Определение группы крови стандартными сыворотками пробирочным способом

Описанный капельный метод при соблюдении всех правил и предосторожностей дает в опытных руках точные результаты и, будучи наиболее простым, является и наиболее распространенным. Однако при несоблюдении правил он легко может повести к ошибкам, почему некоторые исследователи считают его недостаточным и рекомендуют определение группы в пробирках. В некоторых лабораториях пробирочный метод введен в качестве основного.

Пробирки употребляются так называемые агглютинационные - диаметром 6-8 мм, высотой 8-10 см. Для производства реакции в штатив ставят рядом три пробирки. На каждой отмечается номер исследования и группа стандартной сыворотки, для которой пробирка предназначена. Затем в первую пробирку наливают 0,1 см3 (2 капли) сыворотки 0, во вторую пробирку - столько же сыворотки А и в третью - сыворотку В. Затем в каждую пробирку наливают по 0,2 см3 (4 капли) предварительно приготовленной 2% взвеси испытуемых эритроцитов. Каждую пробирку сильно встряхивают и через 3-5 минут подвергают центрифугированию. Последнее не обязательно, результаты реакции можно видеть и после простого стояния пробирок, но это требует больше времени.

Если производят центрифугирование, то оно должно продолжаться не менее двух минут при 2 000 оборотов в минуту. При наличии в центрифуге только малых гильз агглютинационную пробирку помещают в центрифужную, в которую перед тем налито немного воды, заполняющей свободное пространство и придающей малой пробирке необходимую устойчивость. Если же центрифуга имеет широкие гильзы, в каждую такую гильзу непосредственно можно поместить 4-6 агглютинационных пробирок. Понятно, что при таком способе пробирки должны быть хорошо отмечены во избежание путаницы в дальнейшем. Если центрифугирования не производят, пробирки оставляют стоять два часа. После центрифугирования или стояния пробирки осторожно встряхивают, тогда сразу бывает видно, образовались ли кучки или аритроциты распределились равномерно, образуя мутную взвесь, как вначале. Наличие кучек указывает на положительную реакцию, равномерная взвесь - на отрицательную. При сильной агглютинации, нередко проявляющейся вполне ясно до центрифугирования, эритроциты скучиваются на дне в один большой комок, который при умеренном потряхивании всплывает в прозрачной жидкости. При сильном встряхивании этот комок распадается на несколько более мелких комочков. При менее сильных степенях агглютинации в пробирке видны различной величины кучки, из которых более крупные после потряхивания быстро опускаются на дно пробирки, а сама сыворотка светлеет. Во всяком случае, положительный результат резко отличен от результата отрицательного, при котором после несильного встряхивания смесь делается мутной и следов кучек не видно.

Группу определяют по той же табл., которая применяется для капельного способа. Несоответствие результатов, указанное в последующей таблице, также указывает на недочеты реакции и на необходимость провести реакцию вновь.

Дополнительное определение группы крови стандартными эритроцитами

Для этого применяют те же самые методы, с той лишь разницей, что на стекло или в пробирку помещают не стандартные сыворотки, а одну и ту же сыворотку испытуемой крови - 3 капли на стекло или по 0,2 см3 в каждую из трех пробирок. К первой порции сыворотки прибавляют стандартные эритроциты группы О, ко второй - эритроциты группы А, к третьей - эритроциты группы В. Все эритроциты прибавляют в описанном выше виде и количестве, т. е. при капельном способе - по 4-5 мм³ неразведенной крови, при методе в пробирках - по 0,2 см3 2% взвеси. Наблюдение за реакцией производят совершенно так же, как описано выше.

Наличие признаков положительной реакции с эритроцитами группы 0 имеет важное значение: оно может указывать на панагглютинирующую способность сыворотки, но скорее указывает на неправильность выбора эритроцитов или на допущенную ошибку. При малейших признаках агглютинации с эритроцитами группы О всю реакцию надо повторить сначала с эритроцитами других лиц и точно установить причины образования кучек.

При оценке этой пробы нельзя забывать о возможности отсутствия изоагглютининов или об очень слабом титре их, что может служить источником ошибок. Поэтому определение группы крови только по одной сыворотке испытуемой крови никогда не может быть достаточным для выявления групповой характеристики.

Если нужно определить группу по сыворотке (или плазме) человека, то кровь можно взять из места укола в количестве 1 см³ в пробирку, где ее оставляют свертываться. При таком небольшом количестве кровь свертывается через 1-2 часа.

Центрифугирование облегчает дальнейшее отсасывание сыворотки, которую пипеткой переносят прямо на стекло, тарелку или пробирку для реакции. Эритроциты для реакции можно брать из оставшегося свертка другой пипеткой.

Если взять кровь в смеси с цитратно-солевым раствором, то слой плазмы, образовавшийся после отстаивания или центрифугирования, вполне пригоден для всех реакций.