Определения аминотрансфераз в крови

Аминотрансферазы: аспартат- и аланинаминотрансферазы осуществляют весьма важную функцию – обратимый перенос аминогрупп с аминонокислот на кетокислоты. Содержатся во всех клетках человеческого организма (больше всего в ткани печени, мышцах сердца, скелетной мускулатуры, почках). Активность АсАТ преобладает в мышечной ткани, а АлАТ – в печени.

Наиболее часто активность аминотрансфераз исследуют с целью дифференциальной диагностики патологии печени и миокарда. Для этого определяют показатель, который называется коэффициент де Ритиса:

КдР = АсАТ / АлАТ = 1,33.

Увеличение активности аминотрансфераз наблюдается при:

· Инфаркте миокарда активность АсАТ в 95% случаев повышается (активность КК, ЛДГ при этом повышена). Возрастание происходит на 4-6 ч. с момента приступа. Оно четко выражено спустя 24-36 ч. (увеличивается в 4-5 раз выше нормы) и лишь на 3-7 сутки снижается до нормы. Отношение показателей активностей КК/АсАТ имеет высокую значимость при дифференциальной диагностике инфаркта миокарда(отношение около 5) и поражениях скелетных мышц (около 27). Коэффициент де Ритиса АсАТ/АлАТ более 1.

· Остром вирусном гепатите (АлАТ и АсАТ более чем в 100 раз). Коэффициент де Ритиса менее 1,33.

Быстрое снижение активности аминотрансфераз одновременно с возрастанием гипербилирубинемии свидетельствует об обширных некротических изменениях в ткани печени. В благоприятных ситуациях гепатита активность данных ферментов снижается медленно в течение нескольких недель и даже месяцев.

· Хроническом гепатите;

· Циррозе печени (активность повышается в 5-8 раз);

· Механической желтухе (АлАТ повышается в 50 раз долго остается повышенной, сопровождаясь возрастанием активности ЩФ, ГГТП и содержанием билирубина);

· Токсическом поражении печени;

· Легочной эмболии (активность КК при этом не повышена);

· Пораженияхмышц (мышечной дистрофии, дерматоитозит);

Снижение активности АсАТ и АлАТ наблюдаются при:

· Снижении содержания в организме витамина В_6.

· Почечной недостаточности.

Ответьте на вопросы:

1. К какому классу ферментов относятся АлАТ и АсАТ?

2. Назовите место локализации АлАТ и АсАТ.

3. Что такое коэффициент де Ритиса, как его рассчитывают, что он характеризует.

4. Назовите основные заболевания, при которых изменяется активность аминотрансфераз. Объясните причину.

5. *Напишите уравнение реакции, которую катализирует АлАТ.

6. *Назовите, какие еще ферменты изменяют свою активность при заболеваниях сердца; печени?

 

Практическая работа

«Определение активности кислой и щелочной фосфатаз

в сыворотке крови».

Цели практической работы:

· закрепить знания об изоферментах и клинико-диагностическое значении определения фосфатаз в сыворотке крови;

· научиться определять активность кислой щелочной фосфатазы в сыворотке крови.

Задания для самостоятельной работы:

1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.

2. Оборудуйте рабочее место для практической работы.

3. Выполните практическую работу.

4. Сделайте необходимые расчеты.

5. Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.

6. Сделайте вывод по работе и рисунки.

7. Ответьте на дополнительные вопросы.

Принцип:

Определение активности фосфатаз основано на способности ферментов, отщеплять неорганический фосфат от нитрофенил-фосфата в щелочной среде.

 

Реактивы. 1. Буфер, рН=10,4. 2. 4-нитрофенилфосфат. 3. NaOH 0.4 ммоль/л 4. Сыворотка.

Оборудование. 1. ФЭК, кювета на 10 мм. 2. Термостат. 3. Пробирки – 2 шт. 4. Пипетки на 1 и 5 мл. 5. Дозатор 0,02 мл

Ход определения:

Провести исследование активности фосфатаз согласно таблице.

Реактив.	Опыт, мл.	Контроль, мл.
Рабочий реактив.	1,00	1,00
Сыворотка.	0,02	-
Перемешать, проинкубировать в течение 20 минут при 300С в термостате.
NaOH	5,00	5,00

Перемешать и измерить оптическую плотность опыта (Ео) против контроля в кюветах на 10 мм, при длине волны 405 нм.

 

Расчет результатов проводим по формуле:

ЩФ, = Ео _* 812 (МЕ/л).

Норма активности фосфатаз в сыворотке крови 30 –90 МЕ/л.