Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ћетоды микроскопии

ћетод микроскопии позвол€ет изучать морфологию микроорганизмов, подвижность, отношение микробов к красител€м и пр. ќбычно микроскопии подвергают специально приготовленные препараты бактерий в живом или окрашенном виде (фиксированные или убитые микробы). Ќаибольшее распространение в микробиологии получила микроскопи€ окрашенных препаратов - мазков, хот€ исследование микроба в живом виде имеет свои неоспоримые преимущества.

ћикроскопи€ живых неокрашенных клеток

ƒл€ этого примен€ют два способа: вис€чей капли и раздавленной капли. ћикроскопи€ живых клеток позвол€ет изучать бактерии в неизменном виде и обнаруживать подвижность. ” крупных бактерий возможно просматривание более тонкой структуры. ѕри микроскопии живых микроорганизмов, следует предпринимать некоторые меры предосторожности.

¬ис€ча€ капл€. ƒл€ этого метода примен€ют специальные предметные стекла, которые имеют углублени€ в середине.  аплю исследуемого материала помещают на покровное стекло. «атем покровное стекло быстро переворачивают каплей вниз и накладывают на предметное стекло так, чтобы капл€ свободно свисала над углублением предметного стекла. ¬озможен еще один вариант: каплю нанос€т на покровное стекло и сверху накрывают предметным стеклом углублением над каплей. ѕеред этой процедурой предметное стекло недалеко от углублени€ смазывают вазелиновым маслом. ѕосле этого препарат совмещенных стекол быстро переворачивают, чтобы покровное стекло было наверху. ѕрепарат микроскопируют в темном поле.

–аздавленна€ капл€. Ќа предметное стекло нанос€т каплю исследуемого материала и накрывают покровным стеклом.  апл€ не должна выходить за кра€ покровного стекла.

¬озможно окрашивание таких препаратов 0,001 % раствором метиленовой синей или нейтрального красного. ѕрепарат микроскопируют, затем опускают в банку с дез.раствором. ƒл€ микроскопировани€ примен€ют предметные стекла толщиной 1-1,5 мм, а покровные толщиной - 0,15-0,2 мм.

ѕриготовление мазка дл€ окрашивани€

»зучение микробов в окрашенном состо€нии имеет несколько положительных сторон: широка€ доступность практике, простота техники обработки, безопасность микроскопии, возможность более подробного изучени€ их структуры и морфологии.

ѕриготовление окрашенного препарата имеет несколько последовательных стадий: приготовление мазка, высушивание и фиксирование его, окраска мазка.

ѕодготовка предметных стекол и мазков. ѕервым этапом в процессе приготовлени€ мазка €вл€етс€ подготовка предметных стекол. Ќовые стекла кип€т€т в 1 % растворе соды, промывают водой.

—текла бывшие в употреблении помещают на 2 ч в концентрированную серную кислоту, после чего кип€т€т в щелочи (сода, едкий натр), затем промывают водой. √отовые стекла хран€т в скл€нке с притертой пробкой в 90 % спирте. ≈сли они не хранились в спирте, их обезжиривают, например, натира€ кусочком сухого мыла, а затем протирают чистой марлей.  апл€ воды на обезжиренном стекле растекаетс€ по поверхности.

ћазок - это небольша€ часть исследуемого материала, тонким слоем нанесенна€ на предметное стекло, с целью последующего изучени€ морфологии и структуры микроорганизмов. ¬ качестве материала может быть использована кровь, колонии микробов, нативный материал от больных и пр.

≈сли мазок готов€т из бактериальной культуры, выросшей на плотной питательной среде, то на предметное стекло предварительно нанос€т каплю 0,85 % раствора хлорида натри€.

ћатериал на бактериальной петле внос€т в каплю жидкости и круговыми движени€ми растирают и распредел€ют его по предметному стеклу в виде круглого или овального мазка, диаметром 1-2 см2.

ћатериал из гно€ или мокроты забирают с помощью петли или препаровальной иглы. ¬ыбирают гнойные кусочки и нанос€т в центр предметного стекла.

—верху на предметное стекло помещают второе предметное стекло, оставл€€ свободным левый край.

¬з€в за свободные концы предметных стекол, раздвигают их в стороны. ¬ результате чего получаютс€ два мазка на обоих стеклах.

 ровь нанос€т на предметное стекло в виде капли недалеко от левого кра€.

Ѕыстро берут второе предметное стекло в правую руку и прикладывают его к нижнему стеклу под углом в 450, затем под этим же углом придвигают к капле крови, котора€ растекаетс€ по его нижнему краю. ѕлотно прижима€ верхнее стекло под таким же углом к нижнему, быстро продвигают его к правому краю нижнего стекла.

Ќа нижнем стекле получаетс€ равномерный мазок крови, готовый дл€ светового микроскопировани€.

ћазок-отпечаток. Ёто прикладывание среза органа животных или от человека, во врем€ оперативного вмешательства, к предметному стеклу.

«абор бактериальной массы дл€ приготовлени€ мазка. ћикробы извлекают из посевов с помощью бактериальной петли. Ёто платинова€ проволока - один конец которой загнут в виде маленького колечка, а другой вставлен в петледержатель, который и €вл€етс€ ручкой. ѕетлю стерилизуют в пламени спиртовки, после чего ее следует остудить, прикоснувшись к незасе€нной части питательной среды перед вз€тием петлей культуры.

ѕробирку с посевом помещают в левую руку сверху на ребро ладони между большим, указательным и средним пальцами в несколько наклонном положении. ƒолжна быть видна вс€ поверхность питательной среды с культурой. ѕетлю берут в правую руку как писчее перо. ƒалее зажимают пробку пробирки правой рукой между мизинцем и поверхностью ладони, прилежащей к мизинцу, и вытаскивают ее над пламенем спиртовки. ќбжигают кра€ пробирки над пламенем и внос€т стерильную петлю в пробирку, захватывают колечком петли небольшое количество культуры и не прикаса€сь к стенке пробирки вынимают петлю.  ра€ пробирки слегка обжигают и закрывают пробкой. ѕетлю с культурой бактерий внос€т в каплю жидкости на предметном стекле и распредел€ют в виде равномерного мазка. ѕетлю прожигают и став€т на место, а затем и пробирку с культурой.

