ТЕМА: Виготовлення мікробіологічних препаратів (мазків) і фарбування їх простим засобом.

 

МЕТА ЗАНЯТТЯ:

1. Ознайомити студентів з фарбуючими розчинами, які використовуються для фарбування мазків простим засобом.

2. Засвоїти техніку виготовлення бактерійних препаратів-мазків та фарбування їх простим способом.

 

ЗМІСТ ЗАНЯТТЯ

Викладач проводить опитування студентів по минулому та наступному матеріалу, знайомить з правилами використання фарбуючих розчинів, показує техніку виготовлення препаратів-мазків з чистої культури; а також з зубного нальоту, демонструє техніку фарбування їх простим засобам.

'

САМОСТІЙНА РОБОТА СТУДЕНТІВ

Кожен студент самостійно: готує препарати з чистої культури бактерій і зубного нальоту; фарбує їх простим засобом; мікроскопує та робить малюнки у зошиті.

 

ОСНАЩЕННЯ ЗАНЯТТЯ

Забезпечити кожного студента:

- мікроскопом, предметним склом, бактеріологічною петлею, пальником, імерсійною олією, фільтрованим папером, практикумом та методичними вказівками по мікробіології; Забезпечити кожні 2-3 студента-культурою мікроорганізмів, склянкою з дезрозчином для використаних н препаратів, фарбуючи ми розчинами (метиленова синь, карболовий фуксині), олівцем по склу, ванночкою з місточком, пастерівськими піпетками; водою для промивання.

 

МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ ЗАВДАННЯ

Виготовлення препарату-мазка.

Бактерійний препарат-мазок готують на чистому знежиреному предметному склі. Знежирення здійснюється наступними засобами:

а) в розчині спирт-ефір 1:1

б) над полум'ям пальника (проводячи над полум'ям поверхню скла);

в) протиранням скла серветкою обробленою господарським милом.
Для рівномірного розподілу культури мікроорганізмів взятих з щільного поживного середовища, використовують краплину дистильованої води або фізрозчину.

Культуру мікробів розмазують бактеріологічною петлею-по склу рівномірним тонким шаром на площі 1-2см².^!При відборі культур з рідкого середовища використовують пастерівську піпетку або бактеріологічну петлю.

Відбір всього матеріалу для дослідження проводять над полум'ям пальника, бактеріологічну петлю до і після використання - пропалюють. Потім препарат висушують на повітрі при кімнатній температурі.

Наступний етап - фіксування, який виконується фізичним або хімічним методом. Хімічний метод заснований на здатності деяких речовин віднімати воду (гідрофільні властивості)— спирти, ацетон, ефіри або їх суміші. Фізичний метод - термічна обробка препарату при Т-60С, який використовується шляхом прогрівання зворотної сторони препарату (проводять 3-5 разів над полум'ям пальника). Контроль за температурою здійснюється шляхом доторкування предметного скла до тильної сторони долоні.

Фіксування препарату переслідує мету:

- Закріпити мікроби на склі.

- Вбити бактерії для запобігання зараження і забруднення мікрофлорою оточуючого середовища.

- Розруйнувати оболонку клітини для кращого проникнення фарбуючого розчину.

Фарбування. Розрізняють прості, складні і спеціальні засоби фарбування мікроорганізмів.

Просте фарбування дозволяє побачити форму і розмір бактерій, взаємне розміщення, дати родову назву чистої культури мікробних клітин. При простому засобі фарбування використовується одна фарба: карболовий фуксин (експозиція 1-2 хвилини) або метиленова синь (експозиція3-4хвилини).

Після закінчення зазначеного терміну фарбу змивають, препарат висушують фільтрованим папером і мікроскопують. Роблять малюнки у зошиті.

 

КОНТРОЛЬНІ ПИТАННЯ

1. Які матеріали необхідні для виготовлення бактерійних препаратів-мазків;

2. Які розчини використовують для фарбування бактерій;

3. Методи фіксації бактерійних препаратів і їх призначення;

4. Засоби обробки предметного скла;

5. Техніка фарбування бактерій простим методом;

6. Правила сушіння препаратів;

7. Вимоги до взяття бактеріальної культури для виготовлення мазку;

8. Методика нанесення бактеріальної культури на предметне скло, взятої з щільного і рідкого поживного середовища.

 

Заняття № 3