2 % агар. ѕосевы инкубируют при 370 — в течение 24 ч, подсчитывают число выросших колоний, определ€€ микробное число.

ќпределение коли-титра, перфрингенс-титра и титра термофилов почвы. –азличные разведени€ почвенной суспензии засевают по 1 мл в пробирки со средой  есслера и став€т в термостат при 370 — в течение 48 ч. ƒл€ определени€ коли-титра поступают также как и при определении коли-титра воды.

ƒл€ определени€ перфрингенс-титра различные разведени€ почвенной суспензии по 1 мл засевают в пробирки со стерильным обезжиренным молоком. ѕосевы инкубируют при 430 — в течение 24-48 ч и учитывают свертываемость молока. »з колоний делают мазки и окрашивают их по √раму, а далее микроскопируют. «атем определ€ют перфрингенс-титр по наибольшему разведению суспензии, дающей свертывание молока.

ƒл€ определени€ термофильных бактерий разведени€ почвенной суспензии внос€т по 1 мл в чашки ѕетри, заливают расплавленным и охлажденным питательным агаром. ѕосевы инкубируют при 600 —, подсчитывают число колоний, пересчитывают на 1 г почвы.

ќпределение микрофлоры пищевых продуктов. ¬начале производ€т отбор пищевых и вкусовых продуктов, согласно √ќ—“у 26668-85 (кроме молока). ¬изуально определ€ют внешний вид продуктов, подраздел€€ их на нормальные, подозрительные и испорченные по внешнему виду.

ѕробы от продуктов отбирают асептическим способом в стерильную посуду с помощью стерильных инструментов, не менее 1 шт - от продукции в потребительской таре и до 1000 г (см3) - от продукции в транспортной таре.

ѕробы от кусковой продукции берут ложкой, половником, пинцетом или другими инструментами. ќт кусковой продукции нетто более 1000 г отбирают (отрезают, вырезают) ножом (пилой и пр.):

n в нескольких местах режут ножом и с поверхности разреза и с глубины скальпелем берут необходимое количество кусков.

n срезают верхний слой продукта на 0,5 -1 см и при помощи пробойника выдавливают слой продукта в широкогорлую посуду.

n от твердого продукта отбирают куски с помощью долота.

ќтбор от жидкой или пастообразной продукции:

n из емкости более 1000 см3 отбирают пипеткой или половником.

n из емкости более 1000 см3 отбирают с разной глубины - 3 сло€ в одну посуду.

n при отборе из крана, его обжигают, выпускают до 10 см3 жидкости и отбирают пробу.

 

ќтбор сыпучих продуктов:

ќтбирают после перемешивани€ половником.

ќтобранные пробы пломбируют, опечатывают и транспортируют по правилам, которые установлены нормативно-технической документацией на каждый вид продукта.

ћ€со и м€сные продукты дважды пропускают через м€сорубку, перемешивают, берут по 10 г, добавл€ют жидкость (√ќ—“ – 50454-92) до разбавлени€ 1: 10, гомогенизируют. Ѕерут стерильной пипеткой 1 см3 гомогената и внос€т в пробирку, содержащую 9 см3 стерильной жидкости, перемешивают, набирают из пробирки 1 см3 смеси и перенос€т во 2-ю пробирку, содержащую 9 см3 стерильной жидкости (разведение в 10-2) и повтор€ют процедуру до его разведени€ 10-6.

ќпределение E.coli и колиформных бактерий. ѕеренос€т новой стерильной пипеткой 6 порций по 1 см3 гомогената (раздел€€ их на 2 трехкратные повторности) и в трехкратной повторности по 1 см3 каждого из п€ти последующих разведений двух серий разведений внос€т в пробирки, содержащие по 10 см3 селенитового бульона одинарной концентрации. Ќачинают посев с наибольшего разведени€, постепенно переход€ к наименьшему. ѕробирки инкубируют при 300 — в течение 48 ч. ќтмечают пробирки с ростом бактерий.

ƒл€ расчета Ќ¬„ (наиболее веро€тного числа) бактерий выбирают три последовательно сделанных разведени€:

n когда есть разведение, которое дает три положительные пробирки, то выбирают наибольшее разведение, дающее три положительные пробирки.

n три наибольшие разведени€ серии. ѕоказатель Ќ¬„ по трем пробиркам умножают на значение обратное разведению. ѕолучаетс€ число бактерий колиформных на 1 г.



<== предыдуща€ лекци€ | следующа€ лекци€ ==>
јнтимикробное действие антибиотиков | »нфекционный процесс
ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-05-07; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 377 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

—лабые люди всю жизнь стараютс€ быть не хуже других. —ильным во что бы то ни стало нужно стать лучше всех. © Ѕорис јкунин
==> читать все изречени€...

2019 - | 1961 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.02 с.