ƒалее провод€т подсушивание мазка в токе теплого воздуха гор€щей спиртовки или при комнатной температуре. ѕерегрева не допускать. «атем мазок фиксируют, трижды провод€ предметное стекло с мазком над пламенем, дела€ круги диаметром 3 см. ¬ результате этого микроорганизмы должны погибнуть, плотно прикрепившись к стеклу, станов€сь при этом восприимчивыми к окрашиванию.

¬озможна фиксаци€ мазка с помощью химических растворов, потому. что не все препараты можно фиксировать над пламенем (споры, пили, жгутики и пр.). ‘иксатор наливают на мазок, либо в раствор погружают предметное стекло с мазком. Ќаибольшее распространение получили фиксаторы - этиловый спирт (10-15 мин) и смесь Ќикифорова (равные объемы этилового спирта и эфира), фиксаци€ 10-15 мин. ѕриготовленные мазки подвергают окрашиванию.

ќкрашивание мазка. ƒл€ окрашивани€ мазка примен€ют анилиновые красители.   насто€щему времени описано достаточно много способов окраски мазков.

—уществуют простые и сложные методы окраски. Ёто деление основано на количестве используемых красителей. ѕри применении одной из красок - метод называют простым. ѕри последовательном применении нескольких разных красок, метод называют сложным.

ѕростые способы можно использовать дл€ индикации определенного штамма в смеси с другими микробами или среди структур крови, тканей и пр. Ќапример, при поиске бруцелл мазок окрашивают карболовым фуксином. Ѕруцеллы окрашиваютс€ в €рко-красный цвет, а остальные микроорганизмы в сине-голубой. ƒл€ простой окраски в основном примен€ют метиленовую синюю (синий цвет) и фуксин (красный цвет).

–астворы красок нанос€т на мазок (фуксин на 1-2 мин, а метиленовую синюю на -5 мин). «атем краску сливают, мазок промывают водой, просушивают, микроскопируют.

1. ѕримен€ют фуксин водный и карболовый.

а) карболовый фуксин:

фуксин основной - 1 г

карболова€ кислота кристаллическа€ - 5 г

спирт 96 0 - 1 мл

глицерин - 4 капли

вода дистиллированна€ - 9 мл

б) водный фуксин:

карболовый фуксин - 10 г

дистиллированна€ вода - 9 мл

2. ћетиленова€ син€€. √отовитс€ заранее в насыщенном растворе.

а) метиленова€ син€€ - 10 г

спирт 96о - 100 мл

б) щелочна€ син€€:

насыщенный раствор метиленовой синей - 30 г

едкий натр, 1 % - 1 мл

вода дистиллированна€ - 100 мл

 

—ложные методы окраски. —ложное окрашивание примен€ют дл€ более детального вы€влени€ определенных структур микробов, а также дл€ их дифференциации по способу окрашивани€ и пр. Ќаибольшее распространение и значение в микробиологии получили сложные методы окраски по √раму и ÷илю-Ќильсену. ќсобенно универсальным €вл€етс€ метод √рама. ѕрактически все бактерии могут при окраске по √раму про€вить себ€ как грамположительные или грамотрицательные. Ёто может зависеть от многих причин: наличи€ клеточной стенки, присутствие в клеточной стенке пептидогликана и т.д.

ћетод √рама. ѕрактически все микроорганизмы при окраске по √раму приобретают синефиолетовое окрашивание (это грамположительные) или красное (грамотрицательные). ќтрицательность или положительность бактерий при окраске определ€етс€ действием на клетку спирта: при отмывании первой краски спиртом, микробы будут грамотрицательными и их необходимо докрашивать второй краской; если перва€ окраска не отмываетс€, микробы называют грамположительными и они не нуждаетс€ во втором окрашивании. ƒействие спирта зависит от химической структуры клеточной стенки.

ћетодика окраски по √раму заключаетс€ в следующем:

1. Ќа фиксированный мазок кладут небольшой кусок фильтровальной бумаги и наливают на него раствор генцианвиолета на 4-5 мин. ѕосле экспозиции бумагу снимают пинцетом, краситель сливают.

2. Ќаливают на мазок раствор Ћюгол€ на 1-2 мин, далее краску сливают.

3. Ќа мазок наливают спирт 960 на 1 мин, его можно долить еще до прекращени€ отхождени€ фиолетового красител€.

4. ћазок промывают водой.

5. Ќа мазок нанос€т раствор фуксина на 1-2 мин и сливают краску.

6. ћазок промывают водой, обсушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют.

ќкраска по √раму имеет большое диагностическое значение.   грамположительным бактери€м относ€тс€: стафилококки, стрептококки, коринебактерии, микобактерии и др.   грамотрицательным бактери€м относ€тс€: менингококки, сальмонеллы, шигеллы, гонококки, протей и пр.

ќсновна€ ошибка при окраске - переобесцвечивание спиртом. ¬ насто€щее врем€ известна модификаци€ —инева, когда на мазок кладут фильтровальную бумажку, заранее пропитанную генцианвиолетом и высушенную. Ќа такую бумажку нанос€т несколько капель воды, а остальное - по прописи.

ќкраска по ÷илю-Ќильсену. ќна предназначена дл€ окраски кислотоустойчивых микроорганизмов, например, туберкулезных. »менно эту окраску примен€ют при вы€вление туберкулезных палочек в мокроте. —ущность метода заключаетс€ в одновременной окраске и разрыхлении клеточной стенки. ѕоследующие манипул€ции (обработка кислотой и второе докрашивание) дифференцируют кислотоустойчивые и некислотоустойчивые бактерии. ѕрокраске клеток способствует прогревание мазка. Ќекислотоустойчивые бактерии при обработке спиртом и кислотой обесцвечиваютс€ и докрашиваютс€ метиленовой синей в голубой цвет.  ислотоустойчивые микобактерии приобретают красный цвет.

ќкраска по ÷илю-Ќильсену проводитс€ следующим образом:

1. Ќа фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумажку и нанос€т раствор карболового фуксина и прогревают мазок до по€влени€ паров и еще в течение 5 мин.

2. —нимают бумажку, промывают мазок водой.

3. Ќанос€т 5 % раствор серной кислоты или 3 % раствор смеси спирта с кислотой хлороводородной, 1-2 мин дл€ обесцвечивани€.

4. ѕромывают мазок водой.

5. ƒокрашивают мазок раствором метиленовой синей, -5 мин.

6. ѕромывают мазок водой.

