Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ѕитательные среды

ѕитательные среды - это искусственно приготовленный комплекс питательных веществ, предназначенный дл€ культивировани€ микроорганизмов. Ёто искусственно приготовленна€ среда обитани€ микробов. “акие питательные среды обычно готов€т на определенной основе (агар, м€со-пептонный бульон и пр.), с учетом пищевых потребностей культивируемых на них микробов. ќни бывают простого и сложного состава и готов€тс€ дл€ лабораторных или промышленных целей.

ѕитательные среды должны:

1. —одержать в нужном количестве весь набор элементов, которые предназначены дл€ восполнени€ структуры микроорганизмов. ќни должны быть в усво€емых химических соединени€х: многоатомные спирты, углеводы, органические кислоты и пр. - это источники углерода; аммонийные соединени€, аминокислоты, белки, пептиды - источники азота; соли фосфорной и др. кислот - источники микроэлементов; витамины и др. - факторы роста, а также должны содержать соли, воду.

2. »меть оптимальную: влажность (не мене 20 % воды), в€зкость, рЌ среды (диапазон от 4,5 до 8,5), изотоничность (дл€ большинства - 0,85 %, дл€ голофилов - 3 %), окислительно-восстановительный потенциал Rh (дл€ анаэробов 0,120-0,060, дл€ аэробов более 0,90).

3. ѕитательна€ среда должна быть прозрачной.

4. ѕитательна€ среда должна быть стерильной.

ѕитательные среды по консистенции могут быть жидкие и полужидкие (0,3-0,7 % агара) и плотные (1,5-2,0 % агара).

ƒл€ приготовлени€ питательных сред примен€ют естественные продукты животного, €ичного, рыбного и растительного происхождени€ или искусственные ингредиенты в строго определенных количествах и такие среды называют синтетическими, а при добавлении к ним еще и естественных продуктов - полусинтетическими. ѕитательные среды из естественных продуктов имеют неопределенный химический состав и требуют добавок некоторых веществ - ингибиторов посторонней флоры и пр. ¬ состав питательных сред на синтетической основе вход€т аминокислоты, витамины, минеральные соли и др. известные химические элементы в известных количествах. ¬ полусинтетические среды кроме известных элементов вход€т пептон, дрожжевой экстракт и др. вещества.

ѕитательные среды по назначению бывают: консервирующие, обогащени€, элективно-диагностические, универсальные и дифференциально-диагностические.

 онсервирующие или транспортные среды предназначены дл€ транспортировки в баклабораторию материала первично засе€нного у постели больного.

”ниверсальные среды предназначены дл€ роста неприхотливых микробов или добавки таких сред как основы к более сложным.

—реды обогащени€ предназначены дл€ накоплени€ одних микробов при подавлении роста других, что бывает очень важным, т.к. первичный материал часто засевают на твердые среды и обогащени€ одновременно.

Ёлективно-диагностические среды предназначены дл€ первичного выделени€ групп или родов микроорганизма с целью последующей дифференцировки и идентификации на других средах.

ƒифференциально-диагностические среды предназначены дл€ окончательного ответа о виде и подвиде выделенной чистой культуры.

Ёлективность диагностических сред выделени€ бактерий достигаетс€ за счет добавлени€ в их состав определенных ингибиторов дл€ других видов микроорганизмов (желчь, азид натри€, теллурит кали€, рЌ, соль, антибиотики и др. вещества). ѕроводима€ далее с чистой культурой дифференциальна€ диагностика бактерий основана на определении особенностей, например, биохимических и др., путем внесени€ в среду определенных субстратов (сорбита, мальтозы, сахарозы и др. - это углеводы; орнитина, лизина, аргинина и др. Ц это белки; солей, мочевины и пр.).

¬ насто€щее врем€ на разные группы микробов выпускают в стране и за рубежом тесты нескольких поколений и пор€дков: 1-пор€дка - тест-система, расфасованна€ по лункам полистироловых пластин питательна€ среда (ј–1-20E, Eneroes, MM“E1 и др.). 2-пор€дка - системы в бумажном индикаторном исполнении (Micro-10, M:N:“EK и др.), 3 -пор€дка - тест-система жидка€, приготовленна€ ex тempore.

