При определении количества лейкоцитов кровь разводят в пробирке в 21 (≈20) раз разводящей жидкостью, которая состоит из 3-5% раствора уксусной кислоты, подкрашенной метиленовым синим (жидкость Тюрка). Лейкоциты подсчитывают в 100 больших (1600 маленьких) квадратах сетки Горяева, неразделенных линиями.
Количество лейкоцитов в 1 л крови вычисляют по формуле:
где х - количество лейкоцитов в 1 л исследуемой крови; а - количество лейкоцитов, найденное при подсчете; 1/400 мкл - объем малого квадрата; 20 - степень разведения крови; 1600 - число малых квадратов; 106 - коэффициент для пересчета по международной системе единиц СИ.
Для работы необходимы: микроскоп, счетная камера, стеклянные палочки, пипетки от гемометра Сали, мундштук, пипетка на 1·103 л (1 мл), пробирки длиной 1·10-1 м (10 см) и диаметром 1·10-2 м (1 см), скарификаторы, спирт, вата, спиртовой раствор йода, разводящая жидкость.
Ход работы. 1. В предварительно высушенную, чистую пробирку отмерить 4·10-4 л (0,4 мл) разводящей жидкости и закрыть ее пробкой.
2. Сделать укол скарификатором в мякоть пальца и набрать пипеткой от гемометра Сали 20 мм3 крови.
3. Выдуть кровь в пробирку с разводящей жидкостью, промыть ею пипетку, содержимое пробирки закрыть пробкой и осторожно перемешать при вертикальном положении пробирки.
4. Заполнить счетную камеру.
5. Под большим увеличением микроскопа сосчитать лейкоциты в 100 больших (1600 маленьких) квадратах.
6. Вычислить количество лейкоцитов в 1 л крови по формуле.
Задание 2. Определение гемоглобина в крови с помощью гемометра Сали
Метод основан на калориметрическом принципе, т. е. на сравнении цвета исследуемого и стандартного растворов.
Гемометр Сали состоит из штатива с матовым стеклом и трех пробирок. Две из них запаяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина (соединение гемоглобина с соляной кислотой). Стандартный раствор солянокислого гематина (гемина) обычно готовят из крови, содержащей в 1 л 166,7 или 173 г гемоглобина (указывают в паспорте прибора). В третьей - градуированной пробирке гемометра производят определение содержания гемоглобина в исследуемой крови.
Градуированная пробирка гемометра имеет одну шкалу, которая показывает количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови, т. е. концентрацию гемоглобина в грамм-процентах (г%). Для того чтобы перевести полученную цифру в единицы системы СИ (г/л) необходимо умножить ее на 10.
Для работы необходимы: гемометр Сали, скарификатор, 0,1N раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, спирт, вата, спиртовой раствор йода.
Ход работы. 1. В градуированную пробирку гемометра налить до метки 3 г% (в гемометре старого типа до метки 10) 0,1N раствор соляной кислоты.
2. Пипеткой от гемометра набрать точно 20 мм3 крови и выдуть ее на дно пробирки. Не вынимая пипетку из пробирки, сполоснуть ее соляной кислотой. Встряхивая пробирку, тщательно перемешать ее содержимое. Смеси дают постоять 5-10 мин.
3. Через 5-10 мин прибавлять по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет исследуемой жидкости не будет одинаковым с окраской стандартного раствора.
4. Отметить по шкале, на каком делении стоит уровень раствора солянокислого гематина. Полученную цифру умножить на 10. Эти цифры укажут количество гемоглобина в исследуемой крови в граммах.
Задание 3. Определение СОЭ по методу Панченкова
Для определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) используют унифицированный метод Панченкова.
В крови, предохраненной от свертывания, происходит оседание форменных элементов, в результате чего кровь разделяется на два слоя: верхний - плазма и нижний - осевшие на дно сосуда клетки крови.
Скорость, с которой оседают эритроциты, колеблется в больших пределах в зависимости от состава крови и состояния организма.
СОЭ выражают в миллиметрах в 1 ч (мм/ч). Она равняется у взрослых и здоровых мужчин 1-10 мм/ч, у здоровых (небеременных) женщин 2-15 мм/ч, у новорожденных 0,5 мм/ч.
СОЭ увеличивается при некоторых инфекционных заболеваниях, злокачественных новообразованиях, воспалительных процессах, диабете, а также при ряде физиологических состояний организма, например при беременности (достигая 45 мм/ч на IX месяце беременности). Уменьшение СОЭ отмечается при полицитемии (заболевание, сопровождающееся значительным увеличением количества эритроцитов), при брюшном тифе, вирусном гепатите и т. д.
СОЭ исследуют с помощью аппарата Панченкова. Прибор состоит из штатива и стеклянных капилляров, градуированных от 0 до 100 мм (метка 0 находится в верхней части капилляра).
Капилляр заполняют разведенной в отношении 1:4 нитратной кровью и помещают в гнездо штатива (в строго вертикальном положении) на 1 ч, после чего измеряют в миллиметрах слой плазмы над осевшими клетками крови.
Для работы необходимы: прибор Панченкова, часовое стекло, скарификатор, 5% раствор цитрата натрия, спирт, вата, спиртовой раствор йода.
Ход работы. 1. Промыть капилляр Панченкова 5% раствором цитрата натрия. Набрать этого раствора до метки 50 (Р) и выдуть его на часовое стекло.
2. Дважды набрать в капилляр кровь до метки 0 (К), используя принцип капиллярности. Выдуть кровь на часовое стекло и смешать ее с раствором цитрата натрия.
3. Промыть капилляр раствором цитрата натрия, заполнить его полученной нитратной кровью точно до метки 0 (К) и поместить в штатив строго вертикально.
4. Через 1 ч определить, на сколько миллиметров осели эритроциты.
Задание 4. Определение времени свертывания крови