ћетод получил признание и имеет диагностическое значение.

ќкраска по ќжешко. ќбычными методами споры не прокрашиваютс€. —ущность метода заключаетс€ в предварительном разм€гчении оболочки споры, а затем окрашивании. ѕри таком способе споры хорошо прокрашиваютс€ и не обесцвечиваютс€ при дальнейшей обработке кислотой. ¬ отличие от спор, вегетативные клетки обесцвечиваютс€ и могут быть видимыми только при дополнительном прокрашивании.

ќкраска проводитс€ следующим способом:

1. ѕросушенный, но не фиксированный мазок, обрабатывают 2 мин 0,5 % раствором хлороводородной кислоты или сол€ной.

2. ѕрогревают препарат до по€влени€ паров, сливают кислоту.

3. ѕромывают водой.

4. ѕрепарат просушивают, фиксируют над пламенем спиртовки.

5. ѕрепарат обрабатывают карболовым фуксином ÷ил€ через фильтровальную бумажку, прогревают до по€влени€ паров и еще 4-5 мин. ‘ильтровальную бумажку следует сн€ть пинцетом, а краску слить.

6. ћазок обрабатывают 5 % серной кислотой, 1-2 мин.

7. Ќа мазок наливают метиленовую синюю, 5 мин.

8. ћазок промывают водой.

ќкраска по Ўефер и ‘ултон. —ущность метода сходна с предыдущим, с некоторыми вариаци€ми. ѕервично проводитс€ не только разрыхление оболочки споры, но и ее окраска. ¬торой краситель докрашивает вегетативные клетки.

ќкраска проводитс€ следующим способом:

1. Ќа фиксированный мазок нанос€т 5 % раствор малахитового зеленого и 3-4 раза нагревают до по€влени€ паров.

2. ѕромывают мазок водой.

3. Ќа мазок нанос€т 0,5 % раствор сафранина на 30 сек, с целью докрашивани€.

4. ћазок промывают водой.

ѕри таком способе окраски споры окрашиваютс€ в зеленый цвет, а вегетативна€ клетка - в красный.

ќкраска по √инсу-Ѕури. Ётот способ основан на двух методах - Ѕури (окраска фона с помощью черной туши) и √инса (прокрашивание клетки фуксином). ћетод примен€ют при вы€влении у бактерий капсулы. ѕри этом капсула остаетс€ неокрашенной, облега€ красную клетку (фуксин) или синюю (метиленова€ син€€), при этом фон окрашен тушью в темный цвет.

ќкраска проводитс€ следующим способом:

1. Ќа предметное стекло нанос€т каплю исследуемого материала. –€дом нанос€т каплю туши (автоклавированной). ќбе капли перемешивают и размазывают по предметному стеклу как при исследовании крови.

2. ѕрепарат просушивают, фиксируют над пламенем спиртовки.

3. ћазок окрашивают фуксином водным или сафранином.

4. ѕромывают мазок водой.

ѕри этом фон темный, бактерии окрашиваютс€ в красный цвет, их облегает кайма неокрашенной капсулы.

ќкраска по Ќейссеру. —пособ основан на избирательном отношении микробов к щелочным (волютин) и кислым (цитоплазма) красител€м.

ќкраска проводитс€ следующим образом:

1. Ќа фиксированный мазок нанос€т ацетат синьки Ќейссера, 2-3 мин.

2. Ќе промыва€, обрабатывают мазок раствором Ћюгол€, 10-30 сек.

3. ћазок промывают водой.

4. Ќа мазок нанос€т водный раствор везувина или хрезоидина, 0,5 - 1 мин.

5. ћазок промывают водой.

ѕри таком способе окраски зерна волютина клеток окрашиваютс€ в темно-синий цвет, а цитоплазма докрашиваетс€ в желтый.

ќкраска по –омановскому-√имзе. —ущность метода заключаетс€ в избирательном окрашивании базофильных и оксифильных элементов клеток.

ќкраска проводитс€ следующим способом:

1. ћазок фиксируют химическим способом.

2. –аствор краски, приготовленный непосредственно перед употреблением, нанос€т на мазок, через 1 ч краску сливают.

3. ѕромывают мазок водой.

4. Ќа мазок нанос€т 10 % раствор метиленовой синей, на 20-30 сек.

5. ѕрепарат промывают водой.

ѕри этом способе окраски цитоплазма окрашиваетс€ в голубой цвет, €дра клеток и зернистость в красно-фиолетовый. Ёто основной метод изучени€ морфологии паразитов крови и форменных элементов крови.

ќкраска по Ћеффлеру. Ётим способом окрашивают жгутики, вначале протравл€€ их, а затем докрашива€.

ќкраска проводитс€ следующим способом:

1. ƒл€ приготовлени€ мазка используют 10-15 суточные культуры.

2. ¬звесь бактерий готов€т на дистиллированной воде, дл€ чего бактериальной петлей берут материал не прикаса€сь к конденсационной воде и перенос€т в пробирку с 2 мл дистиллированной воды.

3. Ќе взбалтыва€ воду в пробирке, держат петлю до полного распределени€ культуры в воде, образующей тонкую взвесь. ѕробирку став€т в термостат при 37о — на 30 мин.

4. ѕредметное стекло провод€т над пламенем спиртовки и дают остыть.

5. ѕастеровской пипеткой нанос€т на стекло 5 капель взвеси и подсушивают на воздухе, а затем быстро провод€т над пламенем.

6. Ќа фиксированный мазок нанос€т смесь дл€ протравы, подогрева€ до по€влени€ паров, 1 мин.

7. ћазок промывают водой.

8. Ќа мазок нанос€т фуксин ÷ил€, слабо подогревают, 3-4 мин.

9. ћазок промывают водой.

ѕри таком способе окраски жгутики набухают, станов€тс€ видимыми и прокрашенными в красный цвет.

ќкраска по «дродовскому. ћетод примен€ют дл€ окраски риккетсий.

ќкраска проводитс€ следующим способом.

1. Ќа фиксированный в пламене мазок нанос€т водный раствор фуксина ÷ил€, 5 мл.

2. Ќе промыва€, нанос€т на мазок 0,5 % раствор лимонной кислоты, 1-3 сек.

3. ѕромывают мазок водой.

4. Ќа мазок нанос€т 10 % раствор метиленовой синей, 20-30 сек.

