Принцип метода: молочная кислота в присутствии фенолята железа (реакция Уффельмана), окрашенного в фиолетовый цвет, образует лактат железа желто-зеленого цвета.
Ход исследования. Мышцы измельчают ножницами и растирают 1 грамм их в ступке в течение 3 минут, прибавив 5 капель воды до получения гомогенной массы. Затем приливают 3 мл воды, перемешивают, сразу же фильтруют через смоченную водой вату, 25 капель фильтрата добавляют по каплям к реактиву Уффельмана (20 капель 1% раствора фенола + 2 капли 1% раствора хлорного железа до появления фиолетового цвета). В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска жидкости переходит в желто-зеленую, так как образуется лактат железа. Для сравнения проводят реакцию Уффельмана с раствором молочной кислоты и наблюдают появление желто-зеленого окрашивания.
Тема 3.2. ЦИКЛ ТРИКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ.
Вопросы для самоподготовки.
1. Перечислите вещества, в которые непосредственно превращается пировиноградная кислота.
2. Как называется процесс превращения пировиноградной кислоты в ацетил-КоА?
3. Назовите фермент, осуществляющий превращение пировиноградной кислоты в ацетил-КоА.
4. Назовите ферменты, участвующие в окислительном декарбоксилировании пировиноградной кислоты.
5. Напишите реакцию окисления пировиноградной кислоты до ацетил-КоА. Напишите схему цикла Кребса.
6. Назовите фермент, катализирующий взаимодействие щавелево-уксусной кислоты с ацетил-КоА.
7. Напишите реакцию синтеза лимонной кислоты.
8. Напишите реакцию образования изолимонной кислоты.
9. Какой фермент участвует в дегидрировании изолимонной кислоты?
10. Напишите реакцию образования α-кетоглутаровой кислоты.
11. Какие коферменты участвуют в дегидрировании α-кетоглутаровой кислоты?
12. Напишите реакцию образования сукцинил-КоА.
13. Как называется реакция превращения α-кетоглутаровой кислоты в сукцинил-КоА?
14. Назовите фермент, катализирующий превращение α-кетоглутаровой кислоты в сукцинил-КоА.
15. Назовите и напишите этап цикла трикарбоновых кислот, где протекает реакция субстратного фосфорилирования.
16. Напишите реакцию цикла трикарбоновых кислот, катализируемую сукцинатдегидрогеназой.
17. Назовите кофермент, участвующий в дегидрировании янтарной кислоты.
18. Напишите реакцию образования малата (яблочной кислоты).
19. Напишите реакцию дегидрирования малата.
20. Назовите фермент, участвующий в дегидрировании малата.
21. Назовите кофермент, входящий в состав малатдегидрогенезы.
22. Напишите формулы субстратов цикла трикарбоновых кислот, окисляемые НАД-зависимыми дегидрогеназами.
23. Проследите путь водорода от окисляемых НАД-зависимых субстратов к кислороду и оцените выход АТФ для каждой реакции.
24. Напишите формулу субстрата цикла трикарбоновых кислот, окисляемого ФАД-зависимой дегидрогеназой.
25. Проследите путь водорода от окисляемого ФАД-зависимого субстрата к кислороду и оцените выход АТФ для каждой реакции.
26. Сколько молей АТФ образуется при окислении 1 моля ацетил-КоА в цикле Кребса?
27. Сколько молей АТФ образуется при окислении 1 моля пировиноградной кислоты до углекислого газа и воды?
28. Сколько молей АТФ образуется при полном окислении глюкозы до углекислого газа и воды?
29. Сколько молей АТФ образуется непосредственно в цикле Кребса?
30. Может ли цикл Кребса протекать в анаэробных условиях? Ответ поясните.
31. Где в клетке локализованы ферменты цикла трикарбоновых кислот?
32. Может ли работа цикла трикарбоновых кислот не сопровождаться синтезом АТФ?
33. Дайте определение субстратного и окислительного фосфорилирования; укажите принципиальные различия этих процессов. Приведите примеры.
34. Биологическая роль цикла трикарбоновых кислот.
Вопросы, задачи и упражнения для самоконтроля
1. Укажите биологическую роль цикла трикарбоновых кислот.
2. Укажите этап цикла трикарбоновых кислот, где происходит субстратное фосфорилирование.
3. Назовите фермент цикла трикарбоновых кислот, катализирующий этап субстратного фосфорилирования:
1. α-кетоглутаратдегидрогеназа;
2. сукцинатдегидрогеназа;
3. сукцинил-КоА-синтетаза;
4. малатдегидрогеназа.
4. Назовите реакцию, являющуюся началом цикла Кребса:
1. 
пируват оксалоацетат;
2. 
пируват ацетил-КоА;
3. 
ацетил-КоА цитрат;
4. 
ацетил-КоА ацетоацетил-КоА.
5. В процессе окислительного декарбоксилирования образуется _________.
6. Назовите соединения, имеющие макроэргическую связь:
1. АДФ;
2. глюкозо-6-фосфат;
3. фосфоенолпируват;
4. АТФ;
5. сукцинил-КоА.
7. Сколько АТФ образуется в цикле трикарбоновых кислот в процессе субстратного фосфорилирования?
8. Сколько АТФ образуется при окислении 1 моль пирувата до углекислого газа и воды?
Литература
1. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: Высшая школа, 1989. –
С. 212-222.
2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1990. – С. 345-353.
3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 259-267.
4. Задания на самоподготовку по биологической химии.
5. Задания для самостоятельной работы студентов лечебного и медико-профилактического факультетов.
6. Тестовые задания по биохимии.
7. Лекционный материал.
8. Северин Е.С., Николаев А.Я. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – С.
9. Лабораторная работа:
