| РН «-» красный цвет | РН «+» жёлтый цвет | |||||||||||||||
| Вирус не нейтрализован диагностической противовирусной сывороткой | Вирус нейтрализован диагностической противовирусной сывороткой |
Если антигены выделенных вирусов соответствуют антителам диагностической сыворотки, то вирусы инактивируются и не вызывают инфицирования клеток культуры (ЦПД отсутствует). Живые незараженные вирусом клетки, выделяя кислые метаболиты, вызывают изменение цвета среды с малинового на желтый. В этом случае РН считается положительной, а выделенный вирус идентифицируется по диагностической сыворотке. При развитии ЦПД и сохранении красного цвета в среде культивирования клеточной культуры, РН считается отрицательной, а выделенные вирусы – неидентифицированными.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) используется для идентификации вирусов, имеющих поверхностный антиген – гемагглютинин, способный вызывать агглютинацию эритроцитов. Гемагглютинин содержат вирусы гриппа, парагриппа, бешенства, аденовирусы и др. Вирусные гемагглютинины видо- и типоспецифичны. Механизм РТГА заключается в том, что диагностические антитела - антигемагглютинины препятствуют вирусам агглютинировать эритроциты чувствительных видов животных.
В пробирках в изотоническом растворе натрия хлорида готовят двукратные разведения диагностической сыворотки (1:10, 1:20 и т.д.). Затем в каждую пробирку вносят равное количество вируссодержащей жидкости, в которой находится 4 ГАЕ вируса. Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего в каждую пробирку вносят равный объем 1 % суспензии эритроцитов. Смесь инкубируют повторно 30-60 минут при 22˚С и учитывают результаты реакции. Если вирусные гемагглютинины гомологичны антителам сыворотки, то вирус утрачивает способность склеивать эритроциты. В РТГА это происходит до тех пор, пока количество антител будет достаточным для блокады вирусных гемагглютининов. При недостатке антител агглютинирующая способность вирусов восстанавливается. Титром сыворотки называется ее наибольшее разведение, которое тормозит гемагглютинацию.
Таким образом, РТГА считается положительной, если торможение гемагглютинации наступает, а выделенный вирус типируется по диагностической сыворотке.
Напротив, если вирусные гемагглютинины не гомологичны антителам диагностической сыворотки, то вирус не утрачивает способности склеивать эритроциты. В этом случае РТГА считается отрицательной, а выделенный вирус – не идентифицированным (табл. 2).
Таблица 2.