5. ћазок промывают водой.

ѕри таком способе риккетсии окрашиваютс€ в розовый цвет (исключение составл€ют цуцугамуши, которые окрашивают по –омановскому-√имзе).

ќкраска по ћорозову. —пособ предназначен дл€ окрашивани€ вирусов, жгутиков и пр. ≈ще его называют серебрением.

ќкраску провод€т следующим образом:

1. Ќефиксированный мазок помещают в стакан с дистиллированной водой и фиксируют раствором є 1, одну мин.

2. ѕрепарат вынимают из стакана, промывают водой, протравливают раствором є 2 и нагревают до по€влени€ паров, 1 мин.

3. ћазок промывают водой, после чего окрашивают раствором є 3, прогрева€ его до по€влени€ темно-коричневой окраски, 1-2 мин.

ѕри таком способе окрашивани€ вирусы или жгутики приобретают темный цвет.

ќкраска по ћуромцеву. Ёто простой способ вы€влени€ телец Ќегри из суспензии аммониевого рога, полученной растиранием в ступе. ћазок фиксируют в смеси Ќикифорова.

1. ѕромывают мазок водой.

2. Ќа мазок нанос€т синьку ћансона, 5-10 мин.

3. ѕромывают мазок 10 % раствором танина, 2-3 мин.

4. Ќанос€т на мазок спирт 100о на 1,0 мин, сливают и просушивают.

ѕри таком способе окраски тельца Ќегри окрашиваютс€ бледно-фиолетовым цветом на бесцветном фоне.

ѕрописи некоторых красителей и растворов

1. —инька Ћеффлера:

насыщенный спиртовый раствор метиленовой синей - 30 мл

 ќЌ 10 % - 1 мл

дистиллированна€ вода - 100 мл

2.  раситель Ќейссера:

1. метиленова€ син€€ - 0,1 г

спирт 960 - 2 мл

крепка€ уксусна€ кислота - 5 мл

дистиллированна€ вода - 100 мл

2. везувин - 2 г

спирт 960 - 60 мл

дистиллированна€ вода - 40 мл

—месь кип€т€т, по охлаждении фильтруют.

3.  раситель ћорозова:

–аствор є 1 (жидкость –унге):

лед€на€ уксусна€ кислота - 1 мл

формалин 40 % - 2 мл

дистиллированна€ вода - 100 мл

–аствор є 2 (протрава):

танин - 5 г

карболова€ кислота жидка€ - 1 мл

дистиллированна€ вода - 100 мл

–аствор є 3 (краситель):

азотнокислое серебро - 5 г

дистиллированна€ вода - 100 мл

4.  раситель –омановского-√имзе:

—одержит смесь красителей: метиленова€ син€€, эозин, азур.   10 мл воды дистиллированной, рЌ 6,8-7,0, перед окраской добавл€ют 10 капель краски и тотчас наливают на мазок.

5.  раситель по √раму.

1. карболовый генцианвиолет:

генцианвиолет - 1 г

кислота карболова€ - 2 г

спирт 960 - 10 мл

дистиллированна€ вода - 100 мл

2. раствор Ћюгол€:

калий йодистый - 2 г

йод кристаллический - 1 г

дистиллированна€ вода - 300 мл.

ћорфологи€ и структура микроорганизмов —ложные методы окраски. —ложное окрашивание примен€ют дл€ более детального вы€влени€ определенных структур микробов, а также дл€ их дифференциации по способу окрашивани€ и пр. Ќаибольшее распространение и значение в микробиологии получили сложные методы окраски по √раму и ÷илю-Ќильсену. ќсобенно универсальным €вл€етс€ метод √рама. ѕрактически все бактерии могут при окраске по √раму про€вить себ€ как грамположительные или грамотрицательные. Ёто может зависеть от многих причин: наличи€ клеточной стенки, присутствие в клеточной стенке пептидогликана и т.д.

ћетод √рама. ѕрактически все микроорганизмы при окраске по √раму приобретают синефиолетовое окрашивание (это грамположительные) или красное (грамотрицательные). ќтрицательность или положительность бактерий при окраске определ€етс€ действием на клетку спирта: при отмывании первой краски спиртом, микробы будут грамотрицательными и их необходимо докрашивать второй краской; если перва€ окраска не отмываетс€, микробы называют грамположительными и они не нуждаетс€ во втором окрашивании. ƒействие спирта зависит от химической структуры клеточной стенки.

ћетодика окраски по √раму заключаетс€ в следующем:

7. Ќа фиксированный мазок кладут небольшой кусок фильтровальной бумаги и наливают на него раствор генцианвиолета на 4-5 мин. ѕосле экспозиции бумагу снимают пинцетом, краситель сливают.

8. Ќаливают на мазок раствор Ћюгол€ на 1-2 мин, далее краску сливают.

9. Ќа мазок наливают спирт 960 на 1 мин, его можно долить еще до прекращени€ отхождени€ фиолетового красител€.

10. ћазок промывают водой.

11. Ќа мазок нанос€т раствор фуксина на 1-2 мин и сливают краску.

12. ћазок промывают водой, обсушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют.

ќкраска по √раму имеет большое диагностическое значение.   грамположительным бактери€м относ€тс€: стафилококки, стрептококки, коринебактерии, микобактерии и др.   грамотрицательным бактери€м относ€тс€: менингококки, сальмонеллы, шигеллы, гонококки, протей и пр.

ќсновна€ ошибка при окраске - переобесцвечивание спиртом. ¬ насто€щее врем€ известна модификаци€ —инева, когда на мазок кладут фильтровальную бумажку, заранее пропитанную генцианвиолетом и высушенную. Ќа такую бумажку нанос€т несколько капель воды, а остальное - по прописи.

ќкраска по ÷илю-Ќильсену. ќна предназначена дл€ окраски кислотоустойчивых микроорганизмов, например, туберкулезных. »менно эту окраску примен€ют при вы€вление туберкулезных палочек в мокроте. —ущность метода заключаетс€ в одновременной окраске и разрыхлении клеточной стенки. ѕоследующие манипул€ции (обработка кислотой и второе докрашивание) дифференцируют кислотоустойчивые и некислотоустойчивые бактерии. ѕрокраске клеток способствует прогревание мазка. Ќекислотоустойчивые бактерии при обработке спиртом и кислотой обесцвечиваютс€ и докрашиваютс€ метиленовой синей в голубой цвет.  ислотоустойчивые микобактерии приобретают красный цвет.