ѕриготовление питательных сред

¬виду множества прописей приготовлени€ питательных сред, в этом разделе приводим примеры приготовлени€ наиболее распространенных из питательных сред.

 омпоненты дл€ питательных сред. Ќатуральные питательные среды целиком состо€т из животного сырь€ (свернута€ сыворотка, кровь и др.) или с наполнителем (агар, пептон, желатин и др.). ƒл€ питательных сред используют: картофель,кровь, молоко, €йца, рыбную муку, дрожжи и пр. и готов€т из них экстракты и настои (полуфабрикаты, гидролизаты и перевары, например, ’оттингера) и пр. Ёто источники белковых, азотистых и др. веществ. ¬ качестве минеральных солей используют: NaCI, KHPO4, MgSO4 и др. ¬ качестве сахара Ц глюкозу либо лактозу, мальтозу, сахарозу и пр. »з индикаторов примен€ют јндреде (0,5 г кислый фуксин, 1N NaOH 17 мл, дистиллированна€ вода до 100 мл),  ларка (1,5 % раствора фенолового красного, метиленового красного, бромтимолового синего и др.), а также нужно использовать аминокислоты, витамины и др. ингредиенты.

ƒл€ искусственных сред примен€ют определенные элементы в строго известных дозах, которые оптимальны дл€ конкретных микроорганизмов.

Ќекоторые рецепты приготовлени€ питательных сред:

“ранспортные среды.

1. —реда с теллуритом кали€. јгаровую основу 0,1 % разливают в пробирки по 4 мл. —терилизуют при 1 атм 20 мин. ¬ каждую пробирку по правилам асептики внос€т 0,5-1,0 мл сыворотки  –— и по 0,05 мл 2 % раствора теллурита кали€. —рок хранени€ 10 дней.

2. —реда “ига (глицеринова€ смесь). —мешивают 1 л глицерина и 2 л 0,85 % раствора хлорида натри€ и 15-20 % раствора фосфата натри€ в количестве, чтобы рЌ был 7,8-8,0. —терилизуют текучим паром 3 дн€ подр€д или 20 мин при 0,5 атм.

3. √лицериновый консервант. Ёто разновидность глицериновой смеси, с содержанием солей лити€.

—реды обогащени€.

1. —еленитова€ среда. —мешивают пептон- 0,5 г, селенистокислого натри€ - 0,4 г, фосфата натри€ однозамещенного - 0,7 г, фосфорнокислого двузамещенного натри€ - 0,7 г, лактозы - 0,4 г, дистиллированной воды - до 100 мл. –азливают по пробиркам и флаконам, стерилизуют при 1 атм в течение 20 мин.

2. —реда ћюллера. ¬ стерильные флаконы отвешивают 4,5 г мела, стерилизуют сухим жаром, наливают 90 мл бульона и стерилизуют 30 мин при 1 атм.   каждому флакону в асептических услови€х добавл€ют 2 мл раствора Ћюгол€ и 10 мл раствора гупосульфита натри€.

–аствор Ћюгол€: дистиллированна€ вода 20 мл, йодида кали€ 20 г, йода 25 г. ѕосле растворени€ доливают дистиллированной воды до 100 мл. –аствор гипосульфита натри€: в мерный цилиндр насыпают 50 г гипосульфита натри€ и добавл€ют дистиллированной воды до 100 мл, перемешивают, переливают в бутыль, стерилизуют текучим паром.

”ниверсальные среды.

1. ћ€со-пептонный бульон.

а) ѕриготовление м€сного экстракта:

500 г м€са (без костей, жира и сухожилий) разрезают на мелкие кусочки (пропускают через м€сорубку), заливают 1 л водопроводной воды. ¬ыдерживают сутки в холодильнике или 2 ч в термостате при 370 —. ќтжимают м€со через марлю, кип€т€т на огне 5 мин и дают остыть. ‘ильтруют через ватный фильтр, доливают водой до первоначального объема

б). ѕриготовление м€сопептонного бульона:

¬ 1 л м€сной воды раствор€ют при подогревании и помешивании 10 г (1 %) пептона и 5 г (0,5 %) поваренной соли. ”станавливают слабощелочную реакцию 10 % раствором соды с помощью лакмуса (красна€ лакмусова€ бумага слегка синеет).  ип€т€т 30-40 мин на огне. ƒают остыть, фильтруют через бумажный фильтр и доливают водой до первоначального объема. ќпредел€ют концентрацию водородных ионов калориметрическим путем - в компараторах, подправл€ют рЌ 10 % раствором щелочи или уксусной кислоты.  ип€т€т, остужают, фильтруют, разливают по 5-6 мл в пробирки и по 50-100 мл в колбы, стерилизуют до 20 мин в автоклаве при 120о —.

