1.1 Биуретовая реакция.
К 1 мл р-ра добавляют 5-6 капель раствора NaОН и 1-2 капли р-ра CuSO4 перемешивают. Жидкость окрашивается в розово-фиолетовый цвет.
1.2 Реакция Миллона.
К 5-10 капель р-ра инсулина добавляют 2-3- капли реактива Миллона и осторожно нагревают. Образуется осадок в виде сгустка красного цвета.
1.3 Реакция Фоля.
К 5-10 капель р-ра инсулина добавляют 2-3- капли NаОН и кипятят на маленьком пламени горелки. После охлаждения добавляют 1-2 капли Рb(ОNа)2 – появляется бурое окрашивание.
ПРИМЕЧАНИЕ: Р-р Рb (ОNа)2 приготовить в отдельной пробирке. Для этого к 1 капле р-ра (СН3СОО)2Рb добавляют по каплям р-р NаОН до растворения образовавшегося осадка гидроксида свинца.
При стоянии или нагревании бурое окрашивание может усиливаться и может выпасть черный осадок.
2. Гормон щитовидной железы – обнаружение йода в препарате щитовидной железы.
Сущность метода – при гидролизе тироксина образуется йодид калия, из которого йод вытесняется йодатом калия. Выделившийся свободный йод дает с крахмалом синее окрашивание.
Ход работы: Гидролизат тироксина нейтрализуют р-ром Н2SО4, добавляя его по каплям до слабокислой реакции на лакмус. Затем добавляют 1 каплю р-ра крахмала и 1-2 капли р-ра КJО3. Выделившийся йод окрашивает жидкость в синий цвет.
3. Гормоны мозгового слоя надпочечников – адреналин.
3.1 Реакция с хлоридом железа.
В пробирку вносят 3 капли р-ра адреналина и каплю р-ра FеСl3. Появляется изумрудно – зеленое окрашивание, которое затем при добавлении 1 капли р-ра NаОН приобретает вишнево-красный цвет. Реакция обусловлена тем, что пирокатехиновое ядро образует с ионом железа (III) соединения типа фенолятов.
3.2 Диазореакция на адреналин.
В пробирку вносят 2-3 капли р-ра адреналина, 2 капли р-ра КJО3 и 2 капли р-ра СН3СООН. Перемешивают и слегка нагревают. Жидкость окрашивается в красно-фиолетовый цвет. Окраска обусловлена тем, что при взаимодействии адреналина с диазореактивом образуется азокраситель.
4. Обнаружение 17-кетостероидов в моче.
Метод основан на взаимодействии 17-кетостероидов с м-динитробензолом в щелочной среде с образованием продуктов конденсации розово-фиолетового цвета.
ХОД РАБОТЫ: В пробирку вносят 20 капель мочи и 30 капель р-ра м-динитробензола. Р-р м-динитробензола добавляют медленно, так, чтобы он стекал по стенке пробирки. Пробирку не встряхивать! Затем, также по стенке пробирки, добавляют 6 капель р-ра NаОН (спиртовый). Верхний слой жидкости окрашивается в розово-фиолетовый цвет.
Клинико-диагностическое значение метода:
Максимальная экскреция 17-кетостероидов у здоровых людей наблюдается в 25-летнем возрасте, в часы бодрствования, а также при стрессовых состояниях. При патологии содержание 17-кетостероидов меняется в зависимости от гипо- или гиперфункции надпочечников. Понижена экскреция 17-кетостероидов при гипотиреозе, тяжелых формах болезни печени, очень низка (1/5 нормы) при болезни Аддисона, а при болезни Симмондса и гипофизарном карликовом росте почти равна нулю. При наличии опухоли в надпочечниках, которая может проявляться как синдром Иценко- Кушинга или как адреногенитальный синдром, наблюдается повышенное содержание 17- кетостероидов в моче. Определение 17- кетостероидов в моче используется при эндокринных нарушениях в терапии и гинекологии, а также для контроля за функцией надпочечников при лечении кортикостероидами.
ЛИТЕРАТУРА ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ. Основная:
1. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. Учебник. – 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2002, с. 248-267, 272-297.
2. Биохимия: Учебник/Под ред. Е.С. Северина. –М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003, (Серия XXI век), с. 545-587, 597-615.
3. Николаев А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2001, с. 351-358, 368-374, 384-398.
4. Северин Е.С., Алейникова Т.Л., Осипов Е.В. Биохимия: Учебник. –М.: Медицина, 2000, с. 27-29.
5. Лекционный материал.
Дополнительная литература:
1. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами /Под ред. Члена-корренспондента РАН, проф. Е.С. Северина, проф. А.Я. Николаева. М.: ГЭОТАР-МЕД. 2001. -448 с.: ил. – (XXI век).
2. Клиническая биохимия /Под ред. В.А. Ткачука –М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. -360 с. –(Серия XXI век)
3. Клиническая биохимия /Пер. с англ. –М. –СПб.: «Издательство Бином» - «Невский Диалект» 1999. -368 с., ил.
4. Марри Р. и соавтор. ‘‘Биохимия человека’’ М.: Мир, 1993, т. 1.