ќкраска по ÷илю-Ќильсену проводитс€ следующим образом:

7. Ќа фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумажку и нанос€т раствор карболового фуксина и прогревают мазок до по€влени€ паров и еще в течение 5 мин.

8. —нимают бумажку, промывают мазок водой.

9. Ќанос€т 5 % раствор серной кислоты или 3 % раствор смеси спирта с кислотой хлороводородной, 1-2 мин дл€ обесцвечивани€.

10. ѕромывают мазок водой.

11. ƒокрашивают мазок раствором метиленовой синей, -5 мин.

12. ѕромывают мазок водой.

ћетод получил признание и имеет диагностическое значение.

ќкраска по ќжешко. ќбычными методами споры не прокрашиваютс€. —ущность метода заключаетс€ в предварительном разм€гчении оболочки споры, а затем окрашивании. ѕри таком способе споры хорошо прокрашиваютс€ и не обесцвечиваютс€ при дальнейшей обработке кислотой. ¬ отличие от спор, вегетативные клетки обесцвечиваютс€ и могут быть видимыми только при дополнительном прокрашивании.

ќкраска проводитс€ следующим способом:

9. ѕросушенный, но не фиксированный мазок, обрабатывают 2 мин 0,5 % раствором хлороводородной кислоты или сол€ной.

10. ѕрогревают препарат до по€влени€ паров, сливают кислоту.

11. ѕромывают водой.

12. ѕрепарат просушивают, фиксируют над пламенем спиртовки.

13. ѕрепарат обрабатывают карболовым фуксином ÷ил€ через фильтровальную бумажку, прогревают до по€влени€ паров и еще 4-5 мин. ‘ильтровальную бумажку следует сн€ть пинцетом, а краску слить.

14. ћазок обрабатывают 5 % серной кислотой, 1-2 мин.

15. Ќа мазок наливают метиленовую синюю, 5 мин.

16. ћазок промывают водой.

ќкраска по Ўефер и ‘ултон. —ущность метода сходна с предыдущим, с некоторыми вариаци€ми. ѕервично проводитс€ не только разрыхление оболочки споры, но и ее окраска. ¬торой краситель докрашивает вегетативные клетки.

ќкраска проводитс€ следующим способом:

5. Ќа фиксированный мазок нанос€т 5 % раствор малахитового зеленого и 3-4 раза нагревают до по€влени€ паров.

6. ѕромывают мазок водой.

7. Ќа мазок нанос€т 0,5 % раствор сафранина на 30 сек, с целью докрашивани€.

8. ћазок промывают водой.

ѕри таком способе окраски споры окрашиваютс€ в зеленый цвет, а вегетативна€ клетка - в красный.

ќкраска по √инсу-Ѕури. Ётот способ основан на двух методах - Ѕури (окраска фона с помощью черной туши) и √инса (прокрашивание клетки фуксином). ћетод примен€ют при вы€влении у бактерий капсулы. ѕри этом капсула остаетс€ неокрашенной, облега€ красную клетку (фуксин) или синюю (метиленова€ син€€), при этом фон окрашен тушью в темный цвет.

ќкраска проводитс€ следующим способом:

5. Ќа предметное стекло нанос€т каплю исследуемого материала. –€дом нанос€т каплю туши (автоклавированной). ќбе капли перемешивают и размазывают по предметному стеклу как при исследовании крови.

6. ѕрепарат просушивают, фиксируют над пламенем спиртовки.

7. ћазок окрашивают фуксином водным или сафранином.

8. ѕромывают мазок водой.

ѕри этом фон темный, бактерии окрашиваютс€ в красный цвет, их облегает кайма неокрашенной капсулы.

ќкраска по Ќейссеру. —пособ основан на избирательном отношении микробов к щелочным (волютин) и кислым (цитоплазма) красител€м.

ќкраска проводитс€ следующим образом:

6. Ќа фиксированный мазок нанос€т ацетат синьки Ќейссера, 2-3 мин.

7. Ќе промыва€, обрабатывают мазок раствором Ћюгол€, 10-30 сек.

8. ћазок промывают водой.

9. Ќа мазок нанос€т водный раствор везувина или хрезоидина, 0,5 - 1 мин.

10. ћазок промывают водой.

ѕри таком способе окраски зерна волютина клеток окрашиваютс€ в темно-синий цвет, а цитоплазма докрашиваетс€ в желтый.

ќкраска по –омановскому-√имзе. —ущность метода заключаетс€ в избирательном окрашивании базофильных и оксифильных элементов клеток.

ќкраска проводитс€ следующим способом:

6. ћазок фиксируют химическим способом.

7. –аствор краски, приготовленный непосредственно перед употреблением, нанос€т на мазок, через 1 ч краску сливают.

8. ѕромывают мазок водой.

9. Ќа мазок нанос€т 10 % раствор метиленовой синей, на 20-30 сек.

10. ѕрепарат промывают водой.

ѕри этом способе окраски цитоплазма окрашиваетс€ в голубой цвет, €дра клеток и зернистость в красно-фиолетовый. Ёто основной метод изучени€ морфологии паразитов крови и форменных элементов крови.

ќкраска по Ћеффлеру. Ётим способом окрашивают жгутики, вначале протравл€€ их, а затем докрашива€.

ќкраска проводитс€ следующим способом:

10. ƒл€ приготовлени€ мазка используют 10-15 суточные культуры.

11. ¬звесь бактерий готов€т на дистиллированной воде, дл€ чего бактериальной петлей берут материал не прикаса€сь к конденсационной воде и перенос€т в пробирку с 2 мл дистиллированной воды.

12. Ќе взбалтыва€ воду в пробирке, держат петлю до полного распределени€ культуры в воде, образующей тонкую взвесь. ѕробирку став€т в термостат при 37о — на 30 мин.

13. ѕредметное стекло провод€т над пламенем спиртовки и дают остыть.

14. ѕастеровской пипеткой нанос€т на стекло 5 капель взвеси и подсушивают на воздухе, а затем быстро провод€т над пламенем.

15. Ќа фиксированный мазок нанос€т смесь дл€ протравы, подогрева€ до по€влени€ паров, 1 мин.

16. ћазок промывают водой.

17. Ќа мазок нанос€т фуксин ÷ил€, слабо подогревают, 3-4 мин.