2. ѕриготовление м€сопептонного агара:

  бульону прибавл€ют 2- 3 % измельченного агара, нагревают до растворени€ агара, остужают агар до 500 —. ƒл€ осветлени€ внос€т белок 1 куриного €йца, смешивают его с двойным объемом холодной воды и внос€т в агар, автоклавируют 45 мин при 1150 — дл€ осаждени€ хлопьев белка. ‘ильтруют агар еще не остывший, разливают в стекл€нную посуду. ¬новь стерилизуют в автоклаве 20 мин при 1200 —. √отов€т скошенный или пр€мой агар, остужа€ пробирки (флаконы, колбы) до застывани€ агара.

3. ѕриготовление перевара (гидролизат) ’оттингера:

а) ћ€со (1 кг) нарезают кусочками, добавл€ют двойной объем воды и кип€т€т 15-20 мин, извлекают, пропускают через м€сорубку и опускают снова в тот же бульон, подщелочив его до рЌ 8,0. ќхлаждают до 400 —, добавл€ют поджелудочную железу, пропущенную через м€сорубку, в объем 100 г на 1 л воды.

б) ‘арш перемешивают, подщелачивают, переливают в бутыль с плотной резиновой пробкой, оставл€ют треть бутылки свободной. ¬нос€т 1-3 % хлороформа, закрывают бутыль, встр€хивают, открывают бутыль на 1 мин дл€ выпускани€ хлороформа

в) ѕровер€ют рЌ (через 1 ч после добавлени€ фермента) и подщелачивают до рЌ 7,4-7,6. —месь оставл€ют на 10-16 дней при комнатной температуре. ѕервые дни подщелачивают и встр€хивают. «а несколько дней до окончани€ экспозиции бутыль не встр€хивать.

г) ѕравильный перевар будет иметь пылевидный осадок и соломенно-желтый раствор. —одержание азота 11,00-12,00 г на 1 л. ѕеревар фильтруют через полотн€нный фильтр или бумажный, разливают в бутыли и колбы и стерилизуют в течение 30 мин при 1200 —.

4. ѕриготовление бульона ’оттингера:

  100 мл перевара ’оттингера добавл€ют 800 мл дистиллированной воды, внос€т 5 г хлористого натри€, 0,2 г однозамещенного фосфорнокислого натри€, устанавливают рЌ 7,4-7,6. –азливают в колбы и пробирки. —терилизуют в течение 20 мин при 1200 —. —одержание аминного азота - 1,00-1,20 г на 1 л.

5. ѕриготовление агара ’оттингера:

  1 л бульона ’оттингера в колбе объемом 2-3- л прибавл€ют 18-25 г мелко нарезанного агара (1,5-2,0 %). Ѕудьон кип€т€т, посто€нно его перемешива€, до расплавлени€ агара. ”станавливают рЌ 7,4-7,6. –асплавленный агар фильтруют через несколько слоев марли и разливают в колбы и пробирки. ѕосуду расставл€ют в специальную тару и стерилизуют в течение 20 мин при 1200 — в стерилизаторе. «атем стерильный агар в посуде используют дл€ посева микроорганизмов или расплавл€ют, разливают в более мелкую посуду и вновь стерилизуют.

Ёлективно-диагностические среды.

1. ѕептонна€ вода:

¬ воду добавл€ют 1 % пептона (1 г на 100 мл воды), устанавливают рЌ 8,0, разливают по 15 мл в пробирки, стерилизуют 20 мин при 1200 —. —реда предназначена дл€ роста холерных вибрионов, при ингибиции остальных бактерий.



<== предыдуща€ лекци€ | следующа€ лекци€ ==>
ћетоды микроскопии | ∆елточно-солевой агар.
ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-05-07; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 2139 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ћибо вы управл€ете вашим днем, либо день управл€ет вами. © ƒжим –он
==> читать все изречени€...

2069 - | 1805 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.015 с.