18. ћазок промывают водой.

ѕри таком способе окраски жгутики набухают, станов€тс€ видимыми и прокрашенными в красный цвет.

ќкраска по «дродовскому. ћетод примен€ют дл€ окраски риккетсий.

ќкраска проводитс€ следующим способом.

6. Ќа фиксированный в пламене мазок нанос€т водный раствор фуксина ÷ил€, 5 мл.

7. Ќе промыва€, нанос€т на мазок 0,5 % раствор лимонной кислоты, 1-3 сек.

8. ѕромывают мазок водой.

9. Ќа мазок нанос€т 10 % раствор метиленовой синей, 20-30 сек.

10. ћазок промывают водой.

ѕри таком способе риккетсии окрашиваютс€ в розовый цвет (исключение составл€ют цуцугамуши, которые окрашивают по –омановскому-√имзе).

ќкраска по ћорозову. —пособ предназначен дл€ окрашивани€ вирусов, жгутиков и пр. ≈ще его называют серебрением.

ќкраску провод€т следующим образом:

4. Ќефиксированный мазок помещают в стакан с дистиллированной водой и фиксируют раствором є 1, одну мин.

5. ѕрепарат вынимают из стакана, промывают водой, протравливают раствором є 2 и нагревают до по€влени€ паров, 1 мин.

6. ћазок промывают водой, после чего окрашивают раствором є 3, прогрева€ его до по€влени€ темно-коричневой окраски, 1-2 мин.

ѕри таком способе окрашивани€ вирусы или жгутики приобретают темный цвет.

ќкраска по ћуромцеву. Ёто простой способ вы€влени€ телец Ќегри из суспензии аммониевого рога, полученной растиранием в ступе. ћазок фиксируют в смеси Ќикифорова.

5. ѕромывают мазок водой.

6. Ќа мазок нанос€т синьку ћансона, 5-10 мин.

7. ѕромывают мазок 10 % раствором танина, 2-3 мин.

8. Ќанос€т на мазок спирт 100о на 1,0 мин, сливают и просушивают.

ѕри таком способе окраски тельца Ќегри окрашиваютс€ бледно-фиолетовым цветом на бесцветном фоне.

ѕрописи некоторых красителей и растворов

2. —инька Ћеффлера:

насыщенный спиртовый раствор метиленовой синей - 30 мл

 ќЌ 10 % - 1 мл

дистиллированна€ вода - 100 мл

3.  раситель Ќейссера:

1. метиленова€ син€€ - 0,1 г

спирт 960 - 2 мл

крепка€ уксусна€ кислота - 5 мл

дистиллированна€ вода - 100 мл

2. везувин - 2 г

спирт 960 - 60 мл

дистиллированна€ вода - 40 мл

—месь кип€т€т, по охлаждении фильтруют.

4.  раситель ћорозова:

–аствор є 1 (жидкость –унге):

лед€на€ уксусна€ кислота - 1 мл

формалин 40 % - 2 мл

дистиллированна€ вода - 100 мл

–аствор є 2 (протрава):

танин - 5 г

карболова€ кислота жидка€ - 1 мл

дистиллированна€ вода - 100 мл

–аствор є 3 (краситель):

азотнокислое серебро - 5 г

дистиллированна€ вода - 100 мл

4.  раситель –омановского-√имзе:

—одержит смесь красителей: метиленова€ син€€, эозин, азур.   10 мл воды дистиллированной, рЌ 6,8-7,0, перед окраской добавл€ют 10 капель краски и тотчас наливают на мазок.

5.  раситель по √раму.

1. карболовый генцианвиолет:

генцианвиолет - 1 г

кислота карболова€ - 2 г

спирт 960 - 10 мл

дистиллированна€ вода - 100 мл

2. раствор Ћюгол€:

калий йодистый - 2 г

йод кристаллический - 1 г

дистиллированна€ вода - 300 мл.

ћикроорганизмы достаточно многообразны по морфологии, однако, с определенными нат€жками их можно поделить на несколько групп: кокковидные, бактериевидные, вибриоспировидные, мицелиевидные, вирусовидные, протистовидные. Ёти группы могут делитьс€ на подгруппы. –азличи€ морфологии микробов между этими группами и внутри их имеет определенное диагностическое значение.

 окковидные. Ёто бактерии шаровидной формы. —корости их размножени€ и расхождени€ клеток различны, что отражаетс€ на расположении кокков в мазках. –азличают несколько разновидностей расположени€ кокковидных. ≈сли бактерии быстро расход€тс€ после делени€ и в силу этого располагаютс€ в мазке в виде монококков (по отдельности), то их называют микрококки. ≈сли кокки дел€тс€ в одной плоскости и недостаточно быстро расход€тс€, то в мазках они выгл€д€т как диплококки, т.е. парные кокки. ѕри меньшей скорости разделени€ бактерий образуютс€ цепочки кокков, имеющие родовое название - стрептококки.

≈сли бактерии дел€тс€ в трех плоскост€х и медленно расход€тс€, то в мазках с плотной агаровой среды они образуют характерные скоплени€ в виде гроздьев винограда и имеют родовое название - стафилококки. “етракокки образуютс€ в результате делени€ в двух плоскост€х и благодар€ относительно не высокой скорости расхождени€ кокков - в мазках образуютс€ четверки кокков по две пары. —арцины - это кокки, которые расположены в мазках в виде пакетов или тюков, по 8, 16, 32 и более клеток, при делении родительской клетки сразу в нескольких плоскост€х.

—реди кокковидных - стрептококков, стафилококков, диплококков имеетс€ достаточно много видов бактерий, патогенных и условно-патогенных дл€ человека. Ќапример, вид Saphylococcus aureus вызывает у человека около 100 заболеваний - от юношеских угрей до перитонита, сепсиса и др. ƒиплококки - Neisseria gonorrhea вызывают у человека гонорею, а Neisseria meningitidis -менингит и др. —трептококки вызывают гнойные поражени€ тканей - рожа, ревматизм и др.

Ѕактериевидные. Ёти бактерии представлены цилиндрическими или палочковидными формами бактерий.

¬ 1875 г немецкий ботаник √.  он обнаружил у сенной палочки споры и стал именовать бактериевидные формы, образующие споры - бациллами, а культуры не образующие споры - бактери€ми. ќбразующие споры палочки, которые имеют веретенообразную форму, назвали клостриди€ми. ѕо расположению клеток бактерий различают: диплобактерии - располагающиес€ в мазках попарно и стрептобактерии - располагающиес€ в виде цепочек. Ѕактериевидные различаютс€ по длине, ширине, форме концов, расположению спор и пр. Ќекоторые бактерии окрашиваютс€ по ÷илю-Ќильсену (микобактерии), а остальные - по √раму.

—реди бактериевидных следует особо выделить микоплазмы. ћикоплазмы отличаютс€ отсутствием клеточной стенки. Ёто мелкие, √рам (-) бактерии (0,12-0,25 нм), содержащие трехслойную ÷ѕћ. ќни чувствительны к осмотическому давлению и нечувствительны к пенициллинам, ввиду отсутстви€ пептидогликана. ћикоплазмы полиморфны. »меют 92 вида, часть из них патогенны дл€ человека.

Ѕактериевидные вызывают множество разнообразных заболеваний у человека: гнойно-воспалительные, дизентерию, сальмонеллезы, пневмонии, сибирскую €зву, чуму, дифтерию, коклюш и др.

¬ибриоспировидные. Ёто подвижные бактерии, имеющие извитую и спиралевидную формы. ¬ мазках имеют несколько морфологических форм: извитые - четверть витка спирали, спириллы - в виде нескольких крупных завитков спирали, спирохеты - имеющие несколько мелких витков спирали. »звитые имеют один жгутик (Vibrio cholerae).

“аблица 8.

ћорфологические признаки спирохет

–од  оличество завитков ’арактер движени€ ќкраска по –ома- новскому-√имзе
Borrelia 3-10 крупных, неравном. толчкообразные, сгибате- льные, поступательные сине-фиолетовые
Treponema 8-14, среднекрупных плавное, сгибательное, вращательное, поступательн. бледно-розовые
Leptospira ћногочисленные первич- ные, S-образные, вторичн. активное вращательно- поступательное розово-сиреневые

 

—пирохеты в зависимости от количества и формы завитков подраздел€ют на три формы: трепонемы Ц имеют до 14 средне-крупных завитков, лептоспиры - множество мелких завитков, боррелии Ц 3-10 крупных, неравномерных завитков.

—реди вибриоспировидных встречаютс€ виды бактерий, про€вл€ющие патогенные свойства в отношении людей: вызыва€ боррелиозы, лептоспирозы, сифилис, холеру и пр.

¬ирусовидные. Ёто внутриклеточные генетические паразиты. ¬неклеточную форму вирусов называют вирионом. ќни имеют палочковидную или сферическую форму, проход€т через бактериальные фильтры. –азмеры варьируют от 15 до 500 нм.   вирусовидным относ€т разнообразные вирусы, в том числе Ц дефектные вирусы. ¬се вирусы дел€т на семейства и подсемейства и роды. ѕатогенные дл€ человека и животных вирусы составл€ют 20 семейств. ¬ирусы дел€т на –Ќ  и ƒЌ  содержащие. ¬ирусы - это одна из мельчайших форм существовани€ жизни. ќни €вл€ютс€ паразитами не только животного и растительного миров, но и микрофлоры, включа€ вирусы. Ќа сегодн€ сама€ маленька€ инфекционна€ частица - прион. Ёто белкова€ частица, котора€ не имеет генетического материала, но про€вл€ет инфекционные свойства. «аболевани€ у человека и животных, вызываемые прионом, поражают мозг, с об€зательным смертельным исходом.

ћицелиевидные. Ёто огромна€ группа, объединенна€ на основе общности многих признаков и образа жизни. ћицелий у микроорганизмов этой группы бывает воздушный и субстратный. ѕредставители группы дел€тс€ на две неравноценные подгруппы: грибы и актиномицеты (таблица є 9).

“аблица 9

ћорфологические признаки некоторых грибов

–од ћицелий —поры
  вегетативный репродуктивный тип расположение
Mucor несептированный спорангиеносец эндоспоры в спорангии
Aspergillus септированный конидиеносец экзоспоры-конидии в виде лейки
Penicillum септированный конидиеносец то же в виде кисточки

 

јктиномицеты имеют вид длинных несептированных гиф, не образуют спор и жгутиков.

√рибы бывают низшие и высшие. »меют дифференцированное €дро, способны к половому и бесполому видам размножени€.

—реди этой группы имеютс€ виды, патогенные дл€ людей. јктиномицты вызывают у восприимчивых людей актиномикоз, а грибы - микозы.

ѕротистовидные. Ёто многочисленна€ группа одноклеточных микроорганизмов, распространенных в природе. ќни могут быть шаровидной, овальной, сплюснутой или разветвленной формы, размером 5-20 мкм. ќбычно подвижные и пластичные, образуют цисты в неблагопри€тных услови€х. Ќаиболее широко распространены жгутиконосцы, саркодовые, инфузории реснитчатые. —реди саркодовых имеютс€ амебы раковинные и голые.

ѕротистовидные имеют виды, патогенные дл€ человека, вызыва€, например, амебную дизентерию.

—пособ измерени€ микробной клетки

ћикроскопические объекты измер€ют в нанометрах (нм) или в микрометрах (мкм). ¬ 1 мкм содержитс€ 1000 нм, в 1 мм содержитс€ 1000 мкм. ƒл€ измерени€ клеток примен€ют окул€р-микрометр и объект-микрометр. ќкул€р-микрометр - это стекл€нна€ пластинка в окул€ре, на которой в центре нанесена шкала с 50 делени€ми. ќбъект-микрометр - это стекло, в центре которого находитс€ шкала, поделенна€ на 100 частей. ќбычно каждое деление шкалы содержит 10 мкм.

ќбъект-микрометр устанавливают на предметный столик, передвига€ который винтами совмещают одно из делений с одним из делений окул€ра-микрометра. ќтмечают число делений объект-микрометра, в которые укладываетс€ полное число делений окул€р-микрометра. Ётим устанавливаетс€ величина делений окул€р-микрометра. «амен€ют объект-микрометр на исследуемый препарат, размеры которого определ€ют линейкой окул€р-микрометра.

—труктура микроорганизмов

 летки микроорганизмов имеют внутренние и поверхностные структуры, среди которых различают об€зательные и встречающиес€ только у определенных групп микробов.

—троение бактериальной клетки.   внутренним широко распространенным структурам относ€т: цитоплазму, генофор, включени€, рибосомы.   внешним об€зательным структурам относ€т ÷ѕћ и клеточную стенку (за небольшим исключением). Ќеоб€зательными дл€ многих микроорганизмов внутренними структурами €вл€ютс€ волютиновые зерна и спора, а внешними - капсула, жгутики, пили и пр.

√енофор или нуклеойд. ќн содержит дезоксирибонуклеиновую кислоту (ƒЌ ) в форме свернутого кольца. ƒЌ  называют хромосомой по аналогии с эукариотами. √енофор основной носитель генетической информации в клетке. —остоит из набора генов, которые расположены в определенном пор€дке.  роме ƒЌ  в клетке могут находитс€ плазмиды и др. внехромосомные генетические структуры.

÷итоплазма. Ёто внутренн€€ среда клетки, в которой располагаютс€ генофор (ƒЌ ), рибосомы, полисомы, включени€, ферменты, плазмиды.

–ибосомы состо€т из –Ќ  и белка. ќни участвуют в процессе синтеза белка.

√ранулы содержат запасные вещества. √ранулы волютина окрашивают по Ќейссеру.

 леточна€ стенка. Ёто внешн€€ структура клетки, имеет неодинаковое строение у разных групп бактерий. ¬ зависимости от строени€ клеточной стенки микроорганизмов, они могут окрашиватьс€ как грамотрицательные или грамположительные. Ёто определ€етс€ количеством пептидогликана и других составных клеточной стенки.

÷итоплазматическа€ мембрана. ќб€зательный внешний элемент бактерий. ќтдел€ет цитоплазму от клеточной стенки. »меет трехслойную структуру. Ёто белково-липидный комплекс. ÷ѕћ полупроницаема и регулирует транспорт веществ в бактериальную клетку. ”частвует в образовании мезосом. Ёто важный элемент клетки.

—поры. Ёто тельца сферической или эллипсойдной формы, устойчивые к воздействию неблагопри€тных факторов, образуемые некоторыми бактери€ми. »х называют бациллами. —поры образуют такие роды как Bacillus, Clostridium, Desulfotomaculum, отдельные кокки и спириллы. —порообразование начинаетс€, когда микробы испытывают недостаток в питательных веществах. —поры сохран€ютс€ в таких услови€х, когда вегетативные клетки гибнут. ¬ благопри€тных услови€х спора вновь может прорастать в вегетативную клетку, т.к. содержит генетический материал. —поры окрашивают по ќжешко.

∆гутики. —труктурный элемент, предназначенный дл€ движени€ бактерий в жидких средах. Ѕактерии могут иметь один жгутик и их называют монотрихии (Vibrio cholerae), один пучок жгутиков на одном конце - лофотрихии, по пучку жгутиков на обоих концах клетки - амфитрихии, множество жгутиков вокруг клетки - перетрихии. ∆гутики окрашиваютс€ по методу Ћеффлера.

‘имбрии. ¬нешний структурный элемент, короче и тоньше жгутиков, которые в большом количестве окружают клетку как "бахрома". ¬ыполн€ют роль факторов адгезии, прикрепл€€сь к определенным рецепторам других клеток.

ѕили. ¬нешний структурный элемент. ¬ зависимости от функции и структуры, пили поделены на несколько типов. ѕили 1, 3 и 4 типа функционируют как факторы адгезии. Ѕолее длинные пили, со структурой полого цилиндра, участвуют в переносе генетического материала от одной бактериальной клетке к другой.

 апсула. явл€етс€ внешним структурным элементом. Ёто сложный комплекс таких соединеиий как полисахариды и полипептиды.  апсула не окрашиваетс€ анилиновыми красител€ми. ќна не преп€тствует проникновению в клетку питательных веществ, €вл€€сь защитным слоем дл€ клетки.  апсула преп€тствует фагоцитозу бактерий. ƒл€ обнаружени€ капсулы мазок окрашивают по комбинированному методу √инса-Ѕури.

¬ирусы. Ёто ультрамикроскопические облигатные внутриклеточные паразиты. ќни были открыты в 1892 г ƒ.ћ. »вановским. ¬ирусы содержат нуклеиновые кислоты одного из двух типов (ƒЌ  или –Ќ ). Ќуклеинова€ кислота окружена чехлом из белков, называемых капсидом.—труктурный элемент, состо€щий из белков и нуклеиновой кислоты, называют нуклеокапсид.  апсомеры - комплекс капсида и вирусного генома. ќни скомпонованы по двум типам симметрии: сферической и спиралевидной. Ќекоторые вирусы на поверхности имеют шипы, образованные белками - гемагглютининами и нейраминидазой. ¬ирусы окрашивают по ћорозову.

јктиномицеты.  летки актиномицет имеют те же структурные элементы, что и бактерии: клеточную стенку, ÷ѕћ, в цитоплазме содержитс€ нуклеойд, рибосомы и пр. элементы. ќсновным морфологическим признаком актиномицетов €вл€етс€ ветв€ща€с€ форма клеток, имеющих вид коротких палочек или длинных нитевидных образований, напоминающих мицелий грибов. ћицелий бывает у актиномицетов субстратным или воздушным.

–азмножение актиномицетов происходит вегетативным путем (обрывками мицели€) и спорами. —пороносцы актиномицетов бывают волнистыми, пр€мыми и спиральными.

—реди актиномицетов встречаютс€ сапрофитные и патогенные виды. ѕочвенные виды актиномицетов продуцируют многочисленные антибиотики.

√рибы. »меют микро- и макроскопическое строение. ƒлинные нити - гифы, которые переплета€сь, образуют мицелий. —поры грибов располагаютс€ внутри мицели€ или внутри его. ѕлодонос€щие гифы грибов Aspergillus и Penicillum называют конидиеносцами. јскоспоры наход€тс€ в асках - сумках. Ѕластоспоры образуютс€ в результате почковани€ клетки. —реди грибов различают высшие и низшие. —читают, что известных грибов более 500000 видов.



<== предыдуща€ лекци€ | следующа€ лекци€ ==>
ћикроскоп и иммерсионна€ система | ѕитательные среды
ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-05-07; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 5304 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ќаука Ч это организованные знани€, мудрость Ч это организованна€ жизнь. © »ммануил  ант
==> читать все изречени€...

2042 - | 1854 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.255 